赤霉素G A3对贯叶连翘试管苗玻璃化现象的影响

贯叶连翘为藤黄科金丝桃属植物，多年生草本，又名贯叶金丝桃。贯叶连翘在药用和观赏方面的应用已引起了人们的广泛关注，但其野生资源种群数量少，种子数量有限，近年来作为药源，人为采挖较为严重，为有效保护野生资源，大力开展贯叶连翘的繁育工作势在必行，利用组织培养进行快速繁殖，是促进贯叶连翘良种繁育的有效途径。但贯叶连翘初代诱导过程中玻璃化问题较为严重，为解决这一问题，项目组在改善其它培养条件的基础上着重研究了不同浓度的赤霉素(GA3)对贯叶连翘试管苗分化和发育的影响，以期获得玻璃化现象的逆转。

一、材料与方法

（一）材料

4月中下旬在甘肃省小陇山林区选择无病虫害、生长正常的贯叶连翘顶部嫩梢先端2～3厘米的茎段作为繁殖材料。

（二）方法

1.赤霉素 (GA3)母液的配制 称取赤霉素GA3 0.1克，溶于1摩尔每升热的氢氧化钠溶液中，待完全溶解后转移至容量瓶中，加水定容至100毫升，即得浓度为1毫克每毫升的母液。按实验要求每次吸取（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫升母液于 1 升 MS 培养基中，即可配成含（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫克每升赤霉素GA3的MS固体培养基。

2.接种 试验材料在自来水下将其表面灰尘冲洗干净，在无菌条件下，用75%酒精浸泡30秒，无菌水冲洗3次。在含有0.1%的吐温-80的0.1%HgCl2溶液中灭菌5分钟，灭菌过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗4～5次，吸干水分。用剪刀剪出1.5厘米长茎段（含1～2节间）接种到诱导培养基中进行初代培养。

3.试验设计 初代培养基中加入2，4-D（2.0毫克每升），待愈伤组织形成后，小心切去带有生长点的愈伤组织，以MS为基本培养基，进行继代增殖，诱导芽萌发和促进芽的生长。设计6个处理（即在同样生长条件下，在培养基 MS+6-BA3.0+2，4-D2.0+GA3（单位均为毫克每升），对6种不同浓度GA3溶液（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫克每升处理的贯叶连翘，3次重复；诱导丛生芽的形成和生长，每个培养瓶植入6个单芽，每重复10瓶。30天后统计结果，统计每处理丛生芽玻璃化情况，每处理每重复随机抽取3个培养瓶，清洗掉培养基，将诱导形成的芽置于超净工作台上，采用电子游标卡尺测量不定芽自然长度，精度0.1厘米。

4.培养条件 上述培养基均添加3%蔗糖和0.7%琼脂，pH值为5.6～5.8之间，培养温度为（20±2）℃，光照强度为1000～1500LX，每日光照12小时。

5.培养及观察 接种完毕后将三角烧瓶置于26～28℃的恒温培养箱中，光照条件下培养，每天观察记录发芽情况，待幼苗长出2片子叶时，在超净台上将幼苗移植到添加有不同浓度GA3的MS固体培养基中，26～28℃继续在恒温培养箱中培养。从移植的第二天开始进行芽苗的高度的测量以及玻璃化的观察。每种浓度处理取幼苗进行测量及观察，3次重复，取其平均值。

二、结果与分析

（一）不同浓度赤霉素（GA3）溶液对贯叶连翘芽苗的影响

四周后统计结果显示，GA3具有促进贯叶连翘芽苗生长的作用，且不同浓度的GA3溶液对贯叶连翘芽苗的生长影响不同，平均芽苗高度4.53厘米，总体表现为低浓度促进生长，高浓度抑制生长，具体情况见图（1、2）。

图2 不同浓度的GA3对贯叶连翘芽苗玻璃化程度的影响

实验结果显示，本实验中对贯叶连翘芽苗玻璃化抑转最有效的GA3浓度为0.5毫克每升，低于此浓度，效果不显著，但浓度大于0.5毫克每升时，苗茎细弱，基部切口变黑，叶片皱缩，且随着浓度升高，芽苗高生长呈明显下降趋势，而降低GA3浓度可恢复正常。

（二）不同浓度赤霉素（GA3）溶液对贯叶连翘芽苗玻璃化的影响

增殖培养结果表明，在GA3的浓度分别为（0.1，0.2，0.4，0.5，0.8，1.0）毫克每升的 6 个配比进行对比试验中，不同浓度的GA3溶液的作用下，玻璃化程度差别较大，随着GA3的浓度不断增大，贯叶连翘则芽苗的玻璃化呈现中间小两头大的趋势。总体结果显示：在0.5毫克每升的GA3溶液处理下，玻璃化程度较低，芽苗分化较好。

三、结论与讨论

玻璃化苗是植物内部生理失调的外在表现，它是在试管内控制条件下培养植物的产物，玻璃化多为组培过程中措施不当造成的非遗传的生理性失调症状，是人工提供的培养基和培养条件不完全符合培养物固有需要的结果。

在贯叶连翘组培快繁实施过程中，玻璃化问题严重阻碍了试验的进程和芽苗的质量，试验发现，轻度玻璃化苗转入无添加激素的MS培养基中连续培养1～2代，可恢复正常，而主茎已完全玻璃化时则不能逆转。采用MS为基本培养基，添加不同浓度的GA3，对贯叶连翘幼苗的生长均有不同程度的促进作用，其中0.5毫克每升的GA3极显著地提高了幼苗的高度，降低了玻璃苗的比率。