保肝软胶囊对化学性肝损伤的辅助保护作用

赵麟萱，高卓林，王莹，白丽婷，赵倩倩，禹珊珊，汪平，董艺霖，金向群

（吉林大学药学院，长春 130021）

肝脏是人体内重要的代谢解毒器官[1-2]，可通过代谢清除包括酒精在内的某些化学物质、毒性物质及药物等，但肝脏也因此较易受到毒性物质的损害，造成肝损伤[3-5]。若化学性肝损伤进一步发展，则会导致肝纤维化、肝硬化，直至肝癌，严重危害人类的健康，因此由化学物质引起的肝损伤应引起足够的重视[6]。

保肝软胶囊是以葛根、肉豆蔻、栀子、沙棘4味药材为主要原料制成的保健食品。这4种均为药、食同源类药材，毒副作用小，具有显著的保肝作用[7]。葛根是中医学中经典的解酒护肝药物，含有葛根素、大豆苷、大豆苷元等功效成分，对肝脏具有明显的保护作用[8]；肉豆蔻具有消炎抗氧化的功效，可对GaIN引起的肝损伤起到预防作用[9]；栀子具有清热凉血、解酒毒的功效[10]；沙棘富含多种有机酸和黄酮类化合物等保肝活性物质[11]。4药合用可显著增强养肝、护肝的作用。

本试验采用酒精肝损伤模型，选取SPFICR级雄性小鼠（体重18～22g），分别经口给予相当于成人摄入量5、10、30倍的保肝软胶囊即0.25、0.50、1.50mg/（kg d），连续灌胃30 d，进行各项生化指标检测及组织病理学检查，研究保肝软胶囊对其化学性肝损伤小鼠体重变化以及相关生化指标的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试材 受试物保肝软胶囊，铝塑板装，外包装为纸盒，0.5 g/粒，由吉林大学提供。

雄性小鼠（50只，体重18～22 g，SPF ICR 级别）、小鼠基础饲料，长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，小鼠生产许可证号：SCXK-（吉）2011-0004，饲料生产许可证号：SCXK-（吉）2010-0001。

清洁级动物室环境设施合格证号：吉动设字10-1005号，实验动物使用许可证号：SYXK（吉）2015-0020，动物室温度20～22℃，湿度55%～65%。

1.1.2 仪器和试剂 紫外可见分光光度计（XTL-2400，上海元析仪器有限公司）；冰冻切片机（LEICA CM510）、病理显微镜（DM4000B）（德国徕卡仪器有限公司）；全自动生化分析仪（TBA-120FR，日本东芝株式会社）。

还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成科技有限公司）；甘油三酯（TG）试剂盒（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 实验动物分组及给药 小鼠适应性饲养3d，随机分为模型对照组、空白对照组及保肝软胶囊低、中、高剂量组，每组10只。3个剂量组的灌胃剂量分别按照成人摄入量的5、10、30倍设置，即分别为0.25、0.50、1.50g/（kg d）。模型和空白对照组均灌胃等体积的溶媒橄榄油，0.1mL/（10g d），连续灌胃30 d。实验结束，将模型对照组和3个剂量组1次灌胃50%乙醇（以蒸馏水稀释）0.12mL/（10g d），空白对照组给予同体积蒸馏水。禁食16h后，全部处死，取肝脏，进行各项生化指标检测及组织病理学检查。

1.2.2 肝脏组织生化指标检测 取肝脏1.0g，加生理盐水9mL，充分研磨制成10%肝匀浆。按照试剂盒提取方法对肝匀浆中丙二醛、还原型谷胱甘肽、甘油三酯及组织蛋白的含量进行测定。

1.2.3 肝脏组织病理学检查 从动物肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹Ⅲ染色，镜下观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积。每例动物肝组织用40倍物镜连续记录70个视野，每个视野根据阳性细胞（含脂滴的肝细胞）多少和分布的范围，按0、1、2、3、4分进行评分，将70个视野所得分数的平均值作为该例肝组织的脂肪染色评分。病理组织学观察以肝细胞脂肪染色作为观察指标，并根据病理改变程度“0”、“1”、“2”、“3”、“4”量化，进行肝损伤程度的评价。肝细胞脂肪染色共分为5级，评分标准见表1。

1.2.4 数据统计 用SPSS11.5软件对试验数据进行均值比较，方差齐时，各组间两两比较用LSD法；方差不齐时，各组间两两比较采用Tamhane's法。P＜0.05，表示差异显著，证明该数据具有统计学意义。

1.2.5 结果判定 肝脏MDA、还原型GSH和TG 3项检测指标的结果为阳性；肝脏MDA、还原性GSH和TG 3项指标中任2项指标为阳性和病理组织学检查结果为阳性，2种条件满足1种，即可判定受试样品对酒精性肝损伤具有辅助保护作用。

2 结果与分析

2.1 对实验动物体重的影响

各试验组及空白对照组始重、终重、增重与模型对照组比较均无显著性差异（P＞0.05），结果显示，该样品对实验动物的体重并未见明显影响。结果见表2。

2.2 对实验动物肝组织中MDA、GSH、TG含量的影响

连续给予受试物30d，取肝组织，测定10%肝匀浆中MDA、GSH、TG的含量，结果见表3。由表3可见，模型对照组脂肪变性评分与空白对照组比较有极显著性差异（P＜0.01），说明模型成立；与高剂量组比较有显著性差异（P＜0.05）；与中、低剂量组比较无显著性差异（P＞0.05）。说明高剂量组脂肪变性评分低于模型对照组。

表3 保肝软胶囊对实验动物肝组织中MDA含量的影响Table 3 Effect of hepatoprotective soft capsule on MDA content in liver tissue of experimental animals

由表3可见，模型对照组MDA、GSH、TG的含量 与空白对照组比较有显著性差异（P＜0.05），说明模型成立；其中，MDA、GSH和TG含量与高剂量组比较有显著性差异（P＜0.05），与中、低剂量组比较无显著性差异（P＞0.05），说明高剂量组有降低肝组织中MDA、TG，升高GSH含量的作用。

2.3 肝脏组织病理学检查结果

连续给予受试物30 d，取肝组织，冰冻切片，苏丹III染色，镜下观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积，结果见表4。

表4 保肝软胶囊肝脏脂肪变性评分结果Table4 Liver steatosis scoreof hepatoprotective soft capsule

3 结论与讨论

保肝软胶囊按低、中、高3种剂量连续灌胃小鼠30d，结果显示，高剂量组肝匀浆中MDA和TG含量均低于模型对照组，GSH含量高于模型对照组（P＜0.05）；高剂量组的脂肪变性评分低于模型对照组，且差异有统计学意义（P＜0.05）；实验对小鼠体重均未出现明显影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）对化学性肝损伤有辅助保护功能检验方法结果判定标准可知，保肝软胶囊对化学性肝损伤具有辅助保护功能。

肝脏在人体中发挥着重要的代谢、解毒功能。由于自然环境状况日益恶劣以及人们日常交际活动的大幅增加，我国已逐渐成为一个肝脏疾病高发的国家，对我国国民健康造成了巨大的威胁。随着人们对医疗知识的了解与保健意识的加强，人们逐渐认识到治病不如防病，人们从注重治疗转向注重预防。寻找一个疗效确切、副作用较小、易被人们接受的中药保健药物显得尤为重要。本试验所用的保肝软胶囊是一种纯中药制剂，主要用于预防与缓解化学性肝损伤，该制剂的处方是根据多年的临床经验并经过长期观察不断改进最终确定，由葛根、肉豆蔻、沙棘与栀子这4味药、食同源的中药材组成。该软胶囊功效显著、成本低廉，能够减少药物依赖性的产生，有效辅助化学性肝损伤的治疗。因此，保肝软胶囊若能够得到充分的开发利用，将使化学性肝损伤患者的生活质量得到大幅提升。