新疆裸重唇鱼胚胎发育观察与孵化技术研究*

张 齐，比拉力·艾山，李胜忠，布丽布丽汗，黄淑萍，艾力亚木·吐尔衮

（新疆农业大学动物科学学院，新疆 乌鲁木齐 830052）

新疆裸重唇鱼（Gymnodiptychus dybowskii）隶属鲤形目（Cypriniformes）、鲤科（Cyprinidae）、裸重唇鱼属（Gymnodiptychus），俗称石花鱼、裸黄瓜鱼[1]。国内主要分布于新疆天山北坡准噶尔盆地各水域和伊犁河流域；国外见于中亚地区锡尔河、巴尔喀什湖支流上游等水体[2]。新疆裸重唇鱼是一种高山冷水性经济鱼类，常见于海拔600～2000m的高山河流水域，其生活水体一般水质清澈、溶氧高且水温低[2]，是伊犁河水系中具有代表性的土著种和生态敏感种[1，3]。近几十年来，由于过度捕捞、水利工程建设、增殖放流缺失等人为因素，导致伊犁河水系的新疆裸重唇等土著鱼类的种群资源日趋枯竭，种群数量已极其稀少，2004年和2019年新疆裸重唇鱼两次被新疆维吾尔自治区人民政府列为Ⅰ类保护动物[3]。因此，尽快开展新疆裸重唇鱼繁殖方面的相关研究，促进该保护鱼类的增殖放流，对于该鱼资源的保护和养殖开发具有重要意义。

本研究拟对新疆裸厚唇鱼的受精、原肠、晶体期、破膜等孵化中胚胎发育的4个关键阶段进行观察，旨在掌握新疆裸厚唇鱼胚胎发育的规律，为新疆裸厚唇鱼繁殖时受精率、发眼率和孵化率的提高提供数据支撑和技术指导。

1 材料与方法

1.1 亲鱼来源

本研究所用新疆裸重唇鱼亲鱼采自新疆伊犁河新源县-恰甫其海水库河段。雌鱼体长范围15～25cm，平均体长18.6 cm；雄鱼体长范围4.5～8.0 cm，平均体长5.5cm。

1.2 孵化设施

平列式孵化盘材质为玻璃钢，规格为60cm×40 cm×20 cm

1.3 受精与孵化

本研究采用干法人工授精，雌雄比为2∶1或3∶1，精卵混合后搅拌和漂洗，于平列式孵化盘静水孵化，孵化水温破膜期前控制在13℃，破膜期控制在15℃，水体溶氧为8.4mg/L，NH3-N≤0.2mg/L，每天换水2次。

1.4 胚胎发育观察

所得受精卵使用显微镜观察，并及时用麦克奥迪SK－200型显微镜进行拍摄，记录不同孵化时间内胚胎发育各阶段的形态变化。本试验分为5批次进行，各批次胚胎每天观察1次，以所观察样本中有50%表现出相应发育期特征为标准作为记录时间。

2 结果与分析

2.1 胚胎发育

本研究观察和记录到了新疆裸重唇鱼胚胎发育的4个关键阶段：受精卵期、原肠期、晶体期、破膜期。在破膜期前孵化水温13 ℃，破膜期孵化水温15℃的条件下，新疆裸重唇鱼鱼苗孵化需要192h，平均孵化积温为2 516℃·h。各发育阶段所需积温见表1。

表1 新疆裸重唇鱼胚胎发育关键阶段时程

2.1.1 受精卵

新疆裸重唇鱼的卵粒呈淡黄色、透明。受精后的合子紧靠卵膜（见图1a）。

从卵子受精到合子出现所需时间为0～12 h，所需积温为78.0℃·h（见表1）。

2.1.2 原肠期

从新疆裸重唇鱼胚层下包至1/3以上时的原肠早期开始，到胚层下包至3/4时的原肠晚期结束（见图1b），所需时间为48～60 h，平均累计积温为702.2 ℃·h（见表1）。

2.1.3 晶体期

新疆裸重唇鱼胚胎的眼杯口处出现圆形的晶体且轮廓清晰，颜色较暗，为晶体期（见图1c），所需时间为120～130 h，平均累计积温为702.2℃·h（见表1）。

2.1.4 破膜期

受精163～168h时新疆裸重唇鱼胚体扭动幅度大，胚体转动频繁，表明即将进入破膜期。水温从13℃缓慢升高至15℃，促进胚体转动破膜（见图1c）。破膜时从头部开始，或尾部开始，此时平均孵化积温累计达到2516.1℃·h（见表1）。

图1 新疆裸重唇鱼胚胎发育关键阶段

表2 新疆裸重唇鱼人工孵化结果

2.2 孵化结果

从表2可以看出，本研究新疆裸重唇鱼的平均孵化率为67.3%±3.9%。

3 讨论

3.1 关于新疆裸重唇鱼胚胎发育关键阶段的认识

国内外关于鱼类胚胎发育关键阶段的研究已有许多报道。覃宝利[4]等在观察大鳞鲃胚胎发育的受精卵期时，指出正常受精卵进入低囊胚期时囊胚变低，细胞界限看不清；异常受精卵或未受精卵的胚盘也会变低，初看起来类似正常受精卵的低囊胚期。焦文龙[5]指出，当虹鳟胚胎发育至发眼期时，胚胎对外界环境因素的变化不敏感，是运输的安全期。Cмирнова[6]认为，鱼类胚胎破膜期缺氧会导致破膜过早，降低仔鱼的存活力。

本研究发现，新疆裸重唇鱼受精卵期质量好的精子卵子受精后呈现出分裂球大小均等的卵裂，而质量差的精子卵子受精后多呈现出分裂球大小不一的卵裂。均等卵裂的胚胎通常能够顺利度过原肠期，

而不均等卵裂胚胎很难度过原肠期。晶体期之前的胚胎对水体振动比较敏感，晶体期后的胚胎对水体振动有了较强的适应性。破膜期胚体头部和尾部摆动是否有力对于破膜完成非常重要。新疆裸重唇鱼胚胎发育的4个阶段的存活状况与以上国内外相关研究结果基本一致。

3.2 关于提高新疆裸重唇鱼孵化率的4项有效措施

受精卵期是胚胎发育的起始时期，也是孵化的首要阶段，该阶段的安全度过一是与亲鱼的规格、健康和营养状况有关，二是与人工授精时干燥避光无血尿污染的正确操作有关。规格偏小亲鱼的精子卵子成熟度偏小，规格偏大亲鱼的精子卵子趋向老化；健康差、营养不良亲鱼的精子卵子质量差、畸形率高；人工授精时器皿不干燥、避光不够、精子和卵子被血尿体液污染，则会导致受精前精子的失活，以及光线照射伤害精子和卵子的DNA结构。原肠期是胚胎发育的第二个关键阶段。质量好的精子和卵子受精后，往往在提供合适的溶氧、水温、pH、氨氮等水质条件时，都能正常度过原肠期阶段的胚胎发育，而质量差、畸形率高的精子和卵子即便是能够完成受精，也很难度过原肠期的胚胎发育。对于该阶段死亡的胚胎要及时捡出，避免死亡胚胎污染孵化水体和引起水霉病的发生，该阶段要减少孵化水体振动。晶体期是胚胎发育的第三个关键阶段。此时新疆裸重唇鱼胚胎发育的器官结构基本形成，胚胎对水体的振动也有了一定的适应性，苗种移殖、出售、运输可以在此阶段进行，但要注意水体的溶氧、水温、pH、氨氮等水质条件。本研究发现，新疆裸重唇鱼的发眼期本应在晶体期出现，但实际上该鱼的发眼期即眼球色素出现是在破膜期之后的某个时间，这一点与多数鱼类的胚胎发育完全不同，这可能与该鱼长期生活于高海拔水域的卵石隐蔽物下有关。

破膜期是胚胎发育的第四个关键阶段。此时新疆裸重唇鱼胚体转动频繁，但无法迅速破膜而出，导致憋死和闷死的胚胎也不在少数。本研究证实，采用破膜期适当升温的方法，可以激发新疆裸重唇鱼胚胎的兴奋性，有利于促进该鱼胚胎迅速完成头部或尾部的摆动，最终实现顺利破膜，提高孵化率。

因此，在新疆裸重唇鱼鱼苗孵化阶段，采取下述4项措施：（1）强化亲鱼的产前培育，掌握正确人工授精方法；（2）及时捡出死亡胚胎，减少振动；（3）注意孵化水体的溶氧、水温、pH、氨氮等水质条件保持；（4）破膜期适当升温，可有效提高新疆裸重唇鱼胚胎发育成活率。