miRNA-135a、TGF-α在晚期非小细胞肺癌中的表达水平及其与患者预后的关系

杨光华，向森，高冬冬，焉然

1驻马店市中心医院肿瘤内科，河南 驻马店 463000

2黄淮学院医学院，河南 驻马店 463000

肺癌是临床常见的呼吸系统恶性肿瘤，其中，非小细胞肺癌为其主要类型，早期缺乏特异性症状，多数患者就诊时已进展至中晚期，尽管放疗、化疗、生物免疫治疗等方法在不断改进，但晚期非小细胞肺癌患者的无进展生存期仍较短，这可能与晚期非小细胞肺癌复杂的发病机制有关[1-2]。相关研究发现多种生物标志物在恶性肿瘤的诊治、转移和预后判断中发挥着重要的作用[3]。近年来，基因组学和转录组学不断进步。有研究报道，微小核糖核酸（m icroRNA，miRNA）可参与细胞的分化、增殖和凋亡等多种生物学过程，其异常表达可引起细胞内稳态失去平衡，导致出现一系列的病理改变[4]。miRNA-135a是miRNA的亚型之一，已有研究证实其在体外能够促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞的增殖[5]。血清转化生长因子-α（transforming grow th factor-α，TGF-α）是表皮生长因子，主要作用于上皮细胞，与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关[6]。本研究通过分析晚期非小细胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α的表达水平与患者无疾病进展生存期的关系，旨在为临床评估晚期非小细胞肺癌患者的预后及指导临床用药提供客观依据，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年1月至2017年3月驻马店市中心医院和黄淮学院医学院收治的87例晚期非小细胞肺癌患者作为晚期非小细胞肺癌组。纳入标准：①经活体组织病理学检查证实为原发性非小细胞肺癌；②TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期；③预计生存时间在3个月以上。排除标准：①入组前4周进行了抗肿瘤治疗；②全身各系统存在明显病变。87例晚期非小细胞肺癌患者中，男51例，女36例；年龄为35～68岁，平均年龄为（56.49±8.10）岁；肿瘤直径为30～90 mm，平均肿瘤直径为（65.14±10.58）mm；鳞癌30例，腺癌57例。选择同期33例门诊健康体检者作为对照组，该组患者的血常规、尿常规、心电图和肝肾功能等均正常，既往均无急性疾病史和慢性疾病史。其中，男20例，女13例；年龄为33～69岁，平均年龄为（55.10±9.42）岁。两组患者的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经过医院医学伦理委员会的审核批准，患者均对本研究知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 资料收集与标本采集 记录晚期非小细胞肺癌患者的年龄、性别、肿瘤最大直径、分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况等信息。分别采集晚期非小细胞肺癌组患者和对照组受试者的外周血4 ml，将其放置于不含乙二胺四乙酸的试管中，在室温下放置1 h，常规离心后放置于-80℃的低温箱中保存待检。采用反转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RTPCR）检测miRNA-135a的表达水平。采用酶联免疫吸附法检测TGF-α的表达水平。参考相关文献中miRNA-135a和TGF-α的临界值，将miRNA-135a≥0.53定义为高表达，miRNA-135a＜0.53定义为低表达；将TGF-α≥14.56 pg/ml定义为高表达，TGF-α＜14.56 ng/ml定义为低表达[7-8]。

1.2.2 随访 采用电话、门诊等方式进行随访，随访时间为1年，以开始研究日期为随访起始日期，至随访结束、失访或者死亡为截止日期，计算无疾病进展生存期（指随机化至患者出现肿瘤进展或者死亡的时间）。

1.3 统计学分析

采用SPSS 18.0软件对数据进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；中位无疾病进展生存期的比较采用Log-rank检验；晚期非小细胞肺癌患者预后的影响因素分析采用Cox比例风险回归模型。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miRNA-135a、TGF-α表达水平的比较

晚期非小细胞肺癌组患者血清中miRNA-135a的表达水平明显低于对照组患者，TGF-α的表达水平明显高于对照组患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 两组受-试者血清miRNA-135a、TGF-α表达水平的比较（±s）

表1 两组受-试者血清miRNA-135a、TGF-α表达水平的比较（±s）

组别晚期非小细胞肺癌组（n=87）对照组（n=33）t值P值0.55±0.09 1.17±0.20 23.432 0.000 11.60±1.90 5.98±0.77 16.452 0.000 miRNA-135a TGF-α（ng/ml）

2.2 miRNA-135a、TGF-α表达水平与晚期非小细胞肺癌患者临床特征的关系

不同年龄、性别和肿瘤最大直径晚期非小细胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α的表达水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；不同分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况晚期非小细胞肺癌患者血清中miRNA-135a的表达水平比较，差异均有统计学意义（t=7.646、5.484、5.531，P＜0.01）。不同分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况晚期非小细胞肺癌患者的血清TGF-α水平比较，差异均有统计学意义（t=3.655、7.959、4.203，P＜0.01）。（表2）

2.3 晚期非小细胞肺癌患者预后影响因素的Cox比例风险回归模型分析

miRNA-135a和TGF-α均为具体数值。Cox比例风险回归模型分析结果显示，分化程度为低分化、TNM分期为Ⅳ期、有淋巴结转移和TGF-α高表达为晚期非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素，miRNA-135a高表达为晚期非小细胞肺癌患者预后的独立保护因素。（表3）

表2 不同临床特征晚期非小细胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α的表达水平（n =87）

表3 87例晚期非小细胞肺癌患者预后影响因素的Cox比例风险回归模型分析

2.4 晚期非小细胞肺癌患者血清中miRNA-135a、TGF-α表达水平与无疾病进展生存期的关系

随访期间，87例晚期非小细胞肺癌患者中，有26例患者死亡（其中包括miRNA-135a高表达者4例，miRNA-135a低表达者22例；TGF-α高表达者23例，TGF-α低表达者3例）。miRNA-135a低表达患者的中位无疾病进展生存期短于miRNA-135a高表达患者，TGF-α高表达患者的中位无疾病进展生存期短于TGF-α低表达患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表4）

表4 miRNA-135a、TGF-α表达水平与87例晚期非小细胞肺癌患者无疾病进展生存期的关系

3 讨论

非小细胞肺癌严重威胁着患者的健康与生命，具有发病率和病死率高的特点，而晚期非小细胞肺癌患者的无疾病进展生存情况相对较差，因此，创建完善的预后系统对患者临床治疗和生活质量的改善极为重要[9-10]。尽管临床特征对于评估晚期非小细胞肺癌患者的预后情况具有一定的参考价值，但由于受个体差异等因素的影响，预后评估结果仍存在一定的偏差[11]。病理组织标本已成为恶性肿瘤诊治的金标准，但其属有创操作，且成本较高，不利于患者耐受[12]。血液标本较组织标本具有创伤性小、成本低、可重复性高等优势，能够直观地反映机体的全身状态[13]。近年来，随着RT-PCR技术和miRNA基因芯片技术研究的不断深入，越来越多的血清生物标志物已逐渐用于肺癌患者的预后分析[14]。

miRNA为真核生物内源性小分子单链DNA，其检出谱系广，特异性高，能够避免个体之间的饮食、性别、年龄等差异。相关研究已证实，其可在多种肿瘤的形成中起到重要的作用，通过靶向调控mRNA的表达能够调节肿瘤细胞的生物学功能[15]。相关研究发现，明确miRNA类分子标志物及其重要的靶基因，可能能够在肺癌的诊治和预后的评估方面有新的突破[16-17]。miRNA-135a为miRNA的常见靶序列，能够通过激活KLF-8抑制非小细胞肺癌细胞的迁徙和转移[18]。Ahmad等[19]研究发现，miRNA-135a可下调多种促血管生长因子的表达，抑制肿瘤血管生成，控制肿瘤转移。以上研究表明miRNA-135a表达的下调或缺失与肿瘤的发生有一定的关系。本研究结果显示，晚期非小细胞肺癌组患者血清中miRNA-135a的表达水平明显低于对照组受试者，且不同分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况晚期非小细胞肺癌患者的血清miRNA-135a、TGF-α表达水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），说明通过检测miRNA-135a表达水平能够辅助诊断晚期非小细胞肺癌，反映患者临床特征。Cox比例风险回归模型分析结果显示，miRNA-135a高表达为晚期非小细胞肺癌患者预后的保护因素；且生存分析结果显示，miRNA-135a低表达患者的中位无疾病进展生存期短于miRNA-135a高表达患者（P＜0.05）。这说明miRNA-135a表达水平可一定程度地反映晚期非小细胞肺癌患者的预后。

恶性肿瘤的发生、发展是个复杂多变的过程，因此，多个指标的检测可能较单一指标更能客观地反映肿瘤的进展过程。TGF-α为有丝分裂多肽，较表皮生长因子（epidermal grow th factor，EGF）有更强的生物学效应，其可通过邻分泌、旁分泌及自分泌方式作用于靶细胞，引起肿瘤耐药，降低临床疗效[20-21]。TGF-α能够诱导正常细胞沿肿瘤细胞转化，其结合表皮生长因子受体后能够激活受体酪氨酸激酶，上调相关基因的表达，影响肿瘤微环境，导致细胞发生恶性病变[22]。本研究结果发现，晚期非小细胞肺癌组患者血清中TGF-α的表达水平相对较高，且分化程度为低分化、TNM分期为Ⅳ期、有淋巴结转移的晚期非小细胞肺癌组患者血清中TGF-α的表达水平均明显高于分化程度为中高分化、TNM分期为Ⅲ期、无淋巴结转移的晚期非小细胞肺癌组患者，提示通过检测TGF-α的表达情况，不仅能够有助于对晚期非小细胞肺癌的筛查和诊断，还可反映肿瘤的恶性程度。另外，通过随访发现，TGF-α低表达的晚期非小细胞肺癌患者的中位无疾病进展生存期较长，进一步的Cox比例风险回归模型分析结果显示TGF-α高表达为晚期非小细胞肺癌预后的独立危险因素，提示TGF-α与晚期非小细胞肺癌的预后有关。

综上所述，血清miRNA-135a、TGF-α表达异常和晚期非小细胞肺癌患者的无疾病进展生存期有关，可作为此类患者预后评估的参考指标。但本研究纳入的样本量较少，且样本选择缺乏广泛性，结果可能存在一定的偏差；另外，本研究主要分析的是血清miRNA-135a、TGF-α表达水平与患者无疾病进展生存期的关系，其与患者预后的关系仍有待后续研究进一步证实。