九制黄精炮制工艺研究

陈志敏，胡昌江*，胡麟

黄精始载于《名医别录》[1]，为百合科植物滇黄精PolygonatumkingianumColl.etHemsl.、黄精PolygonatumsibiricumRed.或多花黄精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根茎[2]。生黄精有麻舌感，且刺激咽喉，通过炮制不仅增强了黄精的补脾润肺益肾的功能，还可以去除麻舌感，避免刺激咽喉。自古以来有关黄精炮制方法较多，但均以九蒸九晒为主流。九制黄精作为川帮重要的炮制品，具有巨大的药用及保健价值，但由于其操作工艺复杂且缺乏明确的工艺参数，限制了工业大生产，导致市场九制黄精几近失传。现四川省中药饮片炮制规范所载制黄精为蒸制5～8小时，缺乏完整工艺参数。因此，有必要对九制黄精的炮制工艺进行研究，使九制黄精适用于工业化生产工艺，更好地传承炮制技艺。

1 材料

1.1 仪器

UV-1100紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；BP211D电子天平（感量0.01 mg），BS200S电子天平（感量0.001 g），德国Sartorius公司；正德牌远红外可控温电炉（功率45～2000W）；不锈钢手提式高压灭菌锅（型号：YX-280B，执行标准：YZB-皖0037-2005）。

1.2 试剂与试药

黄精药材购于荷花池药材市场，经成都中医药大学胡昌江教授鉴定为滇黄精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.的干燥根茎，各检查项均符合药典规定，药材质量合格，可用于炮制工艺和药效学的研究。黑豆购于温江菜市场，经成都中医药大学胡昌江教授鉴定为豆科植物大豆Glycine max（L.）Merr.的干燥成熟种子。D-无水葡萄糖（批号：110833-201506）、黄精对照药材（批号：121341-201404）、滇黄精对照药材（批号：120998-201004）和黄精（制）对照药材（批号：121553-201202），中国食品药品检定研究院。95%乙醇、正丁醇、甲醇、石油醚（60-90℃）、乙酸乙酯、甲酸、香草醛、硫酸、蒽酮，均购于成都科龙化工试剂厂。

2 方法与结果

2.1 浸出物的测定

按《中国药典》2015年版通则2201热浸法对水溶性和醇溶性（以稀乙醇作溶剂）浸出物进行测定。

2.2 多糖含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备…取经105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.03291 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含无水葡萄糖0.3291 mg）。

2.2.2 标准曲线的制备…精密量取对照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，各加水至2.0 mL，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2 %蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10分钟，取出，立即置冰水浴中冷却10分钟，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法（通则0401），在582 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度（mg．mL-1）为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程为：Y=24.899X+0.0479，r=0.9992。结果表明葡萄糖在0.003291～0.019746 mg．mL-1范围内线性关系良好。

2.2.3 供试液制备及测定…取60 ℃干燥至恒重的样品细粉约0.25 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10 mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取1 mL，置10 mL具塞干燥试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量（mg），计算，即得。

2.3 总糖含量测定[3]

2.3.1 对照品溶液的制备…取干燥至恒重的葡萄糖对照品50.05 mg，置50 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解定容至刻度，摇匀即得（每1 mL中含无水葡萄糖1.001 mg）。精密量取对照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1 mL用蒸馏水定容至10 mL，即得每l mL含葡萄糖为0.01001，0.02002，0.04004，0.06006，0.08008，0.1001 mg的对照液，备用。

2.3.2 标准曲线的制备…精密量取对照品溶液各2 mL置具塞刻度试管中，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液5 mL，混匀，放冷后置水浴中保温10 min，取出，再置冰水浴中冷却5 min，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法，在620 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度（ug．mL-1）为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程为：Y=23.204X+0.0070，r=0.9991。结果表明葡萄糖在0.00286～0.0286 mg．mL-1范围内线性关系良好。

2.3.3 供试液制备及测定…取样品粉末约各1 g，精密称定，加入蒸馏水50 mL，超声提取两次，每次30 min，静置10 min，滤过，合并滤液，浓缩并定容至50 mL，精密吸取供试液1 mL，用蒸馏水定容至10 mL得供试液。精密吸取2.3.3项下供试液2 mL，置具塞干燥试管中，照2.3.2项下的方法，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。

2.4 九制黄精的传统工艺还原

参考九制黄精的传统制备方法：黄精用量20%的黑豆熬汁，分为九份，第一次取一份黑豆汁用水稀释后与黄精药材拌匀，润至透心，圆气后蒸至数小时（蒸制过程注意收集黄精汁），取出晒至微干，第二份黑豆汁再以收集的黄精汁液稀释后拌入（十分重要，此步关系黄精内在成分含量），混匀，再蒸再晒，如此反复九次蒸至内外呈滋润黑色，切制干燥即得。在每蒸晒一次的过程中都留下一份样品，分别定名为一制黄精、二制黄精、……、九制黄精。九制黄精由于工艺繁琐，费时费力，生产周期长，消耗燃料多，并且在蒸制过程中药汁易流失，不适于大生产，因此生产该炮制品的厂家日益减少，处于濒临灭绝的境地，故市场上该炮制品种严重匮乏。

表1 生黄精～一至九制黄精的含量测定（n=3）

结果表明：黄精蒸制后，水、醇浸出物含量均有增加，说明黄精经炮制后，药物的成分溶出增多，利于其药效的发挥，且其浸出物随蒸制时间延长而递增。一至九制黄精的多糖含量随着蒸晒次数的增多而减少，总糖的含量随着蒸晒次数的先增多后降低，这可能是因为蒸制使多糖大量水解，增加了溶解率，随后的降低可能是多糖水解产生了大量的单糖和游离氨基酸，游离氨基与还原糖生成糖胺，经Amadori重排形成Amadori中间产物，该中间产物继续反应最终形成呋喃和5-HMF[4]。

2.5 九制黄精改高压工艺研究

在单因素和文献查阅的基础上，以外观性状、浸出物、多糖、总糖等为实验指标，按L9(34)正交实验考察压制温度、时间和次数，优选高压蒸制黄精的工艺，因素水平见表2。

表2 正交实验因素及水平设计

根据所测成分在黄精中的重要性对试验进行综合评分，糖类成分是黄精的主要成分，且多糖为《中国药典》规定的黄精的指标成分；而浸出物可以判断黄精的煎出率，又因外观性状是对黄精炮制鉴别的传统方法。因此，考虑多糖30%、总糖25%、水溶性浸出物 20%、醇溶性浸出物 20%、外观性状5%的权重，于是每号试验的综合评分=多糖隶属度×30%+单糖及低聚糖隶属度×25%+水浸出物隶属度×20%+醇浸出物隶属度×20%+外观形状及×5%，满分为 1.00。结果见表3、表4。

表3 正交试验设计表及结果

6 69.33 71.89 7.28 57.66 8 0.43 7 75.77 78.86 7.68 64.24 9 0.99 8 72.11 76.54 7.57 61.57 8 0.76 9 69.98 71.01 7.23 54.57 8 0.35 K1 0.21 0.46 0.55 K2 0.76 0.54 0.42 K3 0.33 0.30 0.34 R 0.55 0.24 0.21

表4 方差分析表

由表4中极差R值可知，各因素的作用为：A＞B＞C，方差分析可知因素A、B和C均对试验结果有显著性影响。根据A因素水平的均数估计，因综合评分指标越大越好，水平2的均数值0.76最大，故A因素取水平2好。类似分析B因素取水平2均可，C因素取水平1好，为A2B2C1，即九制黄精的最佳工艺为120 ℃高压，2 h，压制一次即可。

2.6 验证试验

按照上述黄精的最佳炮制工艺，取另外购买批次黄精200 g，加入20%的黑豆熬汁，润透，120 ℃高压压制2 h，取出切成小丁状，烘箱干燥，制成高压黄精饮片。所获饮片表面黑色，有光泽。中心深褐色，质柔韧，味甜，嚼之黏性足的成品。实验室泡服，口感好，无生品的副作用，并与生品和传统方法相比较，高压黄精与九制黄精差异不大，且糖类含量较高，表明工艺操作简便，合理可控。结果见表5。

表 5 高压黄精和传统九制黄精质量对比

3 讨论

黄精药食同源，具有极高的食疗和药疗价值，并被诸家养生所推崇[5]。黑豆享有“豆中之王”[6]的美称，其诸多作用与黄精现代药理作用相似，利用黑豆九制黄精，可使有效成分富集，增强疗效。九制黄精，是黄精以黑豆汁为辅料，经九蒸九晒后，不仅可以破坏粘液质以消除“戟人咽喉”的副作用，而且可以转变药性，利于有效成分积累，使其滋而不腻，增强补肝肾作用。

传统九制黄精炮制方法费工耗时，同时化学成分损失严重，虽消除刺激性也带走很多有效成分。本文对其进行高压工艺改革，优选出新的炮制工艺，其操作简便省时，有利于工业化大生产。但还未进行系统全面的药效学验证，尚需进一步深入分析。