不同方法提取颍半夏挥发油化学成分的气相色谱-质谱联用法分析*

彭加兵，严安定，陈昆鹏，张治静，沙曼琪，崔 斌

（安徽医科大学附属阜阳医院药剂科，安徽 阜阳 236000）

半夏Pinelliae ternata（Thunb.）Breit.属天南星科，块茎入药，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结功效，用于湿痰寒痰、咳喘痰多、痰饮眩悸、风痰眩晕、痰厥头痛、呕吐反胃、胸脘痞闷、梅核气，外治痈肿痰核［1］。半夏具有抗炎、抗菌、抗肿瘤作用，以及平喘、镇咳、祛痰、止呕、抗溃疡、抗腹泻、抑制胰蛋白酶、调节胃肠功能、调血脂、镇静催眠、护肝等作用［2-4］。其主要化学成分有挥发油、生物碱、淀粉、氨基酸、甾醇类、芳香族成分、有机酸类、蛋白、鞣质、核苷、黄酮类及多种微量元素等［5-8］。颍半夏因产于安徽古颍州府（现阜阳地区阜南县、颍上县）一带而得名，为半夏的道地品种。目前，有关颍半夏的研究集中在药理作用、质量评价、产地加工方面［9-12］，其挥发油化学成分的相关研究尚未见报道。本研究中采用水蒸气蒸馏法、同时蒸馏萃取法和乙醚提取法提取颍半夏挥发油及其成分，并比较其差异，为进一步认识和利用该植物资源提供依据。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：7890A-5975C型气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）；NHW型电热套（河南博爱科技有限公司）；MP31001型电子天平（上海舜宇恒平科技仪器有限公司）。

试药：颍半夏块茎，2017年12月采集于安徽省颍上县夏桥镇，由安徽医科大学附属阜阳医院严安定副主任中药师鉴定为正品；乙醚、无水硫酸钠、丙酮均为分析纯，均购于西陇化工股份有限公司；水为超纯水。

图1 同时蒸馏萃取法提取挥发油成分总离子流色谱图

图2 乙醚提取法提取挥发油成分总离子流色谱图

2 方法与结果

2.1 挥发油提取

水蒸气蒸馏法：称取捣碎颍半夏干燥块茎300 g，置1 000 mL烧瓶中，加入超纯水500 mL，加热蒸馏10 h，索氏提取器中未见油状液体。

同时蒸馏萃取法：称取捣碎颍半夏干燥块茎300 g，置1 000 mL烧瓶中，加入超纯水500 mL，用同时蒸馏萃取装置，即水蒸气蒸馏、乙醚萃取10 h，乙醚蒸去后得淡黄色透明液体，有香味，即为挥发油。用无水硫酸钠干燥后，称定质量4.0 g，挥发油得率为1.33%，加丙酮定容，用0.22 μm有机滤膜过滤，置2 mL容量瓶中，待测。

乙醚提取法：称取捣碎颍半夏干燥块茎300 g，置1 000 mL烧瓶中，加乙醚500 mL，反复蒸馏提取1 h，将提取液再减压蒸馏，蒸去乙醚后得淡黄色透明液体，有香味，符合挥发油外观性状，即为挥发油。取挥发油，用无水硫酸钠干燥后，称定质量 5.0 g，挥发油得率为1.67% ，加丙酮定容，用 0.22 μm 有机滤膜过滤，置2 mL容量瓶中，待测。

2.2 分析条件

2.2.1 气相色谱条件

色谱柱：DB-5 型石英毛细管柱（250 μm×0.25 μm，30.0m）；载气：高纯氦气（99.999%）；柱流量：1.0mL ／min；汽化室温度：250℃。升温程序：从40℃开始，以10℃ ／min的速率升至 250℃，保持 10 min；分流比：40∶1；进样量：1.0 μL。

2.2.2 质谱条件

电离方式：电子轰击（EI）；电子能量：70 eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；进样口温度：250℃；质量 扫 描范围（m／z）：40～350 amu，全扫描方式 ，NIST11质谱库。

2.3 总离子流图和各化学成分相对含量测定

在拟订条件下，对颍半夏挥发油进行GC-MS联用法分析，获得总离子流图，详见图1和图2。结合总离子流色谱图、保留时间、NIST 11库和相关文献，鉴定颍半夏挥发油化学成分；通过峰面积归一化法计算各化学成分的相对含量。结果见表1和表2。

2.4 化学成分分析

由图1和表1可知，采用同时蒸馏萃取法提取颍半夏挥发油共鉴定出13个化学成分，占颍半夏挥发油总量的66.41%，相对含量最高的为9，12-十八碳二烯酸乙酯。由图2和表2可知，采用乙醚提取法提取挥发油确认了其中的11种化学成分，所鉴定的组分占总挥发油的55.36%，其中相对含量最高的为二十四烷。

表1 同时蒸馏萃取法提取颍半夏挥发油化学成分及相对含量

表2 乙醚提取法提取颍半夏挥发油化学成分及相对含量

2.5 化学成分种类分析

由表1可知，采用同时蒸馏萃取法共鉴定出13个化学成分，包括 6 个酯类（46.20%）、3 个烷烃类（6.16%）、2 个杂硅氧类（5.76% ）、1 个酚类（3.98% ）、1 个酮类（4.31%）。由表2可知，采用乙醚提取法提取挥发油共确认11个化学成分，包括6个烷烃类（29.48%）、3个酯类 （13.79% ）、1 个酮类（9.57% ）、1 个 杂 硅 氧 类（2.52%）。从化学结构类型来看，同时蒸馏萃取法提取鉴定的化学成分主要为酯类，乙醚提取法提取确定的化学成分主要为烃类。

2.6 相同化学成分分析

由表1和表2可知，2种提取方法提取的相同化学成分为7个，但相对含量不同。相同化学成分分别为4-羟基-4-甲基-2-戊酮、十四甲基环七硅氧烷、邻苯二甲酸二丁酯、十六烷酸乙酯、9，12-十八碳二烯酸乙酯、二十烷和二十五烷。

2.7 特有化学成分分析

由表1和表2可知，同时蒸馏萃取法提取的特有化学成分有6个，即十二甲基环己硅氧烷、2，6-二叔丁基对甲酚、邻苯二甲酸异丁基辛酯、十六烷酸甲酯、γ-榄香烯和反-10，顺-12-十八碳二烯酸甲酯。乙醚提取法提取的特有化学成分有4个，即十八烷、十九烷、二十四烷和二十六烷。

3 讨论

按2015年版《中国药典（一部）》提取植物挥发油的方法，常用水蒸气蒸馏法提取颍半夏的挥发油，提取10 h后，索氏提取器中未见油状液体，可能是因为提取的温度太高，挥发油溶于水中而无法得到，蒸馏萃取法和乙醚提取法均得到颍半夏挥发油。故不建议使用水蒸气蒸馏法提取颍半夏的挥发油。

同时蒸馏萃取法挥发油得率为1.33%，乙醚提取法挥发油得率为1.67%，后者得率略高于前者。同时蒸馏萃取法提取鉴定的化学成分主要为酯类，相对含量最高的为9，12-十八碳二烯酸乙酯；乙醚提取法提取确定的化学成分主要为烃类，相对含量最高的为二十四烷。2种方法提取颍半夏的挥发油成分有差异，实际应用中应综合考虑挥发油得率、相对含量、有效成分、工业成本和操作难度等因素选择合适的提取方法。