几种常见动物疫病的化验室诊断

席冬丽

随着对动物检疫工作的发展与完善，仅依靠兽医的经验检查已经不能满足现今动物疫病诊断的需求，因此，病理化验室开始发挥重要作用。如蓝耳病的病原学检测方式需要采集病猪的扁桃体、淋巴结、肺、肝、脾等，利用10%的中性福尔马林进行固定，经过石蜡切片、HE染色之后使用光镜对样本进行病理学组织检查得出结论，又如猪瘟的病理学检查方式主要有免疫荧光实验、酶联免疫吸附实验、核酸探针技术、基因芯片检测技术等。笔者通过对口蹄疫、猪丹毒、旋毛虫、巴氏杆菌、猪链球菌等病原学检测进行详细描述，着重分析集中常见动物疫病的化验室诊断过程。

1猪丹毒化验室诊断方式

1.1涂片镜检

采集相关检测组织之后将其用瑞氏染色法、革兰氏染色法进行染色，镜检过程中可在组织上发现细小的杆菌，杆菌菌体呈现或弯或直的状态，常单独、成对或大量聚集，尤其在白细胞内或白细胞周围常能发现大量菌体，具有较为明显的诊断意义。采集动物的肾脏、脾脏组织制作抹片检查出菌体的概率最高。

1.2分离培养

采集新鲜组织之后可将其直接接种于血液琼脂或血清琼脂培养基础上，保持培养温度在37°C左右，培养时间约为24～48小时，培养后明显可见培养基表面出现透明的露滴状微小菌落，在普通琼脂培养基上生长状态较为贫瘠。在肉汤内表现出程度较轻的浑浊状态，会出现少量的灰白色粘稠状沉淀物，明胶不会液化，生长状态呈现试管刷状态生长。

1.3动物接种

采集新鲜组织加生理盐水制作成为组织悬液，比例为1：10，还可利用肉汤培养物接种，主要实验动物为鸽子或小白鼠。组织悬液在鸽子胸肌注射量为0.5ml～1.0ml，小白鼠皮下注射量為0.2ml;纯菌液在鸽子胸肌的注射量为0.5ml，在小白鼠皮下的注射量为0.1ml。接种时间为3～4小时之后，实验动物出现死亡状态。将死亡动物的心脏血液或脏器组织制作成为涂片镜检，若发现猪丹毒杆菌即可确诊该疫病。

2旋毛虫化验室检测方式

2.1采集样品

从死亡动物身上采集左右横膈膜肌角，重量在20g以上，使其编码与死亡动物的尸体保持一致，将样品送入化验室进行检查。

2.2观察（肉眼）

送来的样品首先使用肉眼进行检查，如在样品上课件淡白色、灰白色呈微尘状的小点，则认为该组织疑有旋毛虫，需要对病变组织制片进行镜检。

2.3制片

用化验室内的弓形剪刀沿样品肌理取下可疑部位，并在其他部位取下其他小样，每种越需要12块（共24块），将所取小样粘贴在夹压器的玻璃板上，盖上盖玻片压扁并保证螺旋扭紧固定，使压片保持能看到报纸上小字的状态。

2.4镜检

将已准备好的压片放置在50～70倍放大的低倍显微镜下，或使用旋毛虫检验器对其进行观察，仔细检查每一个小肉块，绝对不能漏下任何一个样品。

3巴氏杆菌病化验室检测方式

3.1涂片镜检

使用无菌手段从得病或死亡动物身上采集新鲜组织作为检查样品。血液制作成推片或涂片，其他部分制作触片或涂片，使用瑞氏染色法、美兰染色法完成染色工作，若样品内含有巴氏杆菌，镜检后可发现组织内存在卵圆形或球杆状的菌体，菌体两端染色较浓，呈现出两级着色状态，若使用革兰氏染色法则为阴性。

3.2分离培养

将选择的样品组织置于鲜血琼脂平板、琼脂斜面与普通的肉汤（温度保持在37°C）中，培养时间为24小时。培养后血琼脂平板上出现细小、湿润、圆整且微带闪光的灰白色露滴状菌落，在45°折射光线低倍镜检查后呈现蓝绿色，且该菌落会呈现微微的金光，菌落周边若呈现红黄光带则为FG型菌落。琼脂斜板上会出现光滑湿润的灰白色菌落，肉汤内则会出现程度较轻的浑浊状态。若菌株较粗糙则会出现絮状沉淀。

3.3动物接种

从得病或死亡动物身上采集的新鲜组织与生理盐水混合，制成1：5或1：10的乳剂，吸取定量上清液或肉汤培养物接种在接受实验的小动物肌肉中、皮下，剂量大约为0.5ml～1ml，以实验动物的体型为准。猪巴氏杆菌对小白鼠、兔子表现出感染性，注射后约18～24小时内会出现死亡;鸡巴氏杆菌对所有的实验动物均表现出强烈的感染性，注射后10～24小时内会出现死亡;牛便是杆菌对兔子与小白鼠有感染性，但仅表现在腹腔注射，注射后18～24小时之内死亡;羊巴氏杆菌对兔子的感染性最强。实验动物受影响死亡之后，应采集其心脏血液或其他器官制作涂片进行检查或对其组织进行分离培养，一旦满足上述情况，便可确诊为巴氏杆菌。

4猪链球菌病化验室检测方式

4.1涂片镜检

从得病或死亡动物身上采集的新鲜组织使用革兰氏染色法进行染色，之后对其镜检，若该动物已患有链球菌病，会出现大量单独、成对或三五相连的革兰氏阳性球菌，甚至会有30～70个单球相接后呈长链状。若使用瑞氏染色法可看见菌体周围出现明显的荚膜。

4.2分离培养

从得病或死亡动物身上采集的新鲜组织至于培养基中，普通琼脂的斜面上会出现生长状态较为贫瘠，灰白色半透明状的露滴菌落;血液琼脂上则出现粘稠状、光滑且边缘整齐的半透明露滴菌落，该菌落周围出现明显的B型溶血环;马丁肉汤内最开始表现出较为均匀的浑浊状态，约48小时左右之后浑浊物开始下降，而液体逐渐变得清亮。

4.3动物接种

将从得病或死亡动物身上采集的新鲜组织制作成为5～10倍的生理盐水悬液，或使用纯菌液接种在兔子、小白鼠身上。生理盐水悬液在兔子腹腔内注射的剂量为1.0ml～2.0ml，在皮下注射的剂量为2ml;生理盐水悬液在小白鼠身上注射的剂量为0.2～0.3ml;纯菌液在兔子身上注射的剂量为0.5ml～1ml，皮下注射剂量为1ml。接种后，兔子在12～26小时之内死亡，而小白鼠于18～24小时之内死亡。接种动物死亡之后，对其心脏血液、腹水、肝脏抹片、脾脏抹片等会进行镜检，若发现有大量单独、成对或三五相连的球菌，则为链球菌病。

（作者单位：474350河南省南阳市内乡县动物疫病预防控制中心）