老年重症肺炎患者血磷与免疫状态相关性研究

刘雪凯 刘 晨 辛 勤 陈 涛 梁国威

肺部感染是老年人最常见的疾病之一，因肺炎死亡患者中老年患者约占70%[1]。且有研究指出，危重症患者常伴有不同程度的电解质紊乱[2～5]。而磷是人体必需的常量元素之一，临床上低磷血症的发生率为0.34%～3.10%[6]。老年重症肺炎患者群体中极易多发低磷血症，并与患者预后密切相关[7～10]。淋巴细胞亚群检测也是重症肺炎治疗和预后判断的重要辅助手段[11]。淋巴细胞亚群包括T细胞、B细胞和NK细胞3类。T细胞亚群又分为辅助性T淋巴细胞和抑制性T淋巴细胞，其特征分别为表达CD4+和CD8+簇分化抗原。正常情况下，淋巴细胞各亚群处于正常水平，且CD4+T细胞和CD8+T细胞保持着动态平衡，二者比值在正常范围内浮动。通过对淋巴细胞的绝对计数、百分比计算以及CD4+/CD8+比值的计算，可获得患者的免疫状态信息。

本研究旨在通过检测老年重症肺炎患者的血清磷水平和淋巴细胞亚群状态，探索二者的变化规律及有无相关性，并研究伴有和不伴有低磷血症重症肺炎患者的免疫状态是否存在差异，从而为临床诊治和预后判断提供参考依据，为进而尝试纠正低磷血症能否改善预后的实验提供理论基础。

对象与方法

1.研究对象：选取2017年1～4月来自航天中心医院的老年重症肺炎患者85例(诊断标准见2016年《中国成人社区获得性肺炎诊断和治疗指南》[12])。其中低磷血症组(血磷<0.8mmol/L)42例，患者年龄61～91岁，中位年龄82岁，非低磷血症组43例，患者年龄62～93岁，中位年龄82岁。健康对照者：选取同期航天中心医院健康体检者30例，年龄65～82岁，中位年龄75岁。均无感染及呼吸系统疾病。

2.研究方法：(1)仪器与试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的BriCyte E6流式细胞仪及原装配套抗体、溶血剂和质控物。抗体包括T淋巴细胞抗体试剂：CD3-FITC/CD8-PE/CD45-perCP/CD4-APC；B淋巴细胞抗体试剂：CD3-FITC/CD16+CD56-PE/ CD45-PerCP/CD19-APC。贝克曼库尔特实验系统(苏州)有限公司生产的AU5800全自动生化分析仪。(2)标本采集：采集患者及健康对照者清晨空腹状态下EDTA-K2抗凝静脉全血标本2ml及静脉血5ml以惰性分离胶采血管采集，取血后迅速混匀。(3)标本检测：生化检测：惰性分离胶采血管离心后，在全自动生化分析仪器上机检测血清无机磷；淋巴细胞亚群检测：采用全血免洗法，上机后流式细胞仪自动设门检测CD3+T细胞、CD4+T细胞(CD3+CD4+)、CD8+T细胞(CD3+CD8+)、B淋巴细胞(CD19+)和NK细胞(CD3-CD16+56+)占淋巴细胞总数的百分比及其绝对值，绝对值测量方法为体积法。CD4+/CD8+比值为计算值。

结 果

1.3组血清磷和淋巴细胞亚群百分比:结果详见表1。3组之间血磷比较，差异有统计学意义。低磷血症组CD4+%和CD4+/CD8+显著低于非低磷血症组和正常对照组，而非低磷血症组和正常对照组比较，差异无统计学意义。详见表2。

2.3组血清磷和淋巴细胞亚群绝对值:结果详见表3。3组之间CD3+和CD4+细胞绝对值比较，差异有统计学意义。重症肺炎患者无论磷高低与否CD8+、B细胞和NK细胞绝对值均显著低于正常对照组。详见表4。

3.重症肺炎患者血清磷和CD4+/CD8+比值：具有显著相关性(r=0.626,P=0.000)。

表1 3组患者血清磷和淋巴细胞亚群百分比结果

表2 低磷血症组、非低磷血症组和正常对照组血清磷和淋巴细胞亚群百分比差异性分析

表3 3组患者淋巴细胞亚群绝对值结果(个/微升)

表4 低磷血症组、非低磷血症组和正常对照组淋巴细胞亚群绝对值差异性分析

讨 论

人体中磷元素含量丰富，可作为细胞结构成分，参与体内普遍的磷酸化反应以及参与人体能量供给相关反应等。造成低磷血症的原因有很多，如急慢性肾衰竭、心功能不全、多器官功能障碍及静脉血液滤过等。有研究发现，危重症患者低磷血症的发生率可高达44.8%，低磷血症可以引起多器官衰竭，影响患者预后[13]。本实验中，老年重症肺炎患者根据其血磷水平分为低磷血症组和非低磷血症组，3组间血磷水平比较差异有统计学意义，低磷血症组显著低于非低磷血症组，非低磷血症组显著低于对照组，说明重症肺炎病人的血磷水平普遍低于正常人群。

淋巴细胞是人体免疫功能的重要执行者，由免疫器官产生，按其迁移率、簇分化抗原和功能的差异可分为T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)。淋巴细胞亚群的测定是了解人体免疫功能、状态和平衡水平的主要指标。健康状态下，人体内各种淋巴细胞及其亚群相互作用，维持机体正常免疫功能。当受其他因素影响，淋巴细胞及其亚群的数量或比例异常时，免疫功能会受到破坏并可能导致一系列疾病的发生。T淋巴细胞(CD3+)负责细胞免疫功能，在抗细胞内感染、肿瘤细胞清除、排斥反应等方面发挥作用，并对体液免疫具有辅助功能。辅助性T细胞(Th，CD4+CD8-)具有辅助其他免疫细胞分化和调节免疫应答的作用；抑制性T细胞(Ts，CD4-CD8+)可以抑制Th细胞的活性，从而间接抑制B细胞的分化以及杀伤性T细胞的功能，达到负向调控体液免疫和细胞免疫功能的作用。因此，CD4+/CD8+比值可协助判断免疫功能是否处于平衡状态[14]。NK无需致敏就可以非特异性地杀伤靶细胞， B淋巴细胞可以产生抗体，特异性地结合抗原，担负体内体液免疫。

本研究中低磷血症组老年重症肺炎患者外周血中CD3+T淋巴细胞绝对值、CD4+T细胞绝对值及其百分比、CD8+T细胞绝对值及其百分比、CD4+/CD8+比值、B淋巴细胞绝对值、NK细胞绝对值均显著低于对照组水平。这说明伴有低磷血症的老年重症肺炎患者免疫水平降低，免疫细胞数量减少；CD4+/CD8+比值显著降低说明该群体免疫功能处于紊乱状态。

非低磷血症组老年重症肺炎患者外周血中CD3+T淋巴细胞绝对值、CD4+T细胞绝对值、CD8+T细胞绝对值、B淋巴细胞绝对值、NK细胞绝对值均显著低于对照组水平，这表明不伴有低磷血症的老年重症肺炎患者外周血主要免疫细胞数量与健康人群相比显著偏低，虽百分比比较差异无统计学意义，但作为相对数据不如绝对值准确，所以该组人群仍然处于免疫功能低下状态。

低磷血症组老年重症肺炎患者外周血中T淋巴细胞绝对值、CD4+T细胞绝对值及其百分比、CD8+T细胞百分比、CD4+/CD8+比值与非低磷血症组老年重症肺炎患者群体水平比较，差异有统计学意义。T淋巴细胞绝对值和CD4+T细胞绝对值的低下是伴有低磷血症的老年重症肺炎患者群体较之不伴有低磷血症的老年重症肺炎患者群体免疫功能紊乱的根本原因。老年重症肺炎患者(包括低磷和非低磷组)B淋巴细胞和NK细胞的绝对值和百分比与对照组相比显著降低，这提示B淋巴细胞和NK细胞的数量下降或许是老年重症肺炎患者的普遍状况。另外，对照组的分析中，CD4+/CD8+比值虽然处于参考区间内，但也是低值水平，这也与老年人免疫功能减低的普遍认识一致。研究发现，老年重症肺炎患者血清无机磷和CD4+/CD8+比值具有相关性(P=0.000)，相关系数为0.626。这说明老年重症肺炎患者的血清磷水平越低下，CD4+/CD8+比值越低，免疫功能越处于紊乱状态。

综上所述，老年重症肺炎患者免疫功能状态紊乱，而近来很多研究表明，免疫治疗可以提高重症肺炎患者的免疫功能改善预后[15～17]。本研究显示伴有低磷血症的患者免疫功能紊乱更为明显，笔者今后通过研究纠正低磷血症促进患者免疫功能的恢复以改善预后。