猪蓝耳病灭活与弱毒疫苗免疫效力的比较实验

李文淼

大兴区猪蓝耳病免疫主要使用高致病性猪蓝耳病活疫苗（JXA1-R株）和猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC-JXA1株）。本实验选用未免疫过任何疫苗的断奶仔猪60头作为实验对象。实验猪分为3组，每组20头;按免疫程序依次注射弱毒苗、灭活苗和生理盐水。实验猪免疫后每隔半个月采样称重一次，共三个月。样品采用间接ELISA的方法诊断和定量检测猪繁殖和呼吸综合征抗体。通结果如下：与猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗相比，高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗可产生较好的免疫抗体滴度，且免疫抗体维持时间较长。

一、材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验地点及实验动物筛选

大兴某种猪场3栋实验猪舍。

选用猪场自繁自养的长白断奶仔猪60头，公猪17头，母猪43头。临床检查健康。均未免疫过猪蓝耳病灭活疫苗，且猪蓝耳病抗体检测为阴性。

1.1.2实验疫苗

两种疫苗均由实验猪场提供。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株），生产厂家：A厂家;规格：20头份/瓶

猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗（NVDC-JXA1株），生产厂家B厂家;规格：50ml/瓶

1.1.3实验主要试剂

主要试剂为LSI猪繁殖和呼吸综合征抗体检测试剂盒。来源：北京天之泰生物科技有限公司;规格：96孔板*5;产地：法国

1.1.4 实验用主要设备：

BioTek ELX800酶标仪（产地：美国）

BioTek EX50洗板机（产地：美国）

1.2实验方法

1.2.1实验分组

按照注射蓝耳病疫苗的不同随机分为3组，每组20头;分别在相对隔离的环境饲养，直到实验结束。

弱毒疫苗组：公猪5头，母猪15头。实验猪注射高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗，免疫日期为8月7日（根据免疫程序免疫，断奶前后首免，首免后4个月加强免疫一次，每次免疫注射疫苗一头份）。

灭活疫苗组：公猪5头，母猪15头。实验猪注射猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗，首次免疫日期为8月7日，二次免疫日期为9月5日（根据免疫程序免疫，断奶前后首免，首免后4周加强免疫一次，每次免疫注射疫苗2ml）。

对照组：公猪7头，母猪13头。实验猪注射生理盐水，每次免疫注射生理盐水2ml，首次免疫日期为8月7日。

注：实验猪根据猪场实际情况按程序注射除蓝耳病疫苗以外的其他疫苗。

1.2.2采血称重计划

首次免疫后每隔半个月采血并称重一次，每次采血60份，每份血液样品5ml，共检测9次，检测时间为三个月。

1.2.3蓝耳病抗体检测

本实验的实验室检测采用间接ELISA的方法检测猪繁殖和呼吸综合征抗体。

二、结果与分析

2.1免疫后临床症状观察

免疫后60天，有3头实验猪（弱毒疫苗组1头，灭活疫苗组2头）再采血后出现精神萎靡、食欲下降、生长减缓等情况，诊断为频繁采血所致的应激反应。大部分实验猪在注射疫苗后的90天内，临床观察健康。

2.2对实验猪增重的影响

免疫前分别计算每组20头实验猪的平均体重：弱毒疫苗组（30日龄）的平均体重为7.4Kg;灭活疫苗组（30日龄）的平均体重为7.7Kg;对照组（30日龄）的平均体重为7.5Kg。免疫后每半个月称重一次，计算每组的平均体重和平均日增重.

2.3蓝耳病抗体检测结果

根据实验采样计划，用ELISA试剂盒对实验猪进行蓝耳病抗体的监测，记录每次检测结果，免疫后抗体检测阳性数、阳性率、均值结果。

2.3.1抗体检测阳性头数比较结果

结果表明：弱毒疫苗组免疫后检测抗体阳性个数随时间变化逐渐升高，免疫后60天达到20头，并持续到免疫后90天。灭活疫苗组免疫后45天检测抗体阳性个数到达峰值11头，随后出现下降趋势，到免疫后90天为8头。对照组持续为0头。

2.3.2抗体检测阳性率比较结果.

结果表明：活疫苗首免后30天抗体阳性率≥70%，免疫后60天，抗体阳性率达到100%并持续到免疫后90天;而相同毒株的灭活疫苗首免后30天抗体阳性率仅为30%，二免后30天抗体阳性率仅为50%，整个实验期，灭活疫苗免疫抗体阳性率≤55%，免疫效果远低于活疫苗。

2.3.3抗体检测阳性均值比较结果

结果表明：弱毒疫苗组免疫后抗体检测均值随时间变化逐渐升高，到免疫后90天达到2.289。灭活疫苗组抗体检测均值最高出现在免疫后60天，达到0.532，到免疫后90天下降到0.491。

弱毒疫苗组与灭活疫苗组及对照組相比，免疫后各阶段的检测抗体阳性头数、阳性率和抗体均值都高于灭活疫苗组及对照组，且差异极显著。（p<0.01）

灭活疫苗组与对照组相比，免疫后各阶段的检测抗体阳性头数、阳性率和抗体均值都高于对照组，且差异极显著（p<0.01）。

三、讨论

通过猪蓝耳病灭活与弱毒疫苗免疫效力的比较实验得出的结果可见，注射高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的实验组免疫后各阶段的检测抗体阳性头数、阳性率和抗体均值都高于灭活疫苗组。

疫苗毒株经充分致弱后，安全性和稳定性方面都有所增强，在猪体内连续6代毒力不返强，可安全使用。在整个实验过程中持续对实验猪进行临床症状观察，至实验结束注射高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、灭活疫苗和对照组实验猪只未发生死亡，结果说明高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、灭活疫苗都有很好的安全性。

综上所述，一是高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与灭活疫苗相比，活疫苗有较高的免疫抗体滴度。二是，高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与灭活疫苗相比，活疫苗产生的保护抗体持续时间更长。

（作者单位：102600北京市大兴区动物疾病控制中心）