广州地区急性呼吸道感染住院儿童人博卡病毒流行病学分析

蔡勇 陈德晖 刘文宽 梁文雅 刘升 周荣 王丹瑜 蒋惠

1广州医科大学附属第一医院儿科（广州510120）；2呼吸疾病国家重点实验室，国家呼吸系统疾病

临床医学研究中心，广州呼吸健康研究院，广州医科大学附属第一医院，广州医科大学（广州510230）；3赣南医学院（江西赣州341000）

人博卡病毒（human bocavirus，HBoV）是一种单链DNA病毒，属细小病毒科［1］。12%肺炎患儿血清HBoV-IgG抗体4倍以上增高，且超过一半的患儿为单纯HBoV感染，提示HBoV是呼吸道感染的独立致病原［2］。HBoV是近年新发现病毒，迄今关于急性呼吸道感染（acute respiratory infection，ARI）患儿HBoV的流行病学报道较少，为了解广州地区ARI住院儿童HBoV的流行病学特征、指导HBoV的防治、防范院内交叉感染，笔者分析了1 168例ARI住院患儿HBoV的流行病学特征，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象2015年1月至2015年12月广州医科大学附属第一医院儿科住院部ARI患儿共1 168例，其中男723例，女445例；≤0.5岁216例，＞0.5岁且≤1岁310例，＞1岁且≤3岁357例，＞3岁且≤6岁174例，＞6岁111例。春季（3～5月）229例，夏季（6～8月）374例，秋季（9～11月）280例，冬季（12月～次年2月）285例。ARI诊断标准参考《诸福棠实用儿科学》第7版［3］。

1.2 标本采集及处理患儿入院当天或第2天清晨收集标本。将拭子放入无菌生理盐水中湿润（湿润的拭子比干燥的拭子能沾取更多的细胞，禁止将拭子放入病毒运输液中湿润拭子）；由检查者用压舌板辅助，将咽拭子越过舌根，到达咽峡部，反复涂抹数次，取出时避免接触舌及口腔黏膜等；将拭子投入含2.5 mL病毒运送液的15 mL管中，折断拭杆，使拭子完全置于管中；旋紧管盖，做好标记；采集的咽拭子保存于2～8℃病毒运输液中，运输至呼吸疾病国家重点实验室。漩涡震荡5～ 10 s；3 000 r/min离心10 min；吸取上清1.8 mL至冻存管中，-80℃保存备用；重悬剩下的培养基及沉淀，吸取120 μL至含有480 μL A液的离心管中用于核酸提取，剩下的样品保存于另一个冻存管中，-80℃保存备用。

1.3 标本核酸提取使用ABC核酸提取试剂盒（广州呼研所医药科技有限公司）提取核酸。步骤如下：在1.5 mL离心管中加入480 μL A液+120 μL样本，充分混匀，放置5 min；加入600 μL B液，13 000 r/min离心10 min，弃上清；往沉淀中加入500 μL C液，13 000 r/min离心5 min，弃上清；室温晾干；加入120 μL DEPC水，震荡，充分溶解核酸。

1.4 检测试剂准备使用荧光PCR检测试剂盒检测 HBoV、HMPV、infA、infB、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、PIV4、ADV、HRV、EV、CoV（广州呼研所医药科技有限公司）。根据试剂说明配制25 μL反应体系至PCR八排管中（Axygen），进行扩增反应。反应配制方法：反应液 19.3 μL，逆转录酶0.5 μL，Taq 0.2 μL，样品核酸提取物5 μL，轻轻混匀后准备上机检测。

1.5 荧光定量PCR检测采用核酸扩增技术检测呼吸道病毒［4］。使用ABI7500荧光定量PCR仪（Applied Biosystems）检测，根据试剂盒说明书采用统一反应条件如下：48℃5 min；94℃2 min；循环条件94℃ 10 s、55℃35 s，循环数40个。根据试剂说明书判定结果。

1.6 统计学方法采用SPSS 17.0统计软件进行分析，计数资料用百分率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

本组患儿总病毒检出率42.6%（497/1 168），HBoV检出率2.5%（29/1 168）。HBoV与其他病毒混合检出率44.8%（13/29），分别为HBoV+RSV5例，HBoV+EV2例、HBoV+HRV 2例，HBoV+PIV3 1例、HBoV+ADV1例，HBoV+RSV+HMPV 1例、HBoV+PIV3+HRV 1例；其中46.2%（6/13）合并RSV感染。不同年龄段患儿病毒检出率见表1。患儿病毒检出率大致呈现随年龄增长降低的趋势（χ2=42.965，P＜0.01）。不同年龄段患儿HBoV检出率差异存在统计学意义（χ2=10.073，P＜0.05）。不同季节病毒检出率见表2。春季病毒检出率最高，其次为冬季，不同季节间病毒检出率比较差异有统计学意义（χ2=30.471，P＜0.05）。不同季节HBoV检出率差异无统计学意义（χ2=6.91，P＞0.05）。HBoV阳性的患儿中27例临床诊断为支气管肺炎，2例为支气管炎。

3 讨论

ARI是儿童常见病，病毒是常见病原体。本组患儿病毒检出率42.6%，提示广州地区ARI住院患儿常存在病毒感染。本组患儿HBoV检出率（2.5%），较苏州（6.19%）［5］、兰州（8.2%）［6］、南京（8.3%）［7］、乌鲁木齐（8.38%）［8］、上海（4.6%）［9］低。前述数据提示广州ARI住院儿童HBoV感染率低，不同地区ARI住院儿童HBoV感染率不同。本组患儿HBoV与其他病毒混合检出率44.8%，以RSV最常见（46.2%）。苏州ARI住院儿童HBoV与其他病毒混合检出率19.31%，以RSV最常见［5］。上海ARI住院儿童HBoV与其他病毒混合检出率66.7%，最常见的是 ADV［9］。兰州 ARI住院儿童HBoV与其他病毒混合检出率69.8%［6］。南京ARI住院儿童HBoV与其他病毒混合检出率57.6%，前2位病原体依次为MP、RSV［7］。澳大利亚ARI住院儿童HBoV与其他病毒混合检出率55.6%，最常见的是RSV［10］。39.1%德国HBoV阳性呼吸道感染儿童合并RSV感染［11］。大部分流行病学观察发现HBoV常与其他病原混合感染，以RSV最常见。

表1 不同年龄ARI住院患儿病毒分布情况Tab.1 The age distribution of viruses in hospitalized children with ARI 例（%）

表2 不同季节ARI住院患儿病毒分布情况Tab.2 The seasens distribution of viruses in hospitalized children with ARI 例（%）

ARI住院儿童HBoV检出高峰年龄段集中在0.5 ～ 3 岁（P＜ 0.05），与文献报道相似［5，7-8，11-13］。0.5～3岁儿童胎传抗体降低、而自身免疫功能发育尚不成熟，故这个年龄段患儿易于感染病毒。

本组患儿HBoV呈四季散发，无明显季节性。兰州以4、12月检出率高，但无明显季节性［14］。南京除5月外其他月份都有散发，无明显季节性［7］。苏州全年均存在感染，以夏秋季高发［5］。乌鲁木齐全年散发，以冬春季为主［8］。瑞典［1］、法国［15］HBoV感染高峰期是11月至次年3月，日本则是4～ 6月，5月阳性率最高［16］。不同国家、不同地区ARI住院患儿HBoV季节分布的差异可能与不同地区气候环境不同有关。

综上所述，广州地区ARI住院患儿HBoV检出率低，常与其他病毒混合感染，其中以RSV最多见；0.5～3岁儿童是感染重点人群，临床医生应重视HBoV的检测及防治。迄今关于ARI住院患儿HBoV的流行病学报道较少，本研究分析了广州ARI住院儿童HBoV的流行病学特征，为指导HBoV的防治、防范院内交叉感染提供了流行病学依据。