清热解毒片(胶囊)中异性有机物的筛查研究分析

张府君,冯 贞,甄会贤,程侯连,张 妤

(1山西药科职业学院中药系,太原 030031;2山西省食品药品检验所中药室;*通讯作者,E-mail:115517706@qq.com)

清热解毒片收载于2015年版《中国药典》一部中的成方制剂,由生石膏、金银花、玄参、地黄、连翘、栀子、甜地丁、黄芩、龙胆、板蓝根、知母、麦冬十二味中药组成,具清热解毒功效,处方由连翘、黄芩粉碎成细粉;其余生石膏等十味加水煎煮三次,第一次温浸2 h后煎煮1.5 h,第二次1.5 h,第三次1 h。煎液滤过,合并滤液,浓缩成稠膏,加入上述细粉,混匀,干燥,粉碎成细粉,制粒,加1%硬脂酸镁混匀,压片,包糖衣或薄膜衣[1]。

因清热解毒片(胶囊)为浸膏或部分浸膏投料,且片剂标准由《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册变更为《中国药典》2010年版第三增补本和《中国药典》2015年版一部,新增了栀子中栀子苷含量测定项目,标准变化较大[2,3],由于栀子苷水煎煮提取转移率仅10%左右,存在添加生粉的可能,因此有必要对所有固体剂型的样品进行了异性有机物检查的初筛。

1 仪器、试剂与试药

1.1 仪器与试剂

显微镜(OLYPUS DP73),数码相机(CANON G11),离心机(赛多利斯G-26C),水合氯醛为分析纯。

1.2 试药

药材:栀子药材,经山西药科职业学院制药工程系杨红教授鉴定为符合《中国药典》标准。

样品:181批次样品,包括片剂和胶囊剂2个剂型,涉及14家生产企业,均为市售,清热解毒片(胶囊)抽样基本信息见表1。

阴性样品:来源于A药业、B药业、C药业3个生产企业各1批次样品,并经验证未检出栀子药材组织特征(见图1,2)。其中,图1为栀子药材粉末显微特征典型图谱(×400倍),图2为未加入栀子生粉前的阴性样品的显微特征典型图谱(×100倍),除黄芩、连翘组织特征外,未检出其他植物组织特征。

表1 清热解毒片(胶囊)抽样基本信息

Table 1 The sampled essential information of Qingre Jiedu tablet or capsule

序号生产企业 剂型与规格抽样批数1广西玉林方特药业有限责任公司 糖衣片22哈尔滨大洋制药股份有限公司 糖衣片13河南省奥林特药业有限公司 薄膜衣片44河南省康华药业股份有限公司 糖衣片15河南宛东药业有限公司 糖衣片16黑龙江澳利达奈德制药有限公司 薄膜衣片57黑龙江省林宝药业有限责任公司 糖衣片28陕西嘉力药业有限公司 糖衣片29陕西盘龙药业集团股份有限公司 糖衣片8 薄膜衣片210陕西紫光辰济药业有限公司 糖衣片911商丘市金马药业有限公司 糖衣片3112江西银涛药业有限公司 硬胶囊1113陕西步长制药有限公司 硬胶囊7014石药集团欧意药业有限公司 软胶囊32

图1 栀子药材粉末显微特征典型图谱(×400)

图2 未加入栀子生粉前不同厂家三批阴性样品的显微特征典型图谱

2 方法与结果

2.1 供试品的制备

清热解毒片(胶囊)处方中栀子药材为水煎煮提取后以浸膏投料,应不得检出栀子的可见植物组织。

依据《中国药典》2015年版一部清热解毒片鉴别项下(1)的标准进行筛查[1]。标准为取本品,置显微镜下观察:韧皮纤维淡黄色,梭形,壁厚,孔沟细(黄芩)。石细胞单个散在或成群,长条形、类圆形或长圆形,层纹及纹孔明显,壁厚薄不一(连翘)。

取本品2片,除去包衣,研细,称取细粉0.1 g,加水10 ml使溶解,离心,弃去上清液,沉淀加水2 ml使溶解,摇匀,吸取混悬液1滴于载玻片上,加水合氯醛1滴,加热透化,置显微镜100倍下,在盖玻片上按下图位置选取9个检查点检视(见图3),视野中不得检出栀子的组织特征[4]。如仅有1个检查点视野中检出,在依法制片复试1次,初、复试检出栀子组织特征的检查点不得超过1个。

图3 盖玻片上检查点示意图

2.2 掺入不同比例栀子粉末的阴性样品验证

采用阴性样品,即来源于A药业、B药业、C药业3个生产企业各1批次样品,并经验证未检出栀子药材组织特征。三批次阴性样品分别加入10%,15%,20%,30%栀子处方量的栀子药材细粉,混匀后制片,置显微镜下观察。

当加入10%栀子生粉后,显微镜下结果为:A药业(20160301)1号片(×100倍)9个点均未检出栀子组织特征,A药业(20160301)2号片(×100倍)有1个点检出栀子组织特征;B药业(20160621)1号片(×100倍)有9个点均未检出栀子组织特征,B药业(20160621)2号片(×100倍)有3个点检出栀子组织特征;C药业(20160402)3号片(×100倍)有9个点均未检出栀子组织特征,C药业(20160402)1号片(×100倍)有2个点检出栀子组织特征(见图4)。结果表明,当加入量为10%栀子生粉时,显微镜下可见栀子的组织特征,按九点法检查,有1个点可检出异性有机物的检出率约50%。

图4 加入10%栀子生粉样品的显微特征典型图谱

当加入15%栀子生粉后,显微镜下结果为:A药业(20160301)2号片(×100倍)有1个点检出栀子组织特征,A药业(20160301)3号片(×100倍)有3个点检出栀子组织特征;B药业(20160621)1号片(×100倍)有2个点检出栀子组织特征,B药业(20160621)2号片(×100倍)有3个点检出栀子组织特征;C药业(20160402)1号片(×100倍)有1个点检出栀子组织特征,C药业(20160402)2号片(×100倍)有3个点检出栀子组织特征(见图5)。结果表明,当加入15%栀子生粉后,显微镜下可见栀子的组织特征,按九点法检查,每张片基本均有1个点检出异性有机物。

图5 加入15%栀子生粉样品的显微特征典型图谱

当加入20%栀子生粉后,显微镜下结果为:A药业(20160301)1号片(×100倍)有4个点检出栀子组织特征,A药业(20160301)6号片(×100倍)有3个点检出栀子组织特征;B药业(20160621)1号片(×100倍)有4个点检出栀子组织特征,B药业(20160621)2号片(×100倍)有2个点检出栀子组织特征;C药业(20160402)1号片(×100倍)有4个点检出栀子组织特征,C药业(20160402)2号片(×100倍)有3个点检出栀子组织特征(见图6)。

当加入30%栀子生粉后,显微镜下结果为:A药业(20160301)1号片(×100倍)有4个点检出栀子组织特征;A药业(20160301)2号片(×100倍)有4个点检出栀子组织特征(见图7)。

结果表明,当加入量为20%及以上栀子生粉时,显微镜下易见栀子的组织特征,九点法中每张片均有2个及以上的点检出异性有机物。

最终确定,当加入15%及以上的栀子粉末后,基本上判定为检出异性有机物。

2.3 对181批次样品进行筛查

清热解毒片(胶囊)在显微鉴别项标准检验过程中，发现部分批次片剂样品除检出标准规定的黄芩、连翘显微组织特征外，还检出按标准[制法]项规定不应有的栀子的显微组织特征，为此对本次抽样的181批次样品按上述异性有机物检查方法进行了显微鉴别筛查。

图6 加入20%栀子生粉样品的显微特征典型图谱

图7 加入30%栀子生粉样品的显微特征典型图谱

筛查结果表明，其中81批次硬胶囊、32批次软胶囊和11批次薄膜衣片显微检验结果均未见其他植物组织特征，未出现异常；57批次糖衣片样品中，有31批次样品检出栀子的显微组织特征(种皮石细胞、内果皮纤维、内果皮石细胞和簇晶、方晶等)，即每张片均有1个及以上的检查点检出异性有机物种皮石细胞、内果皮石细胞、内果皮纤维，为栀子的组织特征。这31批次样品涉及三家生产企业，为了进一步证实样品中存在的栀子药材组织特征可能来源和加入量，采用阴性样品中加入不同比例的栀子粉末进行验证，并参照牛黄解毒片补充检验方法中异性有机物检查方法对结果作判定[5],结果见图8。

图8 部分样品中检出异性有机物典型图谱 (×400)

3 讨论

在本实验研究中,其中J药业在本次抽样中共被抽取31批次样品,10批次样品执行没有收载栀子中栀子苷含量控制的《卫生部药品标准》中药成方制剂二十册,显微鉴别均未检出栀子的组织特征;而执行增加了栀子中栀子苷含量控制的《中国药典2010版第三增补本》或《中国药典》2015版一部的21批次样品,显微鉴别均检出栀子的组织特征。增加异性有机物检查可以有效防止个别生产企业擅自改变生产工艺或不使用不符合规定的伪劣药材投料[6]。由此可见,提高质量标准可以更好地控制相关生产企业可能存在的违规生产问题,也充分说明了增加栀子组织检查的非常有意义。另一方面,虽然质量标准已经提高,但仍然有少部分药企未按现行有效标准规定的工艺生产,以致清热解毒片(胶囊)的质量仍存在问题,呼吁合格的药是生产出来的,制药企业要严格按照规定生产,保证药品的质量,以确保人民群众用药的安全有效。