麝香壮骨膏局部皮肤刺激性及过敏性实验研究

许艳茹,石 菊,展 月,李 敏,王雅俪,徐 建*

(1.吉林修正药业新药开发有限公司 吉林省中药标准化关键工程技术重点实验室,吉林 长春130012；2.修正药业集团股份有限公司,吉林 通化134000)

麝香壮骨膏药方源于《黄帝内经》,已经有两千多年的应用历史[1]。处方由麝香、薄荷脑、冰片等十七味药材组成,具有镇痛、消炎的功效,临床用于风湿痛、关节痛等病症的治疗。皮肤外用药的种类较多,主要包括硬膏剂、软膏剂、贴剂、气雾剂等剂型,但近年来外用中药致敏的临床事件时有发生。因此,在新药临床前安全性评价中,中药刺激性、致敏性的研究备受关注[2-4]。本研究对麝香壮骨膏的皮肤刺激性及致敏性进行研究,为其临床安全用药提供实验依据。

1 动物与试剂

1.1 动物

新西兰种白兔,雌雄各半,体重(2.5±0.5)kg；豚鼠,雌雄兼有,体重(250±20)g,均由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供。

1.2 药物与试剂

麝香壮骨膏、阴性基质贴均由修正药业集团股份有限公司提供,批号：20170905、20170912。致敏对照药：2,4-二硝基氯苯(批号：W5656,山东西亚化学股份有限公司)。

2 方法

2.1 皮肤刺激性实验

2.1.1 单次给药皮肤刺激性 取健康大白兔10只,雌雄各半,单笼饲养,随机分成两组,即完整皮肤组和破损皮肤组,每组5只,应用同体左右侧自身对比法。各组大白兔于给药前24 h将其背部脊柱两侧毛剪掉(避免使用化学脱毛,减少化学刺激),去毛面积约3 cm×3 cm。破损皮肤组给药前将各兔背部去毛区用0#砂纸擦至皮肤表面出现小渗血点为度。兔背部脊柱左侧为受试药组,右侧为阴性对照组,分别给予麝香壮骨膏和基质对照物(2.5cm×2.5cm),贴敷后随即用医用胶带缠绕固定,24h后去除药物并用温水清洁皮肤,分别于1、24、48、72 h用肉眼观察并记录用药部位有无水肿和红斑等刺激性现象。并按照表1标准进行评分,评价单次给药皮肤刺激性强度。

2.1.2 多次给药皮肤刺激性 分组及皮肤处理方法同单次给药皮肤刺激性实验。每日给药1次,用医用胶带缠绕固定,保持6 h,连续给药14 d。每日给药前用肉眼观察并记录用药部位有无水肿和红斑等刺激性现象,并进行评分。停药后分别于1、24、48、72h观察皮肤的刺激反应。评分及评价标准见表1、表2。

表1 皮肤刺激反应评分标准

表2 皮肤刺激强度评价标准

2.2 过敏性实验

取豚鼠30只,雌雄各半,随机分为3组：受试药组、阴性对照(基质)组、阳性对照组(1%DNCB),每组10只。实验前先将豚鼠背部左侧部位脱毛,面积约为3 cm×3 cm,用于致敏涂敷。Buehler试验在第0、7和14天局部给药以诱导,受试药组给予麝香壮骨膏2.5 cm×2.5 cm,阴性对照组给予等面积基质贴,阳性药对照组给予1%2,4二硝基氯苯0.2 m L,贴敷于豚鼠左侧脱毛区后用医用胶带缠绕固定,给药6 h后去除药物。在第27天将豚鼠背部右侧部位脱毛,面积约为3 cm×3 cm,在第28天采用诱导给药方法贴敷药物6 h以局部激发。去除药物观察,并于24、48、72 h再次观察皮肤过敏反应情况。皮肤过敏反应程度按表3、表4标准评分,并评价致敏程度,计算过敏反应发生率。除皮肤局部过敏反应外,还应观察豚鼠是否出现哮喘、站立不稳或休克等严重全身性过敏反应。

表3 皮肤过敏反应评分标准

表4 皮肤过敏性评价标准

2.3 数据处理

按照皮肤刺激反应评分标准进行评分,反应平均分值=(红斑形成总分+水肿形成总分)/动物总数,判断皮肤刺激强度。按照皮肤过敏反应评分标准进行评分,致敏率(%)=发生过敏动物数/合计动物数×100%。

3 结果

3.1 单次皮肤刺激性

家兔单次给药对完整皮肤无明显刺激性,破损皮肤在给药后24 h有轻度刺激性,但在48h和72h后刺激性消失。结果见表5。

表5 家兔单次给药皮肤刺激性评分

3.2 多次皮肤刺激性

多次连续给药对家兔完整皮肤无明显刺激性,对破损皮肤有轻度刺激性,个别出现勉强可见的轻度红斑,但均在72 h内消失,均未见色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄、水肿现象发生,按照评价标准判定为轻度刺激性。结果见表6、图1。

表6 家兔多次给药皮肤刺激性评分

3.3 过敏性实验

在激发给药后6～72 h内,受试药组、阴性对照组豚鼠皮肤未见过敏现象,也未出现哮喘、站立不稳或休克等严重全身性过敏反应。结果见表7、图2。

表7 豚鼠皮肤过敏反应评分

图1 不同时间皮肤刺激性

图2 过敏性实验结果

4 讨论

麝香壮骨膏作为复方外用制剂,其是否会引起皮肤的刺激和过敏反应尚未见报道。为确保其安全性,根据国家食品药品监督管理局发布的技术指导原则及文献方法[5-8],本实验研究了麝香壮骨膏对家兔的皮肤刺激性和豚鼠的皮肤过敏反应。本品在给药初期家兔破损皮肤肉眼可见轻度刺激性,药物去除后症状逐渐消失,实验中可见基质制剂对兔破损皮肤的轻度刺激。豚鼠Buehler法致敏实验[9-10]结果为阴性,表明本品不会引起豚鼠的皮肤过敏反应。杨超等[11]进行了与本实验相似的制剂对破损家兔皮肤的刺激性和过敏性研究,取得了相似的结果,分析原因可能与基质辅料中残留的水溶性蛋白质、松香中的树脂酸等因素有关。此外,该种外用制剂多会添加保湿剂、防腐剂等,亦会造成潜在的危害[12-13]。

本研究结果提示,麝香壮骨膏未见完整皮肤刺激性和过敏性反应,但破损皮肤应避免使用橡胶膏剂,为其临床安全使用提供了参考依据。