乳腺小叶增生筛选方外用对乳腺增生大鼠乳腺形态学及动情间期血清E2、P、PRL 的影响

缪 霓，王 群*，王珊珊，贡翊斐，王小平，蔡惠群，张 宇

（1.上海中医药大学附属市中医临床医学院，上海 200071；2.上海中医药大学附属上海市中医医院，上海 200071）

乳腺增生病是乳房部一种既非炎症亦非肿瘤的疾病，以经前乳房胀痛及不同程度的乳房肿块为特征，是育龄期女性常见的乳房疾病。目前认为，卵巢内分泌激素失调是本病的主要原因。乳腺小叶增生筛选方（淫羊藿、巴戟天、香附、莪术、柴胡等）是我院临床应用于乳腺增生病的外治经验方，临床效果反映良好。课题组的前期研究表明，应用苯甲酸雌二醇序贯黄体酮肌注可以复制大鼠乳腺增生病模型，外用药物13天后各组大鼠乳腺腺泡面积和导管内径之间无差异，已呈现复旧状态[1]。据研究[2]表明，大鼠正常动情周期在4～5天左右，课题组考虑去除外源性性激素13天后，大鼠可能已经经历了将近3个正常的动情周期。因此，课题组将本次实验取样时间提前，分别在用药5天、10天取样，评价外用中药对模型大鼠动情间期性激素水平的影响以及乳头直径的影响，为外用中药应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

清洁级SD大鼠60只，雌性未孕，8周龄，体重（160±20）g；上海杰思捷实验动物有限公司提供（动物许可证号：SCXK（沪）2013-0006）。于标准动物房内常规饲养14d，自由饮水进食，使平均体重达200g以上。

1.1.2 外用中药

仙灵脾、巴戟天、柴胡、制香附、莪术等中药配方颗粒（由四川新绿色药业科技发展有限公司提供，批号170311）。

1.1.3 实验试剂

苯甲酸雌二醇注射液（生产公司：四川金科药业有限责任公司，批号：20160301）；黄体酮注射液（生产公司：广州白云山明兴至要有限公司）。

1.1.4 实验仪器

正置光学显微镜；台式高速冷冻离心机；摄像镜头（EVILEYE手机微距镜头）。

1.2 随机分组

将60只大鼠称重后，由轻至重编号，再通过随机数字表法将大鼠随机分为对照组、模型组、用药组，每组各20只。

1.3 造模方法

模型组及用药组参考黄月玲等[3]的研究建立模型，具体方法：予大鼠后肢外侧肌肉注射苯甲酸雌二醇(剂量为0.5 mg/kg/d)连续20天序贯黄体酮（5 mg/kg/d）连续5天，共25天复制模型。对照组每日在后肢外侧肌肉注射0.9%生理盐水0.2 ml，连续25d。各组大鼠从实验开始每日观察大鼠阴道涂片，记录动情期变化。

1.4 干预方法

大鼠外用药物剂量按照成人70 kg每日所服药量换算，根据大鼠体重计算出当日药量，电子天平称取每日所需总剂量，加蒸馏水搅拌均匀后形成黏稠状药糊，等分后涂抹于1×1 cm纱布上，覆盖在大鼠第三对乳房上。淀粉糊精贴敷剂制作及使用方法同上。从干预治疗周期开始用药，对照组及模型组给予淀粉糊精贴敷，用药组给予药糊贴敷，每次上药后用自制缚带将大鼠第三对乳房缠绕，每日贴敷8小时以上，连续10天；大鼠单笼饲养，防止相互啃咬。

1.5 观察指标与方法

1.5.1 乳头直径

分别于造模前后及给药5d、10d后，使用手机微距镜头，等距离微距拍摄，以1cm软尺作为参照物，软件测量大鼠第三对乳头直径，并观察乳房外观。

1.5.2 血清性激素水平影响

分别于造模前后及给药5d、10d，通过阴道涂片观察大鼠动情间期，于监测到的每一个动情间期内眦静脉取血，酶联免疫检测大鼠E2、P、PRL。

1.6 统计学方法

实验数据运用SPSS 21.0软件进行统计学分析。大鼠乳头直径及血清性激素水平数据均用“s”表示，服从正态分布及方差齐性时采用方差分析，不服从正态分布或方差不齐时采用Kruskal-Wallis H检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠造模前后及给药后乳头直径比较

表1 各组大鼠造模前后及用药后乳头直径比较

表1 各组大鼠造模前后及用药后乳头直径比较

注：与对照组相比，1）P＞0.05，2）P＜0.05；与模型组相比，3）P＜0.05；*指大鼠在造模过程中死亡2只。

组别造模前 造模后 用药5天后 用药10天后n直径（mm） n 直径（mm） 直径（mm） 直径（mm）对照组 20 0.89±0.05 20 1.13±0.05 1.10±0.06 1.07±0.06模型组 20 0.86±0.061) 20 1.24±0.072) 1.22±0.052) 1.13±0.072)用药组 20 0.87±0.051) 18* 1.21±0.082) 1.12±0.052)3) 1.01±0.021)3)

2.2 各组大鼠造模前后及给药后E2、P、PRL变化

表2 各组大鼠造模前后及给药后E2、P、PRL水平比较（E2 ：Pmmol/L、P：ng/mL、PRL：ng/mL）（x±s）

3 讨 论

传统医学的外治理论及经验丰富，清代吴尚先《理瀹骈文》[5]记载了大量广泛应用于临床的外用方剂，且提出：“外治之理即内治之理，外治之药亦即内治之药，所异者法耳。医理药性无二，而法则神奇变幻。”“病先从皮毛入，药即可由此进。”阐明了外治与内治疗效相当，只要辨证正确，外用药通过皮肤的吸收，能达到内服药物同样的疗效。本次实验中，根据陆德铭教授对乳腺增生病“冲任失调，气滞血瘀互为因果”病机的认识[6]，课题组采用巴戟天、淫羊藿补肾调冲，柴胡、香附、莪术疏肝活血，同时现代药理研究证实[7]，补肾药物可以使下丘脑－垂体－卵巢轴间的功能得以改善，有调节失调的性激素的作用。

在动物实验中，乳头直径的变化是评价乳腺增生病模型及治疗作用的一项公认指标。本实验造模成功后，大鼠乳头直径增大，在撤除外源性激素10天后，模型组大鼠的乳头直径未见明显缩小；而用药组大鼠的乳头直径已缩小至正常状态，这说明外用中药贴敷能够加速乳头直径的恢复时间，并推测是通过调节体内的雌激素所起到的效果。提示我们对于乳腺增生病的治疗应从调节血清性激素水平着手。

综上，乳腺小叶增生筛选方外用有很大优势，既能在药效上发挥作用，在便利性上又有别于中药汤药需要煎煮、花费较多时间的特点，外用中药不受时间地点限制，可行性强。因此，外用小叶增生筛选方给患者提供了一种多的治疗方式。