总蛋白测定对钙测定干扰分析

秦 庆，吕永强

（联勤保障部队第967医院检验科，辽宁大连 116021）

0 引言

全自动生化分析仪的普及提高了临床化学检查的检测速度和准确度[1]，但在检测过程中，前一个检测项目可能会给后一个项目甚至后几个项目的检测结果带来干扰[2]，而严重的干扰会大大影响测定结果的准确性，给临床诊断带来困惑[3]。笔者在实际工作中发现，全自动生化分析仪（本院使用的是日立LABOSPECT 008全自动生化分析仪）测定血清中总蛋白（TP）和钙（Ca2+）时，在测定大量样品之后，Ca2+测定结果会明显偏低，这可能是TP测定对Ca2+测定产生了干扰。为此，本研究设计了一系列试验，对产生干扰的因素进行了分析，并提出了相应的措施。

1 材料与方法

1.1 研究对象

为了避免实验受到某些疾病人群的干扰，特从日常体检者中筛选出上百例健康者，再从健康者中随机抽取40例，抽血离心，将血清充分混匀后备用，作为研究标本。

1.2 仪器与试剂

日立LABOSPECT 008全自动生化分析仪。总蛋白测定试剂盒（双缩脲法）、钙测定试剂盒（甲烷基二甲苯酚蓝法）与各自的校准品均购自日本和光纯药工业株式会社。

1.3 方法

1.3.1 TP测定对Ca2+测定干扰试验

1.3.1.1 Ca2+水平参照值的确定试验

在保证比色杯清洗干净的前提下，连续测定混合血清标本Ca2+水平8次，测定结果记为R，计算均值、标准差及变异系数，以均值作为Ca2+水平参照值。

1.3.1.2 可能干扰源的确定试验

观察日立LABOSPECT 008全自动生化分析仪的分析过程，试剂针和比色杯有可能是对后续分析造成干扰的污染源。鉴于此，设计下述试验：

（1）测定混合血清标本TP水平一次，使用另外的比色杯测定Ca2+水平一次，测定结果记为T1，按此过程重复测定8次。若T1均值与参照值相差5%及以上，则认为存在试剂针携带污染。

（2）测定混合血清标本TP水平一次后不更换比色杯，常规清洗程序后进行Ca2+水平测定一次，结果记为T2，按此过程重复测定8次。若T2均值与参照值相差5%及以上，则认为存在反应杯携带污染。

1.3.1.3 多次清洗后可否去除干扰试验

测定混合血清标本TP水平一次后不更换比色杯，设置清洗程序重复3次，再进行Ca2+水平测定，结果记为T3，按此过程重复测定8次。若T3均值与参照值相差5%及以上，则认为清洗无效。

1.3.2 Ca2+测定对TP测定干扰试验

1.3.2.1 TP水平参照值的确定试验

在保证清洗干净的前提下，连续测定混合血清标本TP水平8次，测定结果记为A，计算均值、标准差及变异系数，以均值作为TP水平参照值。

1.3.2.2 可能干扰源的确定试验

由于并未发现TP的测定结果出现异常，因此设计如下简化试验：测定混合血清标本Ca2+水平一次后不更换试剂针及比色杯，常规清洗程序后进行TP水平测定一次，结果记为B，按此过程重复测定8次。若B均值与参照值相差5%及以上，则认为Ca2+测定对TP测定存在干扰。

1.4 统计学处理

采用SPSS 19.0软件进行数据处理和统计分析。组间比较采用t检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

Ca2+水平测定干扰试验结果见表1，TP水平测定干扰试验结果见表2。试验结果中，6组试验8次测定结果的变异系数都很小，表明仪器的精密度良好、运行稳定，排除了由于仪器运行不稳定带来的偏差。

表1 Ca2+水平测定干扰试验结果

表2 TP水平测定干扰试验结果

2.1 TP测定对Ca2+测定干扰试验结果

2.1.1 Ca2+水平参照值的确定试验结果

从表1得到参照值R均值为2.294 mmol/L，标准偏差为0.021 2 mmol/L，变异系数为0.924%。

2.1.2 可能干扰源的确定试验结果

（1）测定结果T1的均值为2.289 mmol/L，标准偏差为0.018 3 mmol/L，变异系数为0.799%。T1均值与参照值相差0.218%[（2.294-2.289）/2.294×100%]，小于5%，无明显偏差。对T1与R进行t检验，t值为0.472，P值为 0.644，P＞0.05，差异无统计学意义。此组试验没有更换试剂针，仅更换了比色杯，结果说明不存在试剂针携带污染。

（2）测定结果T2的均值为1.926 mmol/L，标准偏差为0.031 6 mmol/L，变异系数为1.641%。T2均值与参照值相差16.042%[（2.294-1.926）/2.294×100%]，大于5%，偏差较大。对T2与R进行t检验，t值为25.562，P值为 0.000，P＜0.05，差异有统计学意义。此组试验没有更换试剂针，也没有更换比色杯，但对比色杯进行了常规清洗，结果说明存在比色杯携带污染。

2.1.3 多次清洗后可否去除干扰试验结果

测定结果T3的均值为2.289 mmol/L，标准偏差为0.024 7 mmol/L，变异系数为1.079%。T3均值与参照值相差0.218%[（2.294-2.289）/2.294×100%]，小于5%，无明显偏差。对T3与R进行t检验，t值为0.406，P值为0.691，P＞0.05，差异无统计学意义。试验结果说明多次清洗后能去除干扰。

2.2 Ca2+测定对TP测定干扰试验结果

2.2.1 TP水平参照值的确定试验结果

从表2得到参照值A均值为71.2 g/L，标准偏差为0.627 g/L，变异系数为0.881%。

2.2.2 可能干扰源的确定试验结果

测定结果B的均值为71.1 g/L，标准偏差为0.634 g/L，变异系数为0.892%。B均值与参照值相差，小于 5%，无明显偏差。对B与A进行t检验，t值为0.278，P值为0.785，P＞0.05，差异无统计学意义。试验结果说明不存在Ca2+测定对TP测定的干扰。

3 讨论

目前，各大医疗机构普遍使用全自动生化分析仪进行生化指标测定，此种方式存在的问题是可能会携带污染直接导致检测结果的重复性和准确性变差。携带污染的产生是由于前一测试的试剂、标本或反应产物中的某些成分影响了下一测试项目的反应或相应的反应条件等，从而对后续项目的检测结果产生正向或负向干扰[4-7]。针对本实验室出现的TP测定对Ca2+测定的干扰，设计了一系列试验进行检测，并分析了产生干扰的原因。目前，该方面的研究鲜见报道[8]。

3.1 干扰来源的确定

在TP测定对Ca2+测定干扰试验中，几组试验结果表明，日常工作程序可忽略试剂针携带污染，但存在比色杯携带污染。Ca2+测定对TP测定干扰试验结果表明，不存在Ca2+测定对TP测定的干扰。

3.2 产生干扰的原因分析

在实际工作中，这种干扰往往在样品量较大的情况下才会发生，根据前述分析，已知是比色杯产生的携带污染。进一步分析原因，该仪器比色杯共有406个，其测定过程是取样针取一次样到一个比色杯中测定一个项目，之后再取一次样到下一个比色杯中测定另一个项目。因此，样品量较少时，比色杯不会重复使用，就不会产生TP测定对Ca2+测定的干扰，而当样品量较大时，使用的比色杯超过406个，就会重复使用比色杯，而比色杯常规清洗不足以消除TP测定的影响，这时就有可能会发生干扰，使Ca2+测定结果偏低。

本实验室Ca2+测定使用甲烷基二甲苯酚蓝（MXB）作为显色剂，它和Ca2+在碱性条件下螯合，呈现蓝色，反应式为MXB+Ca2+→MXB-Ca2+。TP测定使用的是双缩脲试剂，即碱性硫酸铜溶液，其中Cu2+与Ca2+同为金属离子，价态相同，某些性质也相似，因此可以推断，Cu2+与MXB在碱性条件下也可能发生螯合反应，反应式为MXB+Cu2+→MXB-Cu2+。当做过TP的比色杯没有彻底清洗时，残留的Cu2+会螯合部分MXB试剂，导致试剂不足而出现Ca2+测定结果偏低的现象。

既然Cu2+与MXB可能会发生螯合反应，TP测定会影响Ca2+的测定，Ca2+测定为什么却不会干扰TP测定？进一步分析，发现MXB溶液的浓度为0.29 mmol/L，加入量为 50 μl，而双缩脲溶液中 Cu2+浓度为8 mmol/L，加入量为180 μl，简单计算可得Cu2+的加入量约为MXB加入量的100倍。因此，做完TP测定的比色杯经过清洗即使仅残留1%的Cu2+对于加入的MXB试剂量来说也是很大的，所以TP测定会影响Ca2+的测定，反之则不会。

3.3 干扰的消除

干扰消除试验在对混合血清标本TP水平测定一次后不更换比色杯，但增加清洗程序至3次后，再进行Ca2+水平测定，结果显示干扰消除。上述试验说明多次清洗可有效消除TP测定对Ca2+测定的干扰，但多次清洗必然会降低标本检测的速度。因此，在实际工作中应根据具体情况，确保TP测定使用的比色杯不再进行Ca2+测定或采取比色杯彻底清洗的办法，以消除TP测定对Ca2+测定的干扰。

目前，临床开展的生化项目越来越多，而在开展生化项目之前一定要认真研究测定原理和各试剂组分，先做预试验，观察它对其他测定项目的干扰情况[9]。对有干扰的项目可采取调整项目检测顺序或设定有效、适合的特殊清洗程序的方法，以减少测定项目间的相互干扰[10-11]。