糖化白蛋白酶法测定的初步评价及其与糖化血红蛋白相关性研究

黄鋆　石安然　肖思聪

[摘要] 目的 應用EP10-A3文件对酶法检测糖化白蛋白（GA）的临床应用性能进行初步评价，并对糖尿病患者糖化血红蛋白（HbA1c）和糖化白蛋白（GA）的一致性、相关性及阳性率进行分析，评价其临床应用价值。方法 使用酶法测定GA浓度，采用美国临床实验室标准化委员会（CLSI）颁布的《定量临床检验方法的初步评价;批准指南EP10-A3》文件中规定的方法对其总不精密度、非线性、偏差、互染率、斜率、漂移等指标进行评价。并通过测定90例糖尿病患者的HbA1c和GA浓度，对两者相关性、一致性以及阳性率进行分析。 结果 低，中，高GA样本浓度偏差分别为-0.61，-0.28，0.34 μmol/L。总不精密度分别为1.48%，1.37%，0.84%。斜率、互染率、非线性、漂移（t=1.380，0.097，-1.370，0.013）差异无统计学意义（P>0.05）。GA与HbA1c回归分析方程为Y=2.805X-0.268（r2= 0.714）。GA与HbA1c一致性采用Kappa检验，Kappa值为0.655，说明两者一致性较好。HbA1c检测结果阳性率与GA检测结果阳性率，两者差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 糖化白蛋白试剂盒准确度、精密度良好，均在允许范围内，线性良好，携带污染率低，稳定性较好，性能指标符合临床应用要求。GA可作为糖尿病诊断的补充指标，并用于临床糖尿病疗效监测。

[关键词] 糖化白蛋白;糖化血红蛋白;方法学评价;糖尿病

[中图分类号] R587.1;R446.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1672-4062（2019）12（b）-0011-04

Preliminary Evaluation of Glycosylated Albumin Assay and Its Correlation with Glycosylated Hemoglobin

HUANG Yun1， SHI An-ran1， XIAO Si-cong2

1.Department of Clinical Laboratory， Union Hospital， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China; 2.School of Medical Technology and Engineering， Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350000 China

[Abstract] Objective To evaluate the clinical application performance of enzymatic detection of glycated albumin （GA） by EP10-A3 and to compare the consistency and correlation between glycated hemoglobin （HbA1c） and glycated albumin （GA） in diabetic patients. The positive rate was analyzed to evaluate its clinical application value. Methods The GA concentration was determined by enzymatic method， and the total imprecision， nonlinearity， and the method specified in the “Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Test Methods; Approval Guide EP10-A3” document issued by the American Committee for Clinical Laboratory Standards （CLSI）. Indicators such as deviation， mutual dyeing rate， slope， and drift were evaluated. The correlation， consistency and positive rate of the two patients were determined by measuring the concentrations of HbA1c and GA in 90 patients with diabetes. Results It showed low， medium and high GA sample concentration deviations of -0.61， -0.28， and 0.34 μmol/L， respectively. The total imprecision was 1.48%， 1.37%， and 0.84%， respectively. The differences in slope， mutual staining rate， nonlinearity， and drift（t=1.380， 0.097， -1.370，0.013） were not statistically significant （P>0.05）. The regression equation for GA and HbA1c is Y=2.805X-0.268 （r2=0.714）. The consistency of GA and HbA1c was Kappa test， and the Kappa value was 0.655， indicating that the two were consistent. There was no significant difference between the positive rate of HbA1c test and the positive rate of GA test （P>0.05）. Conclusion The glycated albumin kit has good accuracy and precision， all within the allowable range， good linearity， low carrying pollution rate， good stability， and performance indicators meet the requirements of clinical application. GA can be used as a supplementary indicator for the diagnosis of diabetes and used for clinical diabetes monitoring.

[Key words] Glycated albumin; Glycated hemoglobin; Methodological evaluation; Diabetes

随着人们生活水平的提升，糖尿病患者的数目也在不断增加。有报告显示[1]，全球患糖尿病人数已经超过1.2亿，而我国糖尿病发病率高达9.6%。众所周知，糖尿病是一种内分泌代谢障碍性疾病，主要与长期血糖控制不佳有关[2]。长期的高血糖容易引发糖尿病足和视网膜病变等并发症，因此及时调整血糖，使其保持在正常水平具有重要的意义。血糖检测是糖尿病治疗的重要风向标，能帮助医生及时了解患者的疾病发展情况，制定合理的给药方案从而给予更好的治疗[3]。

糖化白蛋白（glycated albumin，GA）测定是以糖化血清白蛋白测定值与血清总白蛋白值（ALB）之间的比值来表示GA的浓度，可反映人体过去2～3周前的平均血糖水平。《中国血糖监测临床应用指南》（ 2015年）已将其列为血糖控制监测的有效方法之一[4]。有文献[5]表明，对2型糖尿病患者采用胰岛素加强疗法进行初始治疗，治疗2周后，GA的变化率约为糖化血红蛋白（Glycated hemoglobin，HbA1c）的10倍左右。因此，GA能在血糖变化最显著时反映血糖浓度，特别适合初诊为糖尿病的患者降糖治疗的疗效观察。对于血红蛋白异常和肝功能不佳的糖尿病患者，用GA监测治疗效果具有更好的价值。GA的检测方法主要有干化学法、固体酶法、高压液相色谱法（ HPLC）和液体酶法等，目前临床应用最广泛的方法为改良的液体酶法。

EP10-A3是临床和实验室标准委员会（CLSI）对一项新的体外诊断检测方法、试剂盒或或仪器设备进行初步评价的方案。该方案主要是通过实验设计和数据分析，对某项目检测系统进行单因素短期评价，在进行完整方法学评价前用来快速鉴别该方法是否适用于临床实践。该法简单便利，操作时间短暂，临床实用性较高。

通过EP10-A3文件初步评价酶法测定GA的方法学性能，验证其作为临床应用性能，并分析糖尿病患者 HbA1c和 GA 的一致性、相关性，为糖尿病早期诊断和治疗效果监测提供更有意义的借鉴。

1  材料与方法

1.1  样品来源

1.1.1  患者样品  收集2019年1—3月在该院明确诊断为糖尿病患者（诊断参照2013年WHO糖尿病诊断标准），并排除存在血红蛋白低（<90 g/L）或白蛋白低（<30 g/L）和变异体等影响检测结果因素的患者共90例。这90例患者中，男性47例，女性43例，男∶女=1.09∶1，年龄31～94岁，中位年龄57岁。

1.1.2  用于方法学评估样品  日本积水株式会社定值质控血清（批号：805RLP 使用期限2020.02）。GA低值样品标定值为13.4%。GA高值样品标定值为28.5%。将上述高值样品和低值样品等比混合为中值样品，GA标定值为21%。高、中、低3个浓度的样品每种按0.1 mL分装，放入-40℃冰箱保存。

1.2  仪器

罗氏Modular P8000全自动生化分析仪检测GA，伯乐Variant II Turbo糖化血红蛋白分析仪检测HbA1c。

1.3  试剂

1.3.1  GA试剂  GA酵素液（批号：805RLP），ALB显色液（批号：805RLP），试剂：日本积水株式会社。

1.3.2  HbA1c试剂  （批号：64182048），试剂：伯乐生命医学产品有限公司

1.4  方法

①测定方法及顺序：依照EP10-A3文件的規定，每天测定10个样品，按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的顺序测定各GA质控品浓度，共测定5 d。其中第1个中值作为测定起始用，不在统计范围内，后9个数据中的任何1个数据不合格，都必须放弃该批次的所有数据，重新测定。

②判断标准：按照 CLSI EP10-A3 文件计算总不精密度以美国临床实验室改进修正法案（CLIA'88）分析质量要求规定的允许误差的1/2，判断检测系统精密度的可接受性。以各浓度5 d检测结果的算术平均值与其对应设定值计算偏移，以CLIA'88 分析质量要求为允许误差，判断检测系统偏移的可接受性; 截距、斜率、非线性、互染率、漂移性按 CLSI EP10-A3 文件计算及判断。

③分别检测90例糖尿病患者血清标本的HbA1c和GA值。

1.5  统计方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。计算偏差、总不精密度。对斜率、互染率、非线性、携带污染作回归分析，其校正回归值做t检验，当t<-4.6或t>4.6时，P<0.05为差异有统计学意义。GA和HbA1c之间的相关性采用回归分析。

2  结果

2.1  应用EP10-A3进行初步评价结果

2.1.1  偏差分析  以各浓度样本5 d的测定结果均值与其对应设定值计算偏差，偏差均未超过设定的±5%范围，临床均可接受。见表1。

表1   GA偏差结果分析[（x±s），%]

2.1.2  总不精密度分析  按照EP10-A3文件提供的方法，计算总不精密度。各浓度总不精密度均未超过允许误差，临床均可接受。见表2。

表2    GA总不精密度分析结果

2.1.3  测定结果多元回归分析  按EP10-A3中的方法对斜率、互染率、非线性、漂移性差异进行多元回归计算，结果显示斜率、互染率、非线性、漂移的差异无统计学意义（-4.60.05）。见表3。

表3   多元回归分析汇总

2.2  GA和HbA1c检测结果相关性分析

GA和HbA1c检测结果的回归分析方程为Y = 2.805X-0.268，相关系数（r2=0.714），见图1。

图1   GA和HbA1c相关性分析

2.3  GA和HbA1c的一致性分析

以超过GA和HbA1c参考区间的上限（ GA>16%;HbA1c>6.0%）判定为阳性，90例明确诊断为糖尿病的患者中 HbA1c阳性结果有59例（65.56%），阴性有31例（34.44%）。GA 阳性结果有59例（65.56%），阴性有31例（34.44%）。两种方法阳性符合率57.8%，阴性符合率为26.6%，总符合率为84.4%。一致性检验Kappa值为0.655，提示两种方法一致性较好。见表4。

表4   GA和HbA1c检测结果比较[n（%）]

2.4  GA和HbA1c检测结果阳性率比较

HbA1c检测结果阳性率与GA检测结果阳性率，两者差异无统计学意义（P>0.05），见表5。

表5   GA和HbA1c检测结果阳性率比较（例）

3  讨论

糖化血清白蛋白对于血糖监控，指导临床诊断，评价降糖疗效指导治疗，对糖尿病血管并发症的评估都有很好的临床意义。该研究通过参照EP10-A3文件对酶法测定糖化白蛋白的临床性能初步评估。偏差评价结果显示低、中、高浓度的绝对偏差和总不精密度均在允许范围之内，能达到临床检测的要求。并且多元回归总结分析结果显示斜率、互染率、非线性、漂移性的t 值均在-4.6～4.6之间，差异无统计学意义（P>0.05），说明试剂准确度好，线性能力良好，携带污染率低，能较好地满足临床常规检测要求。使用EP10-A3文件能够在短期内对单个因素进行较为准确的判断，方便省时，受到外界因素影响较小，分析结果较为全面。但这仅仅只是实验数据累积分析的开始，想要进行完整的方法学评价，还需要各个文件对单个项目的更加精确完整的分析。例如评价线性可以使用EP-6;评价干扰影响可以使用EP-7和EP-14;评价总误差可以使用EP-21;还可以使用EP-15进行恒定和比例偏移的评价。另外，还应当着重研究如何实现糖化白蛋白的标准化。可以通过长期对大量自然人群的随访调查，然后进行多中心协作研究。标准操作和标准可以通过质谱技术建立[6]。

在该次研究中HbAlc与GA呈正相关（r2=0.714），说明二者有一定的关联性，同时通过采用Kappa一致性检验和配对χ2检验，得出两者一致性较好，阳性率差异无统计学意义（P>0.05）。糖化血红蛋白（HbA1c）是血糖与血红蛋白结合的产物，其含量主要取决于血糖浓度与血红蛋白的接触时间。由于人体内红细胞的寿命约为120 d，因此HbA1c水平反映的是检测前2～3个月内的平均血糖水平[7]。HbA1c优点是不受短期内血糖变化的影响，可作为长期血糖控制的重要监测指标。糖化血清白蛋白（GA）可反映人体过去2～3周前的平均血糖水平，可评估患者短期内糖代谢控制情况。糖化白蛋白对于监测血糖水平、评估糖尿病及其并发症、评估血糖控制的疗效和指导临床诊断方面拥有较高的临床意义。由于HbA1c水平因为反映的是前3～4个月血糖水平，无法显示短期内血糖的波动和变化，对于血糖水平的评估存在“延迟效应”，而不能及时显现出治疗效果。对于短期住院治疗的糖尿病患者，GA可能比HbA1c更具有参考价值[8-9]。另外有研究报道[10]指出GA不仅能反映平均血糖水平，更能反映餐后血糖水平。HbA1c检测还会受变异体和溶血性贫血及肾病贫血等能缩短红细胞寿命的疾病的影响，不能真实反映血糖控制水平[11]。此时GA测定不受这些因素的影响，应用GA来调整降糖方案会更有帮助。因此GA是一个很有意义的临床诊断治疗的补充。

GA的检测结果同样会受到血清白蛋白更新速度、体质指数（BMI）、ALB 代谢等因素的影响[12]。因此。临床上可通过实际情况选择检测HbA1c或GA，用来排除干扰因素的影响，从而获得正确的血糖监测结果。但是慢性肝病患者体内白蛋白合成能力降低导致白蛋白半衰期延长，又因脾机能亢进使红细胞半衰期缩短，这些导致HbA1c较血糖水平偏低，GA水平较血糖水平偏高，所以对慢性肝病患者的血糖监控较困难，目前尚无准确反映血糖水平的标志物。

[参考文献]

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[12]  Koga M. Glycated albumin; clinical usefulness[J].Clinica Chimica Acta， 2014， 433（7）：96-104.

（收稿日期：2019-09-19）