MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP联合检测在甲状腺癌中的诊断价值

林 胜

(资阳市第一人民医院检验科，四川资阳 641300)

甲状腺癌是最常见的一种恶性肿瘤，多发于儿童或40岁以下的女性，甲状腺癌生长较为缓慢，但易出现局部或淋巴转移，并且临床预后差异较大，目前缺乏有效的诊断手段[1]。模型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、长链非编码RNASNHG 15(LncRNASNHG 15)以及Yes 相关蛋白(YAP)均在甲状腺癌组织中异常表达，对癌细胞的增殖、凋亡具有调控作用，但关于三者对甲状腺癌诊断价值的研究较少[2-4]。本文主要探究MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP对甲状腺癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2015年7月至2017年7月于本院进行治疗的甲状腺癌患者共186例作为观察组，包括男58例，女128例，乳头状癌112例、滤泡状癌41例、未分化癌17例和髓样癌16例。患者年龄21～68岁，平均(42.54±3.26)岁。 选择同期于本院进行健康体检者50例作为对照组，包括男17例，女33例，年龄23～70岁，平均(43.23±3.57)岁。纳入标准：(1)年龄在20～70岁之间；(2)符合甲状腺癌的诊断标准[5]，均为新发患者；(3)资料完整；(4)签署知情同意书。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤；(2)使用过激酶抑制剂或细胞毒药物进行治疗的患者；(3)合并其他甲状腺疾病；(4)妊娠或哺乳期妇女。

1.2方法 收集所有患者的基本资料，并在入院进行病理检查时取瘤体样本放置于生理盐水中在-80 ℃条件下保存，做好标签以备后续，使用免疫组化SP法检测每份样本中MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15表达情况，试剂盒购买于上海创翼生物科技有限公司，MT1-MMP、YA和LncRNA SNHG15P主要分布于细胞浆，呈黄色至褐色，每个样本随机选取选择6个高倍视野(×400倍)计算表达阳性率，以颜色为棕黄色、棕褐色以及褐色并且染色范围大于20%。使用Western blot检测每份样本中MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15蛋白相对表达量，试剂盒购买于Dharmacon公司，100 V电泳2 h，使用Quantity One 1-D分析软件对蛋白质印迹条带进行定量，相对表达量=目的蛋白测定值/GAPDH测定值。

2 结 果

2.1观察组与对照组三种蛋白阳性率比较 观察组组织MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15表达阳性率均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2观察组与对照组三种蛋白Westen blot结果比较 观察组组织MT1-MMP、YAP和LncRNA SNHG15蛋白相对表达量均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2、图1。

表1 观察组与对照组三种蛋白阳性率比较

表2 观察组与对照组三种蛋白Westen blot结果比较

图1 观察组与对照组三种蛋白Westen blot结果比较

表3 MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表达与甲状腺癌临床病理参数的关系

续表3 MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表达与甲状腺癌临床病理参数的关系

2.3MT1-MMP、YAP 、LncRNA SNHG15表达与甲状腺癌临床病理参数的关系 不同性别和年龄段患者组织MT1-MMP、YAP蛋白表达阳性率及LncRNA SNHG15蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义(P>0.05)，瘤体直径大于2 cm的组织YAP表达水平明显高于瘤体直径小于2cm的组织，差异有统计学意义(P<0.05)，出现包膜浸润的组织YAP及LncRNA SNHG15蛋白表达水平明显高于未出现包膜浸润的组织，差异有统计学意义(P<0.05)，出现淋巴转移的组织MT1-MMP表达水平明显高于未出现淋巴转移的组织，差异有统计学意义(P<0.05)，TNM分级为Ⅲ级和Ⅳ级的组织YAP表达水平明显高于Ⅰ和Ⅱ级的组织，差异有统计学意义(P<0.05)，MT1-MMP、YAP 及LncRNA SNHG15表达水平的增高在乳头状腺癌患者中的增高最为明显，其次为滤泡状癌。见表3。

3 讨 论

甲状腺癌是发病率最高的内分泌系统恶性肿瘤之一，在儿童和年轻女性中多发，严重威胁着人类健康。甲状腺癌早期症状较为隐匿，较难诊断和发现，易发生肿瘤转移，且其预后差异较大[6]。目前关于甲状腺癌的发病机理尚不完全明确，是当下研究热点之一。

甲状腺癌具有较高的淋巴转移率和较强的侵袭性，研究表明细胞基底膜和间质组织的破坏是恶性肿瘤转移的关键。MT1-MMP是一种胶原蛋白酶，被活化后可降解层黏连蛋白、胶原蛋白、玻璃黏连蛋白、间质胶原等多种细胞外基质蛋白，破坏细胞外基质微环境的平衡[7]。本次研究结果表明，甲状腺癌患者瘤体组织中的MT1-MMP蛋白表达水平明显高于健康人群，并且出现包膜浸润和淋巴转移的瘤体组织的MT1-MMP蛋白表达水平明显高于未出现浸润和转移的组织。以往研究也发现，MT1-MMP在肺癌、黑色素瘤、肝癌等的浸润和转移中起着重要作用[8]。一方面，MT1-MMP可降解细胞外基质导致肿瘤细胞易脱落转移，另一方面可能是由于MT1-MMP可上调血管内皮生长因子的活性，促进肿瘤组织的血管和淋巴的生成，从而导致浸润和淋巴转移[9]。

YAP蛋白是一种转录调控因子，在细胞增殖中起着重要作用，YAP可通过调节SMAD以及转录增强区域对转录进行调控，与肿瘤细胞的恶性增殖密切相关[10]。本次研究结果显示，甲状腺癌患者瘤体组织中的YAP表达水平明显高于健康人群，并且瘤体直径大于2 cm和TNM分级为Ⅲ级Ⅳ级的YAP表达水平明显高于其他类型组织，表明高YAP表达水平预示着较为严重的肿瘤等级和较差的预后。前期研究也提示，YAP表达水平与恶性肿瘤术后生存期存在负相关性[11]。YAP不但有促进增殖的能力，还可以诱导survivin蛋白表达，减少肿瘤细胞凋亡，表明高YAP水平预示肿瘤细胞有更强的增殖能力[12]。

LncRNA SNHG15是一类长度为200个核酸的保守非编码RNA，与组织分化、细胞增殖、胚胎发育等过程密切相关[4]。目前关于LncRNA SNHG15与甲状腺癌关系的研究极少。本次研究结果显示，甲状腺癌患者瘤体组织中的LncRNA SNHG15表达水平明显高于健康人群，出现包膜浸润的组织LncRNA SNHG15蛋白表达水平明显高于未出现包膜浸润的组织。以往研究显示，LncRNA SNHG15的过表达可能与瘤体组织的大小、血管侵犯等有关[13]，是影响肝癌预后的独立危险因素[14]，本次研究发现，LncRNA SNHG15仅与肿瘤的浸润有关，这可能是受到样本数量过小等因素的影响，未来需要更多大样本研究进行验证。

本次研究使用免疫组化对MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP的表达进行定性和定位分析，使用Western blot法对MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP的表达进行定量分析。除上述两种方法外，今后的实验中还可采用实时荧光定量PCR法检测组织和外周血中MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP表达水平，以进一步验证本实验的研究结果。

综上所述，MT1-MMP的高表达预示着甲状腺癌的包膜浸润和淋巴转移，YAP高表达预示着甲状腺癌更强的增殖能力和更差的预后，LncRNA SNHG15也与包膜浸润密切相关，因此MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP联合检测有助于判断甲状腺癌的恶性程度、浸润转移及预后效果，为临床诊疗提供依据。

4 结 论

本次研究使用免疫组化和Western blot法发现，MT1-MMP、LncRNA SNHG15、YAP在甲状腺癌患者中存在过表达，并且其表达水平与瘤体直径、包膜浸润以及是否出现淋巴转移有关，三项指标联合检测有望为甲状腺癌的临床诊疗提供新思路。