P53基因检测在原发性胃肠道淋巴瘤患者预后评估中的应用

叶筱颖

江西省上饶市人民医院 （江西上饶 334000）

原发性胃肠道淋巴瘤（primary gastrointestinal lymphoma，PGIL）属于结外淋巴瘤，恶性程度差异较大，免疫表型在淋巴瘤恶性程度的判断中较为常用，但是一些患者虽然具有相同的免疫表型，预后却不同[1]。研究表明，基因检测在淋巴瘤发生、发展及预后评价中发挥极为重要的作用[2-5]。本研究探讨P53基因检测在原发性胃肠道淋巴瘤患者预后评估中的应用价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2018年6月江西省上饶市人民医院收治的原发性胃肠道淋巴瘤患者25例作为试验组，其中男15例，女10例；年龄6～81岁，平均（46.4±7.5）岁；病程1周至33年，平均（16.3±2.6）年；胃淋巴瘤15例，肠淋巴瘤10例；胃黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤15例，非胃MALT淋巴瘤10例；B细胞淋巴瘤23例，非B细胞淋巴瘤2例；病理分期Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期7例；临床症状，腹痛18例，消化道出血14例，贫血14例，腹部包块6例，低蛋白血症10例，肠梗阻2例，非特异性消化道症状8例，体重显著降低7例，发热2例，腹泻2例，消化道穿孔1例，便秘1例，吞咽困难1例。25例患者中，行单纯手术治疗10例，其中5例为胃部分切除术，3例为肠部分切除术，1例为全胃切除术，1例为姑息手术；行手术+化疗11例，其中10例为肿瘤切除术+CHOP方案化疗，1例为CHOP方案化疗+肿瘤切除术；行非手术治疗4例，其中2例为单纯CHOP方案化疗，2例为对症支持治疗。另选取同期江西省上饶市人民医院收治的淋巴结反应性增生患者30例作为对照组。

纳入标准：（1）试验组均经病理组织学检查确诊为原发性胃肠道淋巴瘤；（2）试验组均为非霍奇金淋巴瘤；（3）患者均知情同意研究内容，且已签署知情同意书。

排除标准：（1）缺乏完整病例资料的患者；（2）无法有效配合研究的患者。

1.2 方法

两组标本均用石蜡包埋起来，连续切片，厚度为3 μm；购买Sigma公司生产的20 mg/ml蛋白酶K储存液，北京金菩嘉医疗科技有限公司生产的P53基因探针（绿色荧光信号）。

试验组运用改良荧光标记原位杂交（FISH）技术检测P53，由于检测原发性胃肠道淋巴瘤石蜡切片P53的目的细胞为淋巴细胞（淋巴恶性增殖区域，胃肠组织），因此依据组织细胞常规FISH方法对FISH检测方案进行改良，包括于65℃的温度下烘烤过夜，室温下于二甲苯中脱蜡，于梯度乙醇中复水，于沸水中煮切片15～25 min，于37℃蛋白酶K工作液中浸入4～8 min，室温下漂洗、脱水，在此过程中充分利用2×SSC溶液、梯度乙醇，在丙酮中浸入2 min，于56℃的温度下进行1 h的烤片。

对照组则对患者的外周血淋巴细胞滴片，建立阈值，在此过程中运用常规滴片血细胞FISH方法。

1.3 临床评价

依据HE染色的病理组织切片对淋巴瘤细胞分布位置进行判定并详细记录，在该区域中分析该组织切片的探针信号，对间期细胞中每种探针的信号进行检测，确定结果：有2个绿色荧光信号出现在每个细胞中评定为P53正常，有0个或1个绿色荧光信号出现在每个细胞中评定为P53异常[6]。选取具有均匀信号的杂交区域并计数；将阴性对照设定为正常人外周淋巴细胞，将阳性对照设定为既往已知阳性病理切片。

1.4 统计学处理

采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料以率表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

试验组中，P53基因缺失10例（40.0%），生存期8～12个月，平均（10.2±1.7）个月；胃淋巴瘤6例，肠淋巴瘤4例；非MALT淋巴瘤5例，MALT淋巴瘤5例；B细胞淋巴瘤9例，非B细胞淋巴瘤1例；病理分期Ⅰ～Ⅱ期6例，Ⅲ～Ⅳ期4例。试验组中，P53基因正常13例（52.0%），生存期30～34个月，平均（32.0±5.6）个月。试验组P53基因正常患者的生存期长于P53基因缺失患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组中，P53基因缺失2例（6.7%）。试验组P53基因缺失率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

原发性胃肠道淋巴瘤起源于胃肠壁淋巴组织内，多为非霍奇金淋巴瘤，临床表现缺乏特异性，基因检测在淋巴瘤发生、发展及预后评价中发挥极为重要的作用。

研究表明，如果原发性胃肠道淋巴瘤患者P53基因缺失，则其具有较高的恶性程度，与单基因改变或无基因改变患者比较具有较短的平均生存期[7-12]。本研究探讨P53基因检测在原发性胃肠道淋巴瘤患者预后评估中的应用价值，结果显示，试验组P53基因正常患者的生存期长于P53基因缺失患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；试验组P53基因缺失率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

总之，P53基因检测在原发性胃肠道淋巴瘤预后评估中的应用价值较高。