中兽药散剂的显微鉴别技术及应用

梁小菊，李小娜

(郑州市兽药饲料监察所，河南，郑州 450052)

中兽药是在传统中兽医药学理论指导下，用于防治动物疾病的药物。主要包括植物药、动物药、矿物药三大类[1]。中兽药散剂的鉴别主要包括外观性状鉴别、薄层色谱鉴别和显微鉴别方法。借助显微镜进行观察统称为“显微鉴别法”[1]，显微鉴别法以操作简单、耗时短、成本低、不需要前处理等优点备受欢迎。本文主要对显微鉴别的定义、制片方法、显微鉴别技巧、难点和应用中存在的问题进行分析讨论。

1 定义

中兽药显微鉴别法系指用显微镜对药材(饮片)切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法，又称为组织粉末鉴别[2]。它是利用植物或动物细胞学、组织学、解剖学及矿物晶体学等知识和方法，在显微镜下发现重要的结构特性、细胞或结晶形状及各种内含物，作为鉴别的依据。

2 制片方法

中兽药显微鉴别制片方法有横切片或纵切片制片法、粉末制片法、解离组织制片法、表面制片法、花粉粒与孢子制片法、磨皮制片法、中成药制片法。实际工作中最常用的是粉末制片法[3]。

2.1 试液

水合氯醛试液、稀甘油、乙醇、5%KOH试液、甘油醋酸、苏丹Ⅲ试液、间苯三酚试液、碘试液等[1]。

2.2 制片步骤

中药材需经粉碎、过筛后制片,中药散剂直接制片,片剂经研细后制片,含有挥发性成分的制剂微量升华后装片。

粉末制片方法为，取样品粉末少许，置于洁净的载玻片上，滴加1～2滴水合氯醛液，在酒精灯上来回加热透化，并时时用解剖针搅拌。等水合氯醛未完全蒸干时，再滴加1～2滴，加热，如此反复2～3次，即可除去细胞内含物，但勿使粉末烤焦[4]，置显微镜下观察。此法适用于大部分中兽药散剂。

有的中兽药需要用稀甘油制片，主要适用于易溶于水合氯醛的样品。取样品粉末少许，置于洁净的载玻片上，滴加1～2滴稀甘油，用解剖针搅拌，置显微镜下观察。如茯苓、茯苓皮。有的中药材，在药典中明确规定用乙醇装片，方法同稀甘油制片法。常用于有特殊规定的中药材，比如大承气散中的玄明粉。

2.3 注意事项

所用的盖玻片和载玻片必须保持洁净。进行显微制片时，每片粉末取用量宜少不宜多。为使观察全面，可多制片。如取量多，显微特征重叠轮廓不清，反而费时，不易得出准确结论。显微镜观察时应先低倍再高倍。

3 观察与技巧

一般显微鉴别需观察2～5个玻片标本，根据能否观察到药材的显微特征来判断药材的真实性。为提高显微鉴别的准确性，可与对照药材比对。初学显微鉴别时可以购买原药材，粉碎过筛后制片观察，找出典型特征后，认准并牢记，这样在实际操作中，可快速找到目标药材。根据药材检验时的显微特征可划分成25类，分别有花粉粒、石细胞、淀粉粒、方晶、簇晶、针晶、柱晶、砂晶、靛蓝结晶、薄壁细胞、纤维束、纹孔、木栓细胞、腺毛、非腺毛、腺鳞、油管油胞、导管、乳管、钟乳体、硅质块、菊糖、气孔、保卫细胞 、菌丝等[5]。

在实际工作中常常遇到一类药材的结构很相似，只有多观察多比较，找到其独特的结构，才能鉴别出相应的中药。一般的中药材,如仙茅、知母和山药都是针晶，均在10倍下观察，但他们的长短不一样；白术和苍术同样也是针晶，都需要在40倍下观察，但颜色不一样；同样有簇晶形态的大黄、白芍、何首乌、马齿苋、辣蓼、牡丹皮，可以通过簇晶的大小、排列顺序、薄壁组织的颜色来判断和区分；金银花、洋金花、红花、菊花都有花粉粒，可以通过观察其形态、大小、萌发孔或萌发沟状况、外壁构造及雕纹来区分[6]；属于腺毛、非腺毛、腺鳞类的艾叶、白头翁、藿香、益母草、茵陈、淫羊藿、枇杷叶，可以通过腺毛的形态、颜色、大小、有单细胞还是几个细胞组成以及分泌物等来判断；属于淀粉粒类的浙贝母、炮 姜(干姜)可以观察类型、形态、大小、脐点、层纹、是否糊化等来判断[7]。

4 难点

对中兽药散剂进行显微鉴别时，一般需根据处方，对各组成生药粉末特征分析比较，排除某些类似的细胞组织及后含物等的干扰和影响，选取各药在该成药中具专属性的显微特征作为鉴别依据。

2015年版《中国兽药典》二部中，成方散剂显微鉴别项下只描述各种药材粉末的显微特征，并没有标明描述的是哪一种药的特征,所以在检验工作中往往要花时间查阅和核对资料才能确定所描述的特征是哪一种药材[8]。建议判断不清的时候，参照《中华人民共和国药典》2010版一部，每个成方制剂项下每一味药都有对应的很详尽的描述，如《四君子丸》[9]鉴别项下：不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm(茯苓)，标注清楚了是哪味药。

不同成方散剂的同一种药材，如甘草、陈皮、当归等，一般采用相同的鉴别特征，统一描述。但在有些散剂中，由于受其他药味的干扰，难以统一者，也可选用另一特征。如党参，在四君子散、伤力散中，选用联结乳管特征，而在小柴胡散、白术散、健鸡散中，则选用石细胞的特征描述。

有的中药同时有淀粉粒、纤维束、导管、方晶等结构，比如板蓝根，容易误认为是其他药材，这就需要经验和专业的知识来判断。荆防败毒散[2]里面同时有油管、油细胞类的柴胡、防风，《中国善药典》上是这样描述防风的：油管含金黄色分泌物，直径17～60μm；而柴胡的描述为：油管含淡黄色或黄棕色条状分泌物，直径8～25μm。这就需要结合油管的形状及油管的颜色和长度来进行判断，因为金黄色和淡黄色在视野里不是太好区分，油管分泌物的直径有重合的部分，给鉴别工作增加了难度，这种情况下只有多制片多观察，确定其典型结构。另外白术和苍术也是工作中较难鉴别的，需要先在10倍镜下观察，在40倍镜下面确认，有时看的快，或者取样量小都会找不到,这需要耐心细致的工作。

5 存在问题

随着有关部门对中兽药显微鉴别工作的日益重视，目前各省辖市质检中心基本都能开展此项工作，只是熟练程度有一定的差别，熟练掌握该技术的专业人员相对较少。部分兽药企业也开展了此项目，但存在容易的药材会识别，但难度高的药材看不准的现象。中药显微鉴别技术看着步骤很简单，但在实际操作和观察中也有很多小细节，且只能定性，不能定量。有的企业也是按照药典要求添加，但是实际添加多少，无法定量[10]；还有的情况是为了提高药效，加入该处方外的中药和化药，这些在显微鉴别时也能发现；还有未严格按照处方的配比添加。本项工作对人员的业务素质要求也是比较高的，在进行显微鉴别时，须认真观察各类组织的结构特点和细胞、内含物的形状特征以及矿物晶体、碎片的特征，测量其大小。细胞和内含物的直径、长短，也是显微鉴别中药的重要依据之一。需要从更多的实践中来积累经验，多观察中兽药散剂的成方制剂，从易到难，逐步积累，从而达到一定的熟练程度。