树上虾丙酮提取物抗氧化活性和还原能力研究

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(1.广西中医药大学药学院，广西 南宁 530001；2.广西南宁市第五十六中学，广西 南宁 530001)

对于生物体而言氧化过程是一个非常重要的生理过程。活性氧(ROS)的不可控制产生和抗氧化保护机制的失衡导致许多疾病的发生并加速人体衰老反应。ROS的产生与生物体中抗氧化系统中活性氧的失活之间存在平衡，过量的活性氧需要用抗氧化剂来抗衡。本实验通过冷浸法得到树上虾丙酮提取物，采用ABTS体系和还原能力体系，来评估其抗氧化能力。

1 材料与仪器

实验用仪器为紫外可见分光光度计(UV1901型，北京普析电子科技有限公司)[8-10]。树上虾植物来源于广西百色，芦丁标准品购于百灵威试剂公司(北京)。

2 方法

2.1 树上虾丙酮提取物制备

将树上虾晒干磨粉后，将20 g树上虾粉末放入圆底烧瓶中，加入200 mL丙酮(95%)浸泡3 d。将溶液倒出后，重新加入新的丙酮(95%)200 mL进行冷浸操作，总共加入3次丙酮(95%)，合并提取液。将所得溶液用旋转蒸发仪除去溶剂得到树上虾丙酮提取物。

2.2 ABTS·+自由基清除能力测定[6-10]

在锥形瓶中加入50 mL浓度为2 mmol/L的2,2'-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)水溶液，和200 mL浓度为70 mmol/L的K2S2O8水溶液，混合均匀，盖上塞子避光放置12～16 h，再加入磷酸盐缓冲液至溶液在Abs=734 nm处吸光度为0.70±0.02得到ABTS·+溶液。取一定量不同浓度提取物药液，加入一定量ABTS·+溶液混匀，在不同时间测其吸光度，并以吸光度变化计算其对ABTS·+自由基的清除率。

2.3 还原能力测定[5]

在锥形瓶中加入0.2 mL树上虾丙酮部位提取物溶液，2.5 mL pH值=7.4的PBS溶液以及2.5 mL浓度为1% 的KFe(CN)4溶液，混合均匀后放于50℃水浴20 min，加入2.5 mL浓度为10%的三氯乙酸溶液，离心10 min。取上清液和蒸馏水各2.5 mL，加入0.5 mL 浓度为1%的FeCl3，将溶液混合后在700 nm处测定吸光度。

3 结果

3.1 树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除能力

3.1.1 不同浓度提取物对ABTS自由基的清除能力

不同浓度树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除能力如图1所示。 当树上虾丙酮提取物浓度为0.2 mg/mL时，提取物对ABTS自由基的清除率为33.3%，表现出较好的ABTS自由基清除效果。当树上虾丙酮提取物浓度增加至0.5 mg/mL时，提取物对ABTS自由基的清除率为60.6%，数值接近于0.2 mg/mL浓度时数值的2倍；浓度增加至0.8 mg/mL时，提取物对ABTS自由基的清除率进一步增加至73.7%。值得注意的是，在浓度为1.2 mg/mL时，提取物对ABTS自由基的清除率超过了90%。在最高药液浓度2.0 mg/mL时，提取物对ABTS自由基的清除率达到了98.3%。

图1 不同浓度树上虾丙酮提取物 对ABTS自由基的清除能力Fig.1 Relationship between ABTS radicals clearance rate and concentration of extract for acetone extract of Pholidota cantonensis Rolfe

3.1.2 不同时间下提取物对ABTS自由基的清除能力

图2 不同时间树上虾丙酮提取物 对ABTS自由基的清除能力Fig.2 Relationship between ABTS radicals clearance rate and time for acetone extract of Pholidota cantonensis Rolfe

本论文进一步考察了不同时间树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率。如图2所示，在作用时间为1 min时，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率为86.1%；作用时间为3 min时，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率为93.1%；作用时间为5 min时，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率为95.8%；作用时间为10min时，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率超过98%。可见，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率与时间有关。

3.1.3 树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的EC50值

通过不同浓度的树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率，得出树上虾丙酮提取物对ABTS自由基EC50值为0.33 mg/mL。

3.2 树上虾丙酮提取物的还原能力

图3表示树上虾丙酮提取物在不同药液浓度时的还原能力。可见，药液浓度为0.2 mg/mL时树上虾丙酮提取物吸光度为0.22；药液浓度为0.5 mg/mL时树上虾丙酮提取物吸光度为0.39。药液浓度增加至0.8 mg/mL时树上虾丙酮提取物吸光度为0.48。药液浓度增加至1.2 mg/mL时树上虾丙酮提取物吸光度为0.2 mg/mL时吸光度的2.95倍。在最高浓度2.0 mg/mL时树上虾丙酮提取物吸光度达到了0.91，具有很好的还原能力。

图3 树上虾丙酮提取物的还原能力Fig.3 Reducing ability of for acetone extract of Pholidota cantonensis Rolfe

4 结论

本实验通过冷浸法得到树上虾丙酮提取物，采用ABTS法来评估其抗氧化能力并测定其还原能力。结果表明，当树上虾丙酮提取物在最低浓度时的ABTS自由基清除率为33.3%，表现出较好的ABTS自由基清除效果，在最高药液浓度2.0 mg/mL时，提取物对ABTS自由基的清除率达到了98.3%。同时，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率与时间有关，在作用时间为1 min时，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率为86.1%，作用时间为10min时，树上虾丙酮提取物对ABTS自由基的清除率超过98%。树上虾丙酮提取物在不同药液浓度时的还原能力测定结果表明，树上虾丙酮提取物的还原能力与药液浓度有关，在最高浓度2.0 mg/mL时树上虾丙酮提取物吸光度达到了0.91，具有很好的还原能力。