清热化瘀及益气清热化瘀中药对实验动物PGE2的影响

蒋顺琬，陈峙，赖文强，张勇，孙淑芬，麦庆春，陈大宇

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2019.35.004

[摘要] 目的 比较清热化瘀与清热益气化瘀中药浸渍治疗急性软组织损伤家兔的前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）的影响。方法 由华西医学中心动物实验中心提供40只SPF级雄性家兔，建立家兔急性软组织损伤动物模型，将其编号后，随机分为空白组、造模组、清热化瘀组以及清热益气化瘀组，观测其皮下瘀血、肌肉肿胀和肌肉颜色，检测24 h、72 h时各组受损肌肉组织的PGE2含量变化。结果 造模24 h、48 h、72 h时观测损伤症候指数并评分，72 h时，与空白组（0.00±0.00）分和造模组（3.08±0.26）分比较，清热化瘀组（2.02±0.86）分和清熱益气化瘀组（1.97±1.73）分损伤症状明显改善，但两组之间，差异无统计学意义（P>0.05）;检测造模24 h、72 h后的PGE2含量，72 h后造模组（98.79±2.78）与清热益气化瘀组（73.42±4.12）pg/mL和清热化瘀组（76.99±4.85）pg/mL比较，差异有统计学意义（P<0.05），但清热化瘀组与清热化瘀组之间，差异无统计学意义P>0.05）。结论 相比清热化瘀浸渍药液，清热益气化瘀浸渍药液对家兔软组织受损部位的PGE2抑制效果更好，对急性软组织损伤的消炎和修复有明显作用。

[关键词] 急性软组织损伤;淸热化瘀;益气清热化瘀;中药浸渍液;中药外治;PGE2

[中图分类号] R274.3          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2019）12（b）-0004-04

Effect of Heat of Blood and Invigorate Qi， Clear Heat and Remove Blood Stasis Chinese Medicine on Experimental Animal PGE2

JIANG Shun-wan， CHEN Zhi， LAI Wen-qiang， ZHANG Yong， SUN Shu-fen， MAI Qing-chun， CHEN Da-yu

Department of Orthopaedics， the Fourth Clinical Medical College of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine （Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine）， Shenzhen， Guangdong Province， 518030， China

[Abstract]Objective Effects of heat of blood and invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis Chinese medicine on prostaglandin E2 （PGE2） in rabbits with acute soft tissue injury. Methods 40 SPF male rabbits were provided by the Animal Experimental Center of Huaxi Medical Center ， Animal models of acute soft tissue injury in rabbits were established. After being numbered， they were randomLy divided into blank group， model group， heat of blood group and invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis group. The subcutaneous blood stasis， muscle swelling and muscle color were observed And Changes of PGE2 content in damaged muscle tissue of each group at 24 h，72 h were measured. Results The injury syndrome index was observed and scored at 24 h， 48 h， and 72 h. At 72 h， compared with the blank group （0.00±0.00）points and the model group （3.08±0.26）points， the heat of blood group （2.02±0.86）points combined with invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis group （1.97±1.73）points were significantly improved， but the difference between the two groups was not significant （P>0.05）. The PGE2 content after 24 h， 48 h and 72 h was detected， and the model was established after 72 h. The group （98.79±2.78）pg/mL was significantly different from the invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis group（73.42±4.12） pg/mL and the heat of blood group （76.99±4.85）pg/mL the difference was statistically significant（P<0.05）， but the heat of blood group and the heat of blood group no statistically significant difference （P>0.05）. Conclusion The phlegm-heating sputum immersion liquid and the invigorate Qi， clear heat and remove blood stasis sputum immersion liquid can reduce the soft tissue inflammation of the damaged part by inhibiting the increase of PGE2 content， and contribute to the recovery of acute soft tissue injury.

[Key words] Acute soft tissue injury;Clearing away heat and stasis;Yiqi Qingre Huayu;Chinese medicine impregnating solution;Chinese medicine external treatment;PGE2

急性软组织损伤是在劳动、运动等日常活动中极易发生的一种骨科常见疾患，软组织损伤的原因可分为扭伤和挫伤两种，具有发病急、肿痛、压痛、叩击痛以及运动障碍等症状，给患者的日常生活、工作和学习带来严重的影响[1]。机体受到外界暴力作用时产生PGE2，这是一种能引起炎症反应的生物活性很强的物质，会导致局部组织肿胀、疼痛[2-3]。现代医学治疗急性软组织损伤的方法主要有理疗、局部冷疗以及消炎镇痛药物等。中医学在治疗急性软组织损伤方面一直有其独特的优势，除了中药口服之外，中药外治也是临床广泛应用的一种治疗方法[4]。该次实验选取40只雄性家兔欲研究清热益气化瘀浸渍药液、清热化瘀浸渍药液治疗急性软组织损伤对家兔PGE2的影响，现报道如下。

1资料与方法

1.1  动物

SPF级雄性家兔40只（2.0～2.5 kg），由华西医学中心动物实验中心提供。

1.2  药物及仪器

前列腺E2放免试剂盒（解放军总医院）;清热益气化瘀浸渍液（该院制剂，由黄连、黄岑、黄柏、栀子、大黄、红花、冰片、地榆、黄芪等中药组成，除冰片之外，其余药材用清水漂洗1次，家蒸馏水煎取药液，冰片、人工麝香在95%酒精中融解后，加入煎取液，装瓶加铝盖高压灭菌后备用）与清热化瘀浸渍液（该院制剂，由黄连、黄岑、黄柏、栀子、大黄、红花、冰片、地榆等中药组成，除冰片之外，其余药材用清水漂洗1次，加蒸馏水煎取药液，冰片在95%酒精中融解后，加入煎取液，装瓶加铝盖高压灭菌后备用）;GC-1200全自动γ放免计数仪（北京大学深圳医院实验室）。

1.3  分组及造模

将家兔编号后，随机分为空白组、造模组、清热化瘀组以及清热益气化瘀组，每组10只家兔。其中，造模组、清热化瘀组以及清热益气化瘀组采用重物打击造模法，实验前24 h用8%硫化鈉于家兔大腿后侧脱毛，用200 g铁块从130 cm高沿空心管自由落体3次几大家兔大腿后侧软组织，造成家兔局部软组织损伤，以肉眼可见打击部位明显皮下出血及肿胀，数分钟后触摸有明显肿胀感为造模成功[5]。造模成功30 min后，各组于受打击处分别涂抹以下药液0.5 mL，清热化瘀组涂抹清热化瘀浸渍液（该院制剂）、清热益气化瘀组涂抹清热益气化瘀浸渍液（该院制剂）、空白组涂抹蒸馏水，造模组只造模不涂药[2]。

1.4  指数评定

造模后，每天观察和测量受损部位肿胀、瘀斑情况并且进行评分，评分标准见表1;第24小时、72小时用放免法检测家兔PGE2的含量。

表1   损伤症状评分标准

1.5  PGE2含量的测定

于造模后24 h、72 h分别在各组中任取5只家兔，采用拉椎造成颈椎脱位方法处死，用手术刀切开家兔受打击部位皮肤，切取受打击部位肌肉组织，加入生理盐水漂洗1 min，用滤纸吸干，切取肌肉组织每20 mg加入1 mL生理盐水，在匀浆器中均匀研磨15 min，倒入试管中，防止高速离心机离心15 min，取上清液备用，采用放免法测定匀浆液PGE2含量，具体操作严格按照试剂盒要求完成[2]。

1.6  统计方法

数据应用SPSS 16.0统计学软件进行分析，其中计数资料（%）进行χ2检验，计量资料（x±s）进行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  损伤症候指数比较

不同观察时间损伤指数评分统计结果见表2。

3个造模实验小组组内不同时点损伤症候对比。造模组在24 h、48 h和72 h 3个时点，皮下组织淤血、肌肉肿胀、肌肉颜色均由缓慢改善，损伤指数评分平缓降低，造模后48 h、72 h与24 h对比，72 h与48 h对比，差异有统计学意义（P<0.05）;清热化瘀组在几个观察时点的损伤指数评分下降速度较快，受损症状明显的到改善，造模后48 h、72 h与24 h对比，72 h与48 h对比，差异有统计学意义（P<0.05）;清热益气化瘀组在几个观察时点的损伤指数评分下降速度快，肌肉组织受损症状显著改善，造模后48 h、72 h与24 h对比，72 h与48 h对比，均差异有统计学意义（P<0.05）。

各个实验小组进行组间比较。造模后24 h，观测各组损伤症候时，空白组家兔评分为0分，其他3组均出现皮下组织淤血、肌肉肿胀、肌肉暗红，其中造模组评分最高，清热化瘀组次之，清热化瘀组最低，但3组评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）。造模72 h后，清热化瘀组和清热益气化瘀组的症状改善均好于造模组，但是两组之间的症状评分比较后，差异无统计学意义（P>0.05）。造模组在造模后的PGE2含量符合软组织损伤的变化趋势，在组织受损的72 h内PGE2含量持续升高。造模后选择的3个观测时点的结果显示，清热化瘀浸渍药液和清热益气化瘀浸渍药液持续在改善实验家兔的受损组织，且清热益气化瘀组效果优于清热化瘀组，单两者评分比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

表2   不同观察时间损伤症候指数评分统计结果[（x±s），分]

注：与空白组对比，P<0.05;与模型组对比，P<0.05

2.2  PGE2含量测定

造模后24 h、72 h各组PGE2含量比较如表3。

3个造模实验小组内部不同时点PGE2含量比较，造模组在造模72 h时，实验家兔PGE2含量少量上升，但是与24 h比较，差异无统计学意义（P>0.05）;清热化瘀组实验家兔在造模后30 min涂抹清热化瘀浸渍药液，受损部位的PGE2含量迅速降低，72 h时与24 h比较，差异有统计学意义（P<0.05）;清热益气化瘀组造模后涂抹清热益气化瘀浸渍药液，药物持续降低受损部位受损部位的PGE2含量，72 h时与24 h比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

4组进行组间比较。造模后24 h，测定PGE2含量时，空白组家兔较其余3组明显低;经过造模的3组家兔的PGE2含量相差不大，清热益气化瘀组最低，造模组最高，3组之间比较，差异有统计学意义（P<0.05），是由于清热化瘀浸渍药液和清热益气化瘀浸渍药液清热益气化瘀浸渍药液的药效开始起作用。造模72 h后，造模组的PGE2含量最高，清热化瘀组PGE2含量比清热化瘀组高，造模组与清热益气化瘀组和清热化瘀组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。但清热化瘀组与清热化瘀组之间，差异无统计学意义（P>0.05）。造模组在造模后的PGE2含量符合软组织损伤的变化趋势，在组织受损的72 h内PGE2含量持续升高。造模后24 h、72 h观测的结果可见，清热化瘀浸渍药液和清热益气化瘀浸渍药液持续在降低实验家兔受损部位的PGE2含量，且清热益氣化瘀组的下降幅度更大。

表3   造模后24 h、72 h各组家兔PGE2含量比较[（x±s），pg/mL]

注：与空白组对比，P<0.05;与模型组对比，P<0.05

3  讨论

急性软组织损伤多是因为受到外部暴力撞击、强力压迫等，临床表现一般为局部皮肤青紫瘀斑、组织疼痛肿胀、肢体行动不便等[7]，根据其病情不同，可将其分为筋断、筋走、筋结、筋歪、筋弛、筋挛、筋翻、筋错位等不同类别。中医将急性软组织损伤归为“伤筋”的范畴，认为其病机为“气滞与血瘀”，“若因伤折内东经络，血行之道不得宣通。积淤不散，为肿为痛”[8]。PGE2是一种机体内合成的中药炎症细胞因子，与缓激肽或其他炎症介质作用，可加剧体内的炎症反应[3]。有研究表明，在炎症急性期，损伤部位PGE2含量增加，导致毛细血管的通透性增加，白细胞趋化，造成组织水肿，抑制PGE2可加速修复受损组织[9]。因此，中医治疗急性软组织损伤主要是活血散淤、消肿通络、行气止痛[10]。中药外治是治疗组织创伤的常用方法，是中医治疗“筋伤”的一大特色，药物中的有效成分通过皮肤吸收直接作用于受伤区域，可保持受伤区域的药物有效成分浓度，起到消炎镇痛的功效[11-12]。

目前中医外治急性软组织损伤大多用淸热化瘀浸渍药液，该次实验选用的外治药物还有清热益气化瘀浸渍药液（两种中药浸渍液均为该院自制）。以上两种中药浸渍液成分大致相同，且均有清热化瘀、通调经络、消肿止痛的功效，只是清热化瘀浸渍药液比清热益气化瘀浸渍药液少了黄芪两味中药[6]，黄芪能具有行气益气的功效，在清热化瘀的基础上增强益气行气补气的药效。清热益气化瘀浸渍药液以黄连为主药，配以黄岑、黄柏为臣药。黄连清热燥湿，干泻火解毒;黄芩燥湿泄热，凉血止血，具清热与止血双重作用;黄进柏清热燥湿，退热除疹;地榆凉血止血与黄连相配，加强清热解干毒之力;红花活血祛瘀，通调经脉。诸药配伍以黄连之君泄中焦之火;黄芩泄上焦之火，黄柏泄下焦之火为臣;栀子通泄3焦之火，冰片甘凉解毒，止痛消肿，配以黄芪益气利水及大黄、红花活血化瘀、地榆凉血收敛合为佐使;共凑清热益气化瘀，通调经络，消肿止痛。上述诸药合用，共奏行气清时热活血、消瘀止痛之效，从而有效缓解急性软组织损伤带来的各种症状。该次研究中，家兔造模24 h后PGE2含量升高，经过造模的各组含量相差不大，但给予中药浸渍液的两组在72 h后，PGE2含量分别为（76.99±4.85）pg/mL、（73.42±4.12）pg/mL，远低于造模组（98.79±2.78）pg/mL。罗宗键等人对大鼠进行软组织损伤造模使用丹归消肿膏治疗，分为高、中、低剂量组以及模型组并进行观测，发现PGE2含量受伤后逐渐上升，在24 h升高至高峰，24 h后逐渐降低，给予药物的3组在72 h后PGE2含量分别为（4.06±0.21）pg/mL、（4.11±0.31）pg/mL、（4.01±0.32）pg/mL，低于模型组（4.38±0.25）pg/mL。家兔和大鼠在软组织损伤后的PGE2含量在24 h内均在上升，之后逐渐下降，但是中药外治可快速降低PGE2含量，有利于动物软组织恢复。

通过该次动物实验发现，淸热化瘀中药浸渍液与益气清热化瘀浸渍药液对急性软组织受损的家兔均有治疗作用，它们能抑制PGE2含量增高，减少软组织受损部位炎症，缓解损伤部位症状，且益气清热化瘀浸渍药液的治疗效果更为明显。

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（收稿日期：2019-09-11）