金露梅对T2DM大鼠糖脂代谢关键酶和激素表达的影响

严培瑛，刘力宽，曾 阳，陈海娟，李美华，李锦萍

(青海师范大学生命科学学院,青海 西宁 810008)

糖尿病是以升高血糖为特征的代谢性疾病，由胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损引起，可引发多种并发症[1-2]，主要分为1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus，T1DM)和2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)。我国糖尿病以T2DM为主，病因和发病机制目前均不明确[3]，明显特征是既有胰岛素抵抗，又有胰岛素分泌不足[4]。近年来，T2DM已成为威胁人类健康的常见疾病[5]。

金露梅(FruticosapotentillaL.)为蔷薇科(Rosaceae)委陵菜属(Potentilla)落叶灌木，广泛分布于北温带地区，主要生于海拔1 000～4 500 m的林缘、水甸子、草原、草地及高山灌丛中[6]。前期研究发现，金露梅提取物对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶和醛糖还原酶均具有抑制作用。本文研究金露梅95%甲醇提取乙酸乙酯萃取部位(MEE)对T2DM大鼠血糖变化的影响，以及对胰岛素、抵抗素、瘦素、葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)基因表达的影响，探究金露梅抗T2DM的作用机制。青藏高原地区金露梅资源十分丰富，目前还未有系统研究，民间相关资料记载金露梅有降糖、降脂的作用，本研究为后期金露梅的开发提供理论基础。

1 材料

1.1实验动物普通级SD大鼠，♂，体质量(180±20)g，西安交通大学实验动物中心提供，批号：SCSK(陕)2012-003。

1.2药物与试剂金露梅原植物采自青海省大通达坂山(海拔3 006 m，37° 8' 42" N，101° 50' 32" E)，MEE提取分离参照文献[6]。TRIzol购于Invitrogen Life Technologies；链脲佐菌素(STZ)，购于美国Sigma公司；逆转录试剂盒和荧光PCR试剂盒，购于大连宝生物工程公司；葡萄糖试剂盒，购于上海荣盛生物药业公司。

1.3仪器XMARK全自动酶标仪、Thermal Cycler PCR扩增仪、IQ5荧光定量PCR仪，均购于Bio-Rad公司。

2 方法

2.1造模与给药参照文献[7]，进行造模与给药。给药剂量分别为MEE高剂量组(500 mg·kg-1)、MEE低剂量组(250 mg·kg-1)、盐酸二甲双胍阳性药物组(75 mg·kg-1)、糖尿病模型组(等量水)和空白对照组(等量水)。

2.2血糖测定在给药前、给药7、14、21、28 d时，所有大鼠禁食不禁水12 h，经尾静脉采血，用葡萄糖试剂盒检测大鼠的空腹血糖，结果以mmol·L-1表示。

2.3糖脂代谢关键酶和激素的表达量测定给药28 d后，大鼠股动脉取血处死，剖开腹腔，取肝脏组织、胰腺组织、肾周脂肪组织各100 mg，放入冷生理盐水中洗净血污，用无菌吸水纸吸干水分，液氮冷冻。按试剂盒说明书操作，提取各组织总RNA，紫外分析检测RNA纯度、浓度和完整性。以Oligo dT为引物，按逆转录试剂盒说明书程序操作合成第一链cDNA。

2.4qRT-PCR反应从NCBI获得大鼠胰岛素、抵抗素、瘦素、GK、G-6-Pase、GAPDH基因序列，截取基因序列中的CDS，采用Primer 3 Input 设计引物，并采用NCBI-BLAST检验引物特异性。引物序列和产物大小参照文献[7]。qRT-PCR反应采用试剂盒，在荧光定量PCR仪进行，反应条件参照文献[7]。选取GAPDH作为参照基因，采用2-ΔΔCt计算相对表达量[8]。

3 结果

3.1血糖变化如Tab 1所示，经药物治疗14 d后，二甲双 胍组、MEE高剂量组与模型组相比，空腹血糖值均有下降(P<0.05)，降糖率分别为15.63%、12.44%。治疗21 d后，二甲双胍组、MEE高、低剂量组与模型组相比，空腹血糖值均有明显下降(P<0.01，P<0.05)，降糖率分别为24.38%、20.49%、19.67%。治疗28 d后，二甲双胍组、MEE高、低剂量组与模型组相比，空腹血糖值均有明显下降(P<0.01)，降糖率分别为38.44%、34.71%、28.54%。表明MEE能明显降低T2DM大鼠的血糖。

Tab 1 Effect of MEE on blood glucose of T2DM

##P<0.01vscontrol;*P<0.05,**P<0.01vsmodel

Tab 2 mRNA expression levels of rats in each experimental

##P<0.01vscontrol;*P<0.05,**P<0.01vsmodel

3.2糖脂代谢关键酶和激素基因表达结果如Tab 2所示，与模型组相比，二甲双胍组和MEE高、低剂量组均能明显上调胰岛素基因表达(P<0.05)，明显下调抵抗素和瘦素基因表达(P<0.01)，明显提高GK基因表达(P<0.05)；与模型组相比，二甲双胍组、MEE高剂量组能明显下调G-6-Pase基因表达(P<0.01)，MEE低剂量组能明显下调G-6-Pase基因表达(P<0.05)。

4 讨论

在本研究中，用金露梅95%甲醇提取乙酸乙酯萃取部位治疗后，T2DM大鼠餐后血糖明显降低，抵抗素、瘦素水平均下调，葡萄糖激酶基因表达明显上升，葡萄糖-6-磷酸酶基因表达明显下降。表明金露梅95%甲醇提取乙酸乙酯萃取部位中可能存在某种成分，可以对胰岛素、抵抗素、瘦素三者的相互作用产生影响，形成某种调节通路，且能调节GK、G-6-Pase的基因表达，从而调节T2DM中的某些脂代谢紊乱。综上所述，本研究发现金露梅能够有效降低T2DM大鼠餐后血糖，且能够调节多种糖脂代谢相关激素的表达，部分恢复T2DM大鼠胰岛素水平，以达到抵抗T2DM的目的。