牛羊布氏杆菌病临床样品采集与送检技术要点

布氏杆菌病是布氏杆菌引起牛、羊等动物和人感染的一种传染性病。一旦动物感染本病，妊娠动物和雄性动物主要出现流产和睾丸炎的临床症状。布氏杆菌病不仅对畜牧业生产造成极大的危害，同时也严重威胁人类健康和公共卫生安全。对于临床采样和送检过程的严格规范，是避免布氏杆菌病流行的基础，采集样品主要来自流产母牛的血清以及胎衣或胎儿，采集时应取发病典型的动物样品送检到实验室，运用血清学和细菌学等实验室检查法进行检测。

一、样品采集

1.采集血液样品。布氏杆菌会感染人，所以在采集临床样本的时候一定要保护好自身安全。在采血前必须穿戴质量较好的专用工作服、手套、口罩、帽子、护眼镜及鞋靴等，做好一切采样前的工作准备。应使用一次性塑料注射器采血管进行采血，根据采血量的需求选择针管的大小型号，针对牛羊的采血应选择中型或者大型的针头。采血前要准备记号笔、毛剪、消毒水、消毒棉、试管、自封袋等等。采血时对采血部位进行剪毛消毒，先用碘伏由里至外螺旋式擦拭，后用酒精由外至里的螺旋式擦拭消毒。动物采血最佳时间是在早晨空腹时进行，采集临床的样品要选用典型的病例。牛、羊等大动物采血一般可选取静脉最显著的部位。垂直下针，一边进针一边缓慢回抽直到见到回血，然后放开按压的左手，一般需要抽取血液5mL作为样本。采血完毕后，用洁净的酒精棉球按压至不再流血，注意要避免形成瘀血块和感染。采血后对样品进行编号，每个样品标记唯一的编号。按相关要求严格填写采样表格，清楚记录每一个样品对应的来源。针管要倾斜45°放置，净置到血液凝固之后再进行挪动。

2.采集病理组织学样品。病理学检查也是检测布氏杆菌病重要的实验室方法，用于病理组织学检验的样品主要是流产的胎儿胎衣、患病奶牛群的乳汁、淋巴、脾脏、肝脏、脐带和公牛公羊的生殖器官，用于病理组织学检验的组织样品首先要保证取材新鲜。在采样时选病变最明显的组织器官的部位，也要连同部分健康的组织一起采集。将采集的组织切成小的组织块，然后立即完全浸泡入95%酒精内进行固定。如果不能在2d内进行检验，在经24h固定后再更换一次固定液，然后密封贴上标签送到检验中心进行检测。对于奶牛乳汁要进行冷藏保存。

二、样品采集的注意事项

1.采集适时适量和典型部位的样品。要根据具体的情况确定采集样品的时间，牛羊布氏杆菌病要在疾病发生最明显的时候采集样品。样品还要根据实验室检测方法的不同来确定采集量，采集病例的样品数量要足够，如果开始采集量少，再次重新采集的难度将大大增加，不仅浪费时间而且还会错过最佳采集样品的时机，影响实验检测的结果。

确定采集样品的品种、生理状态、年龄和临床症状。对牛羊布氏杆菌病进行血清学检测，应采集患病牛羊血液样品，主要进行血清凝集试验和补体结合试验，奶牛还应该对乳汁性质进行检测。对于组织病理学检查，牛应该采集淋巴、肝脏、脾脏、流产的胎儿胎衣等，羊的组织学检查与牛大致一样。最好采集还未用药物治疗并且症状最明显的病例样品，炎症症状明显的病例要采集发病部位的脓汁进行细菌学检测。

2.采集样品注意事项。采集牛羊组织和血液需要无菌操作，采集样品所用到的器具和容器要灭菌处理。要避免人为污染样品，还要尽量避免其他细菌和病毒的污染，影响实验室检测的结果。送检样品的资料表格要尽可能的详细。实验室检验人员对送检样品检测的重要依据主要是送检表格，这是分析样品检测结果的重要参考资料，因此送检表格一定要对应做好。

三、送检要点

在炎热的夏季，血样大概放置1h就会析出血清。在冬季血清不容易析出，需要将采血管倾斜放在37℃恒温箱中静置2h左右。血清析出前不能放入冰箱中进行储藏，不然血清非常难析出，没有分离血清的全血放置时间不宜超过12h，不然很容易发生溶血。要注意只有待血清析出之后，才可以进行离心操作分离血清。

送检的样品编号要一一对应，送检的时候应该将采集的样品放到冷藏装置中与采样表格一起送到检测中心。送检的血液样品要注意避免出现溶血现象，若出现溶血现象，可能是放置时间太久、全血凝血不良、离心时过度的震荡等原因所致。