培养基制作应注意的几个事项

吐尔地·艾买尔

（新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆乌鲁木齐 530011）

1 把好制作培养基原、辅料质量关

制作培养基的基础就是肉肝胃酶消化汤（浸出液），因而牛肉、牛、羊、肝、胃等基础原料要选择新鲜、无异嗅、无病变、有弹性、浸出液透明清朗，能提供丰富的营养成分。制备肉浸汁，除选好的材料外，浸渍方法也很重要，浸泡目的是使肉组织的水溶性营养物质充分的溶解在水中。经做过的冷浸法和热浸法煮肉汤的对比实验表明，冷浸法的效果要比热浸法好，现多采用冷浸法。由于菌种培养基要求比较高。因此配制时力求使用新鲜原材料，现配现用，以保证质量。不马上使用的肉汤等要先流通一小时后送冷库保存备用。对于辅助材料，化学试剂等，都要先经厂化验室检验合格后方可使用。

2 制备血斜培养基应注意的几点

2.1 做好消毒准备工作

无菌间要彻底熏蒸消毒，采血器皿、分装物品均要先高压消毒，以防污染。无菌操作，严把质量关。

2.2 普通琼脂在未加血前的制作是很关键的

首先pH值要适宜，一般控制在8.0左右即可。另外加琼脂时也是有要求的。我们做过加粉状琼脂和条状琼脂的对比实验，结果加粉状琼脂的培养基加血后不溶血，呈片状，不能用。而加条状琼脂的加血后溶血，效果较好。因而制作鲜血琼脂培养基时，都采用条状琼脂。

2.3 普通琼脂加血前要彻底消毒

待温度降至48～50℃时，加入采好的羊血，这样既不至于温度太高破坏血成分，也不至于温度太低以至凝固，不能分装。所以控制好温度比较重要。

3 注意控制好培养基的最终pH

（1）细菌在培养基中分裂繁殖除温度、空气、营养条件外，对pH的反应也很敏感。酸碱度不适宜即便营养最丰富的培养基，细菌也不能很好地生长繁殖，或根本不发育。因而制备培养基必须正确测定pH。一般测定法有：a.试纸测定法，此法简单方便，但有误差。b.比色管测定法，现普遍采用此法。

（2）pH测定最重要的是防止反复加酸加碱，最好一次加妥。因为反复加酸加碱会增加培养基中氯化钠含量，盐含量太高会使渗透压失去平衡而造成细菌的死亡，而且反复加酸加碱易使培养基发生浑浊和沉淀。为避此现象发生，采取加碱量计算的方法防止盲目加碱。可小试1000ml加碱量，从而推算全部加碱量。另外还应注意以下几点：

①标准管必须准确，定期用电比校对。

②被测溶液和培养基的温度不能太高或太低，因为指示剂在培养基内的反应与温度有关。为真实反应培养基的pH值，测时温度应在20～25℃左右近于体温。

③比色管要颜色、厚薄、粗细必须一致。

④加指示剂的吸管和滴管应避免与培养基接触，否则培养基进入指示剂内，造成指示剂反应颜色不准，影响结果。

⑤观察时应在自然光下观察，避免直对着太阳光和灯光。

4 控制好消毒温度

培养基的消毒是否彻底是很关键的，消毒温度和时间是保证培养基质量的重要一环，既要达到灭菌目的，又要保证各种营养成分不受或少受破坏。一般培养基消毒都是116℃，20～30min，而特殊培养基（如糖类培养基、石蕊牛奶培养基等）就有些特殊之处。温度太高会导致糖分解产酸。以前曾多次发生过冲塞、变色等现象，后经几次实践，确定最佳消毒方案即110℃，20min，而且上下磅不能太快，以后很少再出现此类事情。

5 制作消化汤时应注意的事项

消化汤在培养基制作时应用非常普遍，无论是猪胃消化汤还是肉肝胃酶消化汤以及胰酶消化汤，其实质都是酶促反应。因此要想消化彻底，必须掌握影响酶促反应速度的因素。

5.1 温度对酶促反应的影响

酶是蛋白质，消化温度太高会使酶变性失活。酶的最适温度是酶的反应速度达到最高峰的温度，一般最适宜温度为40～50℃，60℃以上即开始变性失活。经多次实践，认为猪胃消化汤最适宜温度为50～53℃，肉肝胃酶消化汤是56～58℃，消化液较清朗、彻底。

5.2 pH对酶促反应的影响

酶的活性受所在环境pH影响，溶液pH不同，酶的活性也不同。在其它条件不变时，酶在一定的pH范围内活性最高，此pH为最适pH，胃蛋白酶最适pH为1.5～2.5，我们一般控制在1.6～2.0，胰蛋白酶最适pH为7.8～8.4。因而无论搞猪胃消化汤还是肉肝胃酶消化汤都要加盐酸，根据经验，猪胃消化汤按1%加，肉肝胃酶消化汤按1.2～1.3%量加，测pH为1.8～2.0为宜。

5.3 底物浓度对酶促反应的影响

底物浓度与反应速度之间存在一定的函数关系。肉、肝、胃均为底物，因而要控制好底物与水的比例。一般配制猪胃液的比例是：猪胃：蒸馏水＝3：10，如果用于计数或选菌最好是3.5～10。肉肝胃酶消化汤比例为：新鲜牛肉2kg，新鲜猪肝0.5kg蒸馏水10000ml。

5.4 酶浓度对酶促反应的影响

当其他条件相同时，酶促反应速度与酶浓度成正比。肉肝胃酶消化汤中加胃蛋白酶0.4～0.5%。猪胃消化酶大多存在于腺体所分泌的消化液中，不需要另加，如胃质量差可适当加些胃蛋白酶促进消化。

5.5 消化时间

规程规定胃18～24h，视消化而定。一般我们消化22～24h便停止消化，视汤清朗为宜。抽取上清加热煮沸，按2.5～3.0%量加入2N氢氧化钠溶液调pH达3.8左右，停止消化，汤备用。

以上就是培养基在制作时的几个问题，以及影响消化汤消化程度和速度的几个因素。