抹茶对实验性小鼠急性酒精性肝损伤的干预作用研究

王 英 刘慧芳 楼招欢

酒精性肝病（ALD）在我国已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，寻找合适的药物或治疗手段以防控ALD的发生发展，已是当务之急。已知大量乙醇摄入后其代谢过程中产生的活性氧自由基介导的脂质过氧化是急性酒精性肝损伤的重要发病机制。植物性酚类物质可以提高酶类抗氧化剂的活性，提高机体清除自由基的能力，减轻肝细胞脂质过氧化损伤；天然抗氧化植物及其成分已成为抗急性酒精性肝损伤药物研究的热点[1-3]。绿茶多酚是绿茶的主要活性成分，前期研究发现，绿茶多酚通过抗氧化应激，阻抑细胞色素C释放，对酒精性肝损伤小鼠肝细胞具有一定的保护作用[4]。抹茶是新鲜绿茶经特殊工艺制成超细粉末，最大程度地保留了绿茶多酚等有效成分，且易被人体吸收，具有很好的开发应用前景[5]。课题组前期发现抹茶具有良好的降血脂作用，能够改善模型高脂血症模型大鼠肝功能指标，降低肝指数，具有一定的保肝作用[6]。但其对酒精性肝损伤的作用尚未见有报道。本文观察抹茶对急性酒精性肝损伤模型小鼠肝功能指标及氧化相关指标的影响，以期为抹茶的进一步开发利用提供参考。

表1 抹茶对急性酒精性肝损伤小鼠体质量的影响（g

表1 抹茶对急性酒精性肝损伤小鼠体质量的影响（g

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；正常对照组和模型对照组予纯水灌胃；联苯双酯组按照0.1mL·10g-1体质量灌胃0.375mg·mL-1联苯双酯溶液；抹茶组按0.1mL·10g-1体质量灌胃0.1g·mL-1抹茶溶液

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1 实验材料

1.1 动 物 清洁级ICR小鼠40只，雌雄各半，体质量24～25g，购自浙江省医学科学院动物中心，合格证号：SCXK（浙）2008-0033。于室温 25±2℃，相对湿度50%～70%饲养，自由采食饮水。

1.2 仪器设备 东芝ACCUTETBA-40FR全自动生化分析仪（东芝三厂医疗株式会社）；Power Wave340酶标仪（美国Bio-TEK公司）；XHF-b高速分散器（内切式匀浆机）（宁波新芝生物科技有限公司）。

1.3 药物及试剂 抹茶，由绍兴御茶村茶业有限公司提供。阳性药：联苯双酯滴丸（规格：1.5mg，浙江万邦药业有限公司，批号130115）碱性磷酸酶（ALP，20140113）、丙氨酸氨基转氨酶（ALT，批号20140305）、天门冬氨酸氨基转氨酶（AST，批号：20140227）试剂盒，购自杭州唐荣科技有限公司；超氧化物歧化酶（SOD，批号20140415）、丙二醛（MDA，批号20140412）、考马斯亮蓝（批号20140411）试剂盒，购自南京建成生物工程研究所。

2 实验方法

2.1 动物分组及处理 取ICR小鼠，称定体质量，按组间体质量均衡原则分为正常对照组、模型对照组、联苯双酯组（3.75mg·kg-1）、抹茶组（1.0g·kg-1），每组10只。除正常对照组外，其余各组于每天上下午分别按0.1mL/10g体质量灌胃给予稀释1倍的52度红星二锅头，连续9天复制急性酒精性肝损伤模型；自造模第1天起，除正常对照组及模型对照组灌胃给予纯水外，其余各给药组按0.1mL/10g体质量灌胃量分别灌胃给予0.375mg·mL-1联苯双酯溶液和0.1g·mL-1抹茶溶液，每天1次，连续9天。

2.2 一般体征观察 每日称定各组小鼠体质量并记录，观察毛发、活动等情况。

2.3 血生化指标检测 末次给药后，各组小鼠禁食不禁水 12h，摘眼球取血，离心（4000r/min，10min），取血清，全自动生化分析仪检测各小鼠血清肝功能指标（AST、ALT、ALP）。

2.4 肝脏指数检测 采血后，解剖各小鼠，迅速分离肝脏，称定肝脏质量，计算肝指数。肝指数=肝重/体质量×100%。

2.5 肝组织MDA水平及SOD活性检测 精确称取0.5g肝组织，用生理盐水制作成10%肝组织匀浆，离心，取上清，测定肝组织MDA含量；另取肝组织0.5g同法制成1%肝组织匀浆，离心，取上清，测定肝组织蛋白含量及SOD活性。

2.6 统计学方法 计量数据以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析多重比较；P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 对急性酒精性肝损伤小鼠体质量的影响 与正常组比较，模型组小鼠体质量从造模开始（第2天）逐日下降（P＜0.01）；与模型组比较，抹茶能改善过量酒精摄入所导致的体质量减轻症状。见表1。

3.2 对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能指标的影响与正常组比较，急性酒精性肝损伤小鼠血清ALT（P＜0.01）、AST（P＜0.05）及 ALP 活性增加；与模型组比较，抹茶对ALT、AST无显著性影响，但能显著降低血清 ALP 活性（P＜0.01），见表 2。

3.3 对急性酒精性肝损伤小鼠脏器系数的影响 与正常组比较，模型组小鼠肝脏指数显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，联苯双酯和抹茶均能有效降低模型小鼠肝脏指数（P＜0.01）。提示抹茶可以缓解急性酒精性肝损伤小鼠的肝肿大，见表3。

表2 各组急性酒精性肝损伤小鼠肝功能指标比较（U/L

表2 各组急性酒精性肝损伤小鼠肝功能指标比较（U/L

注：与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；ALT：丙氨酸氨基转氨酶；AST：天门冬氨酸氨基转氨酶；ALP：碱性磷酸酶；正常对照组和模型对照组予纯水灌胃；联苯双酯组按照0.1mL·kg-1体质量灌胃0.375mg·mL-1联苯双酯溶液；抹茶组按0.1mL·kg-1体质量灌胃0.1g·mL-1抹茶溶液

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表3 各组急性酒精性肝损伤小鼠肝指数比较（

表3 各组急性酒精性肝损伤小鼠肝指数比较（

注：与正常对照组比较，△P＜0.05；与模型组比，**P＜0.01；正常对照组和模型对照组予纯水灌胃；联苯双酯组按照0.1mL·kg-1体质量灌胃0.375mg·mL-1联苯双酯溶液；抹茶组按0.1mL·kg-1体质量灌胃0.1g·mL-1抹茶溶液

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3.4 对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织MDA、SOD的影响 与正常组比较，模型组小鼠肝组织MDA水平明显升高（P＜0.05），SOD 活性显著下降（P＜0.05）；与模型组比，联苯双酯和抹茶能显著降低模型小鼠肝组织 MDA 水平（P＜0.01，P＜0.05），提高肝组织 SOD活性（P＜0.01），见表 4。

表4 各组急性酒精性肝损伤小鼠肝组织MDA水平和SOD活性比较（

表4 各组急性酒精性肝损伤小鼠肝组织MDA水平和SOD活性比较（

注：与正常对照组比较，△P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；MDA：丙二醛；SOD：超氧化物歧化酶；正常对照组和模型对照组予纯水灌胃；联苯双酯组按照0.1mL·kg-1体质量灌胃0.375mg·mL-1联苯双酯溶液；抹茶组按0.1mL·kg-1体质量灌胃0.1g·mL-1抹茶溶液

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4 讨论

经胃肠道吸收的乙醇约90%在肝细胞内通过胞浆ADH和线粒体ALDH途径、微粒体CYP2E1乙醇氧化系统途径及内质网CAT途径氧化代谢，上述代谢过程产生的大量自由基介导了肝细胞内氧化应激反应，进而损伤肝细胞[7]。机体内存在包括SOD等酶类及包括还原型谷胱甘肽（GSH）等非酶类两大抗氧化防御体系，以清除氧自由基，阻断组织过氧化损伤；MDA是活性氧自由基氧化生物膜过程中产生的脂质过氧化产物，其水平的高低与氧化应激对肝脏的损害程度相关[8]。本研究结果显示，1天2次给予经稀释的红星二锅头，模型小鼠体质量明显减轻，血清ALT、AST及ALP水平增加，肝指数增大，肝组织MDA水平显著升高，SOD活性显著降低，提示模型小鼠肝功能受损且可能存在脂质过氧化反应。给予抹茶干预，能有效拮抗模型小鼠体质量减轻，降低肝组织MDA水平，提高SOD活性，改善肝肿大。提示抹茶对急性酒精性肝损伤具有一定的保护作用，该作用可能与其通过增强机体抗氧化能力，清除自由基，抑制脂质过氧化反应有关。