气相色谱测定海鲜菇中35种农药残留

马婧妤，刘 莉，虞 冰，吾建祥，杨德毅，刁银军

(1.金华市农产品质量综合监督检测中心,浙江 金华 321017 2.金华职业技术学院,浙江 金华 321017)

海鲜菇(Hypsizygusmarmoreus(Peck)H.E.Bigelow)又名斑玉蕈、真姬菇、蟹味菇等，隶属于担子菌门层菌纲伞菌目白蘑科玉蕈属[1～3]。作为一种营养丰富的真菌类食品，不仅富含蛋白质、氨基酸、维生素、酚类、多糖、微量元素如K、Mg、Na、P、Ca等，还具有清除自由基、抗预防动脉硬化、调节血糖、改善肠道循环等功效[4-8]。海鲜菇属于药食两用食品，深受中国、日本等亚洲国家消费者的欢迎。

蔬菜中农药残留的检测方法主要有气相色谱法[9]，气相色谱质谱法[10]，气相色谱-串联质谱法[11]，液相色谱法[12]，液相色谱-串联质谱法[13]等。但是关于海鲜菇的农药残留的报道鲜见，本文以金华农产品企业生产的海鲜菇为研究对象，建立了气相色谱技术(GC)检测海鲜菇中有机磷农药和拟除虫菊酯农残残留的方法，该方法灵敏度较高，能满足农残限量要求的测定，且方法简便快速，适合金华蔬菜中农药残留的检测和确证分析，对推进蔬菜农残检测技术的提高，保障人们健康具有重要作用。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器 Agilent 7890B气相色谱仪(气相色谱-火焰光度(FPD)检测器和气相色谱电子捕获(ECD)检测器)(美国安捷伦(上海)科技公司)；N-EVAP氮吹仪(美国Organomation公司)；C18固相萃取管(Agilent)，滤膜(0.2μm 有机溶剂膜)。

乙腈、丙酮、无水硫酸镁、醋酸钠、(分析纯,国药集团)。农药标准品：敌敌畏、乙酰甲胺磷、二嗪磷、久效磷、甲基嘧啶磷、甲基对硫磷、马拉硫磷、甲基异硫磷、喹硫磷、丙溴磷；甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、毒死蜱、倍硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、水胺硫磷、三唑磷等20种有机磷农药标准品；六六六、五氯硝基苯、百菌清、乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、三氯杀螨醇、异菌脲，联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯，氰戊菊酯、溴氰菊酯等15种拟除虫菊酯农药标准品。农药标样购于天津思亿浩远科技有限公司，浓度均为100μg/kg。实验室用水为超纯水。

实验用海鲜菇来自金华地区蔬菜基地企业送检。

1.2 农药混合标准溶液 根据农药的性质、保留时间和分离度不同，对待测农药进行分组

20种有机磷农药分为：

A组：敌敌畏、乙酰甲胺磷、二嗪磷、久效磷、甲基嘧啶磷、甲基对硫磷、马拉硫磷、甲基异硫磷、喹硫磷、丙溴磷。

B组：甲胺磷、甲拌磷、氧化乐果、毒死蜱、倍硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、水胺硫磷、三唑磷等20种有机磷农药。

15种拟除虫菊酯：六六六、五氯硝基苯、百菌清、乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、三氯杀螨醇、异菌脲，联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯，氰戊菊酯、溴氰菊酯。

根据农药在检测器上的响应值，逐一准确吸取一定体积的同组别的单个农药标准储备液，分别注入10mL容量瓶中，用丙酮稀释，至刻度，配制成所需的混合农药标准储备液，使用时用丙酮稀释成所需质量浓度的标准工作液。

1.3 气相色谱条件 测定有机磷农药，检测器：FPD；色谱柱：DB-1701(30m×320μm，0.25μm)进样口温度：220℃；检测器温度：250℃；流量：2.8mL/min；分流进样：不分流；进样量：1.0μL。柱升温程序：初始温度100℃，保持2min，然后以6℃/min速率升至230℃，保持10min。

测定拟除虫菊酯农药，检测器：ECD；色谱柱：DB-1色谱柱(30m×320μm，0.25μm)进样口温度：220℃；检测器温度：250℃；流量：2.8mL/min；分流进样：不分流；进样量：1.0μL。柱升温程序：初始温度100℃，保持2min，然后以6℃/min速率升至230℃，保持10min。

1.4 前处理

1.4.1 提取 称取粉碎后的海鲜菇样品25g，用乙腈50mL匀浆提取2min，过滤，滤液中加入5～7g氯化钠的具塞量筒中，振荡后静置30min后分层，移取10mL上层液于10mL试管中。

1.4.2 FPD检测器测定的样品 将待测液经氮吹至近干，用丙酮定容至5mL，漩涡混匀；静置10min，取上清液经0.2μm有机滤膜过滤后上机进样检测。

1.4.3 ECD检测器测定的样品 将待测液经氮吹全干，用正己烷定容到2mL，漩涡混匀；静置10min，经固相萃取柱净化，先用5mL正己烷：丙酮(9：1)活化，再用5mL正己烷平衡，活化液和平衡液弃去，样品经SPE小柱过滤(10mL的正己烷：丙酮(9：1)滤液)，用具塞量筒收集。再次氮吹至5mL以下，用正己烷定容至5mL，取上清液经0.2μm有机滤膜后上机进样检测。

2 结果与讨论

2.1 海鲜菇基质色谱图 按照1.3的色谱条件和1.4实验方法实验，有机磷农药A组标准溶液的色谱图(图1)；有机磷农药B组标准溶液的色谱图(图2)；除虫菊酯类农药标准溶液色谱图(图3)；GC-FPD检测器条件下海鲜菇色谱图(图4)；GC-ECD检测器条件下海鲜菇色谱图(图5)。由图可见，海鲜菇的化学成分对本方法的农药残留分析基本没有影响且农药标准溶液峰形较好，因此该实验条件可准确定性、定量。

图1 有机磷农药A组分标准溶液的色谱图

敌敌畏(6.65min)、乙酰甲胺磷(12.08min)、二嗪磷(14.33min)、久效磷(15.77min)甲基嘧啶磷(16.55min)、甲基对硫磷(17.06min)、马拉硫磷(17.517min)、甲基异柳磷(18.25min)、喹硫磷(18.49min)、丙溴磷(19.74min)。

图2.有机磷农药B组标准色谱图

甲胺磷(8.33min)、甲拌磷(13.14min)、氧乐果(14.21min)、乐果(15.91min)、毒死蜱(16.96min)、倍硫磷(17.41min)、杀螟硫磷(17.61min)、对硫磷(18.08min)、水胺硫磷(18.58min)、三唑磷(24.37min)。

图3.除虫菊酯农药标准色谱图

六六六-1(6.03min)、六六六-2(6.62)、五氯硝基苯(6.87min)、百菌清(7.13min)、乙烯菌核利(8.63min)三唑酮(10.25min)腐霉利(11.52min)、三氯杀螨醇(12.99min)、异菌脲(16.52)、联苯菊酯、甲氰菊酯(17.29min)、三氟氯氰菊酯-1(18.54min)、三氟氯氰菊酯-2(18.86min)、氟氯氰菊酯(21.09min)、氯氰菊酯(21.63min)氰戊菊酯-1(22.91min)氰戊菊酯-2(23.32min)溴氰菊酯-1(23.94min)、溴氰菊酯-2(24.39min)。

图4.GC-FPD检测器条件下海鲜菇空白基质色谱图

图5.GC-ECD检测器条件下海鲜菇空白基质色谱图

2.2 标准曲线 有机磷检测：取农药混合标准溶液配成质量浓度为0.05、0.25、0.1、0.5、1.0mg/L的混合标准使用溶液。

菊酯检测：取农药混合标准溶液配成质量浓度为0.005、0.01、0.1、1.0、2.0mg/L的混合标准使用溶液。

按色谱条件对混合标准使用溶液系列进行测定，以各农药的质量浓度与相应的峰面积绘制标准曲线，其线性范围均为0.01～5.0mg/L，线性回归方程、相关系数(表1)。

从表1可以得出有机磷农药和菊酯类农药线性较好，相关系数R2处于0.990～0.999之间，方法检出限较低，符合国家的蔬菜农残检测的标准。

表1 有机磷农药和菊酯类农药线性方程，相关系数R2

续表

2.3 精密度和回收试验 称取经粉碎均匀后的海鲜菇25.00g，分别添加0.08、0.12、0.16mg/kg 3个浓度水平的混合标准溶液，静置30min，按试验方法提取后进行回收试验，平行测定9次，结果(表2)。

表2 海鲜菇中35种农药的3个浓度水平标准测定回收率(ARR)和相对标准偏差(RSD)

续表

海鲜菇中农药的测定回收率在89%～116%之间，RSD在5.61%～20.91%之间。

2.4 样品检测 基于本研究建立的检测方法，对金华地区蔬菜基地企业送检的24份海鲜菇样品进行了上述35种农药残留的检测，检测结果显示未检出上述农药残留。

3 结论

本实验基于气相色谱技术，利用火焰光度(FPD)检测器和电子捕获(ECD)检测器建立了金华蔬菜基地海鲜菇中35种农药残留同时检测的方法。结果显示35种农药在海鲜菇中添加回收率为89%～116%，相对标准偏差在5.61%～20.91%之间；蔬菜自身差异对检测结果并没有明显差异。该方法与以往文献报道的方法比具有较高选择性、灵敏度和较宽的线性范围的特点，在25min内将被测成分达到完全分离，操作简单、快速，可用于金华蔬菜基地生产的海鲜菇的质量评价。