龙葵酚类成分的研究

刘淑娴， 宋玉洁， 王伟伟， 邹少华， 李洪娟， 王春华， 赵 峰∗

（1. 滨州医学院药学院， 国家中医药管理局方剂效应与临床评价重点研究室， 山东 烟台 264003； 2. 烟台毓璜顶医院， 山东 烟台 264000）

龙葵Solanum nigrum Linne 为茄科茄属植物，广泛分布于欧、 亚、 美洲的温带至热带地区， 我国各地均有分布， 因地域不同有野海椒、 灯龙草、 天茄菜等多种别称， 喜生于田边、 荒地及村庄附近[1］， 其干燥地上部分入药， 性寒， 味苦、 微甘，有小毒， 归心、 肾经， 具有清热解毒、 活血消肿、消炎利尿的作用， 临床用于治疗疔疮痈肿、 小便不利、 肿瘤等症[2］。 龙葵全草及其果实主要含有以螺甾烷为母核的生物碱及其苷、 螺甾烷醇类甾体及其苷类成分， 其中生物碱具有显著的抗肿瘤活性，并能抑制恶性黑色素瘤侵袭与转移[3-6］， 而其甾体皂苷具有抗炎活性[7-9］； 近年来发现龙葵含有的多糖类物质亦表现出抗肿瘤活性[10］。 龙葵水提物富含多酚类成分， 能抑制肝脂质堆积， 具有降血脂活性[11］， 但该研究仅应用色谱法分析多酚类物质，未对其进行分离与结构表征。 为进一步探究龙葵中的活性成分， 本实验对其乙醇提取物进行系统研究， 从中得到11 个化合物， 其中， 化合物1 为新天然化合物， 化合物2 为首次从该植物中分离得到， 化合物5～10 为首次从茄属植物中分离得到。

1 仪器与试剂

Bruker Avance Ⅲ500 MHz 或600 MHz 核磁共振仪（德国Bruker 公司）； API 3200 型质谱仪（美国AB 公司）； CHP20p MCI 树脂 （日本三菱公司）； 制备及分析型薄层层析板（烟台江友硅胶发展有限公司）； Sephadex LH-20 凝胶 （美国GE Pharmacia 公司）； Waters 600 型高效液相色谱仪（美国Waters 公司）； Rp C18柱（10 mm × 250 mm，5 μm， 北京慧德易科技有限责任公司）。 所用试剂均为分析纯或色谱纯。

龙葵采自山东省烟台市， 经滨州医学院药学院中药学教研室林莺副教授鉴定为正品。

2 提取与分离

龙葵的干燥地上部分4 kg 粉碎后， 10 倍量95%乙醇在常温下超声提取3 次， 提取液减压回收溶剂得到浸膏0.5 kg， 分散于1 L 水后， 等体积乙酸乙酯萃取3 次， 减压回收溶剂后， 得到乙酸乙酯萃取部分100 g。

乙酸乙酯萃取部分用少量甲醇溶解， 经MCI 树脂CHP20p 充分吸附后， 依次用水、 30%、 50%、70%、 90%甲醇、 纯甲醇洗脱。 50%甲醇洗脱部位减压 蒸 干， Sephadex LH-20 柱 （300 g， 3 cm ×40 cm） 分离， 先用石油醚-氯仿-甲醇（5 ∶5 ∶1）洗脱， 薄层色谱检测， 合并组成相似洗脱液得到5个部分Fr.1～Fr.5， 再用氯仿-甲醇（1 ∶1） 洗脱得到8 个部分Fr.6～Fr.13。 Fr.7 （0.3 g） 用HPLC 半制备色谱分离（乙腈-水43 ∶57）， 得到18 个小部分Fr.7.1 ～Fr.7.18， Fr.7.5 经HPLC 半 制 备 柱（乙腈-水31 ∶69） 得化合物10 （2.0 mg）、 11（9.0 mg）， Fr.7.13 经HPLC 半制备柱（乙腈-水37 ∶63） 得化合物8 （11.0 mg）、 9 （2.0 mg）。Fr.8 （0.4 g） 经HPLC 半制备柱（乙腈-水43 ∶57）得7 个小部分Fr.8.1～Fr.8.7， Fr.8.3 （21 mg） 经HPLC 半制备柱（乙腈-水30 ∶70）， 再经制备型薄层色谱（氯仿∶甲醇6 ∶1） 得化合物6 （11.0 mg）、 7 （5.0 mg）。 Fr.9 （0.3 g） 经HPLC 半制备柱（乙腈-水47 ∶53） 得化合物1 （4.0 mg）、 4（13.0 mg）、 5 （10.0 mg）。 Fr.12 （10 mg） 经HPLC 半制备柱 （乙腈-水56 ∶44） 得化合物2（4.0 mg）。 Fr.13 （20 mg） 经HPLC 半制备柱（乙腈-水43 ∶57） 得化合物3 （8.0 mg）。

3 结构鉴定

化合物1： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：189.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.34 （2H， d， J=8.0 Hz， H-2， 6）， 6.84 （2H， d，J=8.0 Hz， H-3， 5）， 5.36 （1H， dd， J=13.0， 3.0 Hz， H-7）， 2.72 （1H， dd， J= 17.0， 3.0 Hz， H-8a）， 3.13 （1H， dd， J= 17.0， 13.0 Hz， H-8b），5.91 （1H， d， J=2.5 Hz， H-11a）， 5.92 （1H， d，J=2.5 Hz， H-11b）；13C-NMR （125 MHz， MeOHd4） δ： 130.5 （C-1）， 120.6 （C-2， 6）， 116.3 （C-3， 5）， 158.6 （C-4）， 80.6 （C-7）， 44.2 （C-8），131.2 （C-9）， 170.7 （C-10）， 116.5 （C-11）。 以上数据与文献[12］ 基本一致， 故鉴定为4- （4-羟基苯基） -2-亚甲基丁内酯。

化合物2： 淡黄色无定型粉末， ESI-MS m／z：301.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， DMSO-d6） δ：6.20 （1H， brs， H-6）， 6.41 （1H， brs， H-8）， 7.69（1H， d， J=2.0 Hz， H-2′）， 6.89 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′），7.55 （1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′），12.50 （1H， brs， OH-5）， 9.45 ～11.00 （4H， brs，OH-3， 7， 3′， 4′）；13C-NMR （125 MHz， DMSOd6） δ： 148.7 （C-2）， 136.8 （C-3）， 176.8 （C-4），161.7 （C-5）， 99.1 （C-6），164.8 （C-7），94.4 （C-8）， 157.2 （C-9）， 104.0 （C-10）， 123.0 （C-1′），115.8 （C-2′），146.0 （C-3′），147.8 （C-4′），116.5（C-5′）， 121.0 （C-6′）。 以上数据与文献[13］ 基本一致， 故鉴定为槲皮素。

化合物3： 淡黄色无定型粉末， ESI-MS m／z：285.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， DMSO-d6） δ：6.20 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6）， 6.45 （1H， d， J=2.0 Hz， H-8）， 8.05 （2H， d， J = 9.0 Hz， H-2′，6′）， 6.93 （2H， d， J = 9.0 Hz， H-3′， 5′）， 9.39（1H， brs， OH-3）， 12.49 （1H， s， OH-5）， 10.10（1H， brs， OH-7）， 10.79 （1H， brs， OH-4′）；13CNMR （125 MHz， DMSO-d6） δ： 146.9 （C-2），136.0 （C-3）， 176.2 （C-4）， 161.0 （C-5）， 98.5（C-6）， 164.4 （C-7）， 93.8 （C-8）， 156.4 （C-9），103.3 （C-10）， 122.0 （C-1′）， 129.7 （C-2′， 6′），115.7 （C-3′， 5′）， 159.4 （C-4′）。 以上数据与文献[14］ 基本一致， 故鉴定为山柰酚。

化合物4： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：137.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.89 （2H， d， J=8.5 Hz， H-2， 6）， 6.83 （2H， d，J=8.5 Hz， H-3， 5）；13C-NMR （125 MHz， MeOHd4） δ： 123.6 （C-1）， 133.5 （C-2， 6）， 116.7 （C-3， 5）， 163.7 （C-4）， 171.1 （-COOH）。 以上数据与文献[15］ 基本一致， 故鉴定为对羟基苯甲酸。

化合物5： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：137.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.19 （1H， dd， J=8.0， 2.0 Hz， H-3）， 7.45 （1H，m， H-4）， 7.22 （1H， ddd， J=8.0， 8.0， 2.0 Hz，H-5）， 8.09 （1H， dd， J=8.0， 2.0 Hz， H-6）；13CNMR （125 MHz， MeOH-d4） δ： 111.8 （C-1），162.6 （C-2）， 118.3 （C-3）， 137.4 （C-4）， 120.1（C-5）， 131.0 （C-6）， 175.3 （COOH）。 以上数据与文献[16］ 基本一致， 故鉴定为邻羟基苯甲酸。

化合物6： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：163.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.47 （2H， d， J=9.0 Hz， H-2， 6）， 6.82 （2H， d，J=9.0 Hz，H-3， 5），7.62 （1H，d，J=16.0 Hz，H-7）， 6.30 （1H， d， J = 16.0 Hz， H-8）；13C-NMR（125 MHz， MeOH-d4） δ： 127.6 （C-1）， 131.6 （C-2， 6）， 117.3 （C-3， 5）， 161.7 （C-4）， 147.1 （C-7）， 116.3 （C-8）， 171.6 （C-9）。 以上数据与文献[17］ 基本一致， 故鉴定为反式对羟基肉桂酸。

化合物7： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：163.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.61 （2H， d， J=8.5 Hz， H-2， 6）， 6.75 （2H， d，J=8.5 Hz，H-3， 5），6.77 （1H，d，J=13.0 Hz，H-7）， 5.80 （1H， d， J = 13.0 Hz， H-8）；13C-NMR（125 MHz， MeOH-d4） δ： 127.8 （C-1）， 133.2 （C-2， 6）， 115.6 （C-3， 5）， 159.7 （C-4）， 143.9 （C-7）， 117.7 （C-8）， 170.4 （C-9）。 以上数据与文献[18］ 基本一致， 故鉴定为顺式对羟基肉桂酸。

化合物8： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：207.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.05 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.80 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 6.95 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 7.55 （1H， d， J=16.0 Hz， H-7）， 6.26 （1H，d， J=16.0 Hz， H-8）， 4.22 （2H， q， J=7.0 Hz，-OCH2CH3）， 1.32 （ 3H， t， J = 7.0 Hz，-OCH2CH3）；13C-NMR （125 MHz， MeOH-d4） δ：127.1 （C-1）， 114.5 （C-2）， 146.2 （C-3）， 146.1（C-4）， 115.8 （C-5）， 122.3 （C-6）， 148.9 （C-7），114.5 （C-8）， 168.6 （C-9）， 60.8 （-OCH2CH3），13.9 （-OCH2CH3）。 以上数据与文献[19］ 基本一致， 故鉴定为反式咖啡酸乙酯。

化合物9： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：207.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.35 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.75 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 6.70 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 6.80 （1H， d， J=13.0 Hz， H-7）， 5.75 （1H，d， J=13.0 Hz， H-8）， 4.19 （2H， q， J=7.0 Hz，-OCH2CH3），1.28（3H， t， J=7.0 Hz， -OCH2CH3）；13C-NMR （150 MHz， MeOH-d4） δ： 125.7 （C-1），118.6 （C-2）， 147.5 （C-3）， 145.4 （C-4）， 117.2（C-5）， 129.1 （C-6）， 148.5 （C-7）， 119.5 （C-8），168.8 （ C-9）， 60.6 （-OCH2CH3）， 14.8 （-OCH2CH3）。 以上数据与文献[20］ 基本一致， 故鉴定为顺式咖啡酸乙酯。

化合物10： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：193.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.66 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.75 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 7.06 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 6.67 （1H， d， J=13.0 Hz， H-7）， 5.83 （1H，d， J=13.0 Hz， H-8）， 3.88 （3H， s， -OCH3）；13CNMR （150 MHz， MeOH-d4） δ： 130.0 （C-1），116.6 （C-2）， 151.1 （C-3）， 150.0 （C-4）， 118.9（C-5）， 128.2 （C-6）， 146.1 （C-7）， 117.5 （C-8），172.3 （C-9）， 58.0 （-OCH3）。 以上数据与文献[21］ 基本一致， 故鉴定为顺式阿魏酸。

化合物11： 白色无定型粉末， ESI-MS m／z：193.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.19 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.83 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 7.07 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 7.59 （1H， d， J=16.0 Hz， H-7）， 6.34 （1H，d， J=16.0 Hz， H-8）， 3.92 （3H， s， -OCH3）；13CNMR （125 MHz， MeOH-d4） δ： 129.3 （C-1），117.9 （C-2）， 151.8 （C-3）， 149.9 （C-4）， 117.6（C-5）， 125.5 （C-6）， 148.4 （C-7）， 113.3 （C-8），172.5 （C-9）， 58.1 （OCH3）。 以上数据与文献[22］ 基本一致， 故鉴定为反式阿魏酸。

4 讨论

文献报道龙葵富含酚酸类成分， 仅有少量文献报道酚类的提取物及其抗氧化活性， 或对酚类富集部位应用色谱法对比分析， 并测试其抗肿瘤、 降血脂活性， 对其分离和结构研究较少。 本实验首次从龙葵中分离得到1 个新天然产物， 为苯与α-亚甲基-γ-丁内酯偶联形成的衍生物， 其中α-亚甲基-γ-丁内酯被认为是天名精内酯酮发挥抑菌作用的主要活性官能团， 目前仅有一篇文献报道它为合成抑菌活性衍生物的中间体[12］。 同时从龙葵乙酸乙酯部位得到多个黄酮和酚酸类成分， 其中3 个为含顺式双键的酚酸类成分， 该类成分具有显著的抑菌、 抗氧化等活性， 为龙葵酚类成分的生物活性评价与药用研究提供基础。