白族药梁王茶化学成分研究

罗晓磊1,2 王 敏1,2 肖朝江1,2 宁 晓1,2 董 相1,2 姜 北1

1.大理大学药物研究所，云南 大理 671000；2.大理大学药学与化学学院，云南 大理 671000

梁王茶为五加科(Araliaceae)梁王茶属(NothopanaxMiq.)植物掌叶梁王茶Nothopanaxdelavayi的树皮或叶。灌木，叶为掌状复叶，稀单叶；花期9～10月；生于森林或灌木丛中，海拔1600～2500 m；分布于贵州、云南、四川等地；全株无毒，可入药，有清热解毒、消炎止痛、理气舒筋、生津止泻等疗效[1]。该植物在大理全州均有分布，是传统的白族药用植物，白族民间主要用于口腔溃疡、咽喉肿痛、咳嗽、月经不调、跌打损伤、解烟毒，以及急性结膜炎、消化不良、蛔虫、肠炎等病症的治疗与处理；其根具有祛风除湿、止痛等功效，可用于风湿骨痛[2]。

目前，关于梁王茶属植物化学成分有少量研究报道，分离得到的化合物主要包括三萜皂苷类，咖啡酸类，黄酮苷类，多糖和精油类等成分[3-11]。本课题组前期研究发现梁王茶具有一定的抗疟活性[12]，另有文献报道梁王茶属植物还具有镇痛[13]、抗肿瘤、抗病毒、抑菌、调节免疫、防治心脑血管疾病[14-15]、抑制前列腺增生[10]以及解酒保肝[11]等作用。其中抗肿瘤、抗病毒、抑菌以及防治心脑血管疾病等作用的相关活性成分尚未见报道。为进一步认识掌叶梁王茶的化学成分，明确相关活性与药用物质基础，本实验对采自云南大理的掌叶梁王茶茎叶进行了化学成分研究，分离得到9个化合物，分别鉴定为路路通内酯(1)，三对节酸(2)，丁香脂素(3)，3-oxo-6β-hydroxylean-12-en-28-oic acid(4)，3β,29-dihydroxy-olean-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester(5)，5-O-Caffeoylquinic acid methyl ester(6)，β-谷甾醇(7)，胡萝卜苷(8)，双酚 A(9)。其中，化合物1、3-6为首次从该属植物中分离得到。

1 仪器与材料

1.1 仪器 BrukerAvanceIII-400核磁共振仪(德国布鲁克公司，TMS 为内标)；DionexUltiMate 3000超高效液相色谱仪及BrukerDaltonics MS质谱系统；RE-52AA 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；AL204 型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；柱层析硅胶和薄层层析硅胶板GF254(青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20(瑞典Amersham Biosciences 公司)；MCI CHP-20(75～150 μm)(日本三菱公司)；石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有机试剂均为工业级溶剂，重蒸后使用；正丁醇、异丙醇为分析纯(上海化工有限公司)；10%硫酸烘烤显色或碘蒸气熏蒸显色。

1.2 材料 实验用掌叶梁王茶于2014年1月采自云南大理，由大理大学药学与化学学院张德全博士鉴定为梁王茶属植物掌叶梁王茶Nothopanaxdelavayi(Franch.)Harmsex Diels，植物标本(编号：20140108-3)保存于大理大学药物研究所姜北教授研究组。

2 提取和分离

梁王茶干燥茎叶2.4 kg，粉碎后用15 L 80%乙醇冷浸提取3次，每次24 h。过滤，合并滤液，用旋转蒸发仪减压条件下回收乙醇后得总浸膏195 g。将总浸膏分散于400 mL水中，依次用乙酸乙酯(600 mL×6)，正丁醇(600 mL×4)萃取，减压条件下回收溶剂后得乙酸乙酯部位55 g，正丁醇部位64 g。取乙酸乙酯部位样品以适量粗硅胶(80～100目)拌样，经300～400目硅胶柱，氯仿-丙酮混合溶剂系统梯度洗脱(1∶0～0∶1)，TLC检测，合并得7个组分(A-G)。

A组分经MCI柱色谱(50%～100%甲醇/水)，硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯10∶1～0∶1)和重结晶等方法得化合物1(28 mg)和7(78 mg)；B组分经MCI柱色谱(50%～100%甲醇/水)，硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯5∶1～0∶1、氯仿-丙酮25∶1～0∶1)，Sephadex LH-20 凝胶柱色谱(氯仿-甲醇1∶1)得化合物2(21 mg)、3(12 mg)、4(10 mg)和9(5 mg)；E组分经MCI柱色谱(50%～100%甲醇/水)，反复硅胶柱色谱(氯仿-甲醇25∶1～0∶1、20∶1～0∶1)得化合物5(51 mg)、6(1 g)和化合物8(148 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:分子式：C30H44O4，白色无定型粉末H-NMR (400MHz, CDCl3)δ: 3.06 (2H, brs, H-11, 12), 2.66 (1H, ddd,J= 16.0, 11.9, 6.9 Hz, H-21a), 2.44 (ddd,J= 16.0, 6.9, 3.4 Hz, H-21b)2.33 (1H, dd,J=13.8, 3.1 Hz, H-18), 1.18, 1.11, 1.11, 1.10, 1.06, 1.00 and 0.93(each 3H, s, Me-25, 26, 27, 24, 23, 29 and 30);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 38.8(t, C-1), 34.4 (t, C-2), 216.4 (s, -C=O), 47.7 (s, C-4), 54.9 (d, C-5), 18.9 (t, C-6), 30.6 (t, C-7), 40.8 (s, C-8), 50.3 (d, C-9), 36.4 (s, C-10), 52.6 (d, C-11), 57.2 (d, C-12), 87.5 (s, C-13), 41.4 (s, C-14), 27.1 (t, C-15), 21.4 (t, C-16), 44.0 (s, C-17), 49.8 (d, C-18), 37.9 (t, C-19), 31.6 (s, C-20), 33.9 (t, C-21), 27.1 (t, C-22), 21.3 (q, C-23), 26.1 (q, C-24), 16.6 (q, C-25), 18.8 (q, C-26), 19.9 (q, C-27), 179.4 (s, -C=O), 33.3 (q, C-29), 23.7 (q, C-30)。以上数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定该化合物为路路通内酯。

化合物2:分子式：C30H46O5，白色针晶(吡啶)。1H-NMR (400MHz, C5D5N)δ: 5.58 (1H, t,J= 3.4 Hz, H-12), 3.46 (2H, overlap, H-3, 18), 2.62 (1H, t,J= 13.9 Hz, H-19a), 1.98 (1H, overlap, H-19b), 1.60, 1.30, 1.24, 1.05, 1.04 and 0.91 (each 3H, s, Me-30, 27, 23, 26, 24 and 25);13C-NMR (100 MHz, C5D5N)δ: 39.4 (t, C-1), 28.6 (t, C-2), 78.6 (d, C-3), 39.9 (s, C-4), 56.3 (d, C-5), 19.3 (t, C-6), 33.8 (t, C-7), 40.3 (s, C-8), 48.6 (d, C-9), 37.9 (s, C-10), 24.4 (t, C-11), 123.7 (d, C-12), 144.8 (s, C-13), 43.1 (s, C-14), 28.8 (t, C-15), 24.4 (t, C-16), 47.2 (s, C-17), 41.6 (d, C-18), 41.6 (t, C-19), 42.7 (s, C-20), 29.8 (t, C-21), 32.9 (t, C-22), 29.3 (q, C-23), 17.1(q, C-24), 16.1 (q, C-25), 17.9 (q, C-26), 26.6 (q, C-27), 180.5 (s,-C-28), 181.5 (s, C-29), 20.5 (q, C-30)。以上数据与文献[17]报道基本一致，故鉴定该化合物为三对节酸。

化合物3:分子式：C22H26O8，白色无定型粉末。HR-ESI-MSm/z: 417.1541[M-H]- (calcd for C22H25O8, 417.1555)。1H-NMR (400MHz, CD3OD)δ: 6.65 (4H, s, H-2′, 6′, 2″ and 6″), 4.72 (2H, d,J= 3.7 Hz, H-2, 6), 4.26 (2H, td,J= 6.9, 1.7 Hz, H-4a, 8a), 3.88 (2H, overlap, H-4b, 8b), 3.84 (12H, s, 4×-OCH3), 3.14 (2H, brs, H-1, 5);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 55.5 (d, C-1, 5), 87.6 (d, C-2, 6), 72.8 (t, C-4, 8), 133.1 (s, C-1′, 1″), 104.5 (d, C-2′, 6′, 2″, 6″), 149.3 (s, C-3′, 5′, 3″, 5″), 136.2 (s, C-4′, 4″), 56.8 (q, 4×-OCH3)。以上数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定该化合物为丁香脂素。

化合物4:分子式：C30H46O4，白色簇晶(氯仿)。1H-NMR (400MHz, C5D5N)δ: 5.60 (1H, t,J= 3.4 Hz, H-12), 4.69 (1H, s, H-6), 3.37 (1H, overlap, H-18), 2.89 (1H, td,J= 14.5, 6.2 Hz, H-21), 1.69, 1.69, 1.63, 1.38, 1.29, 1.04 and 0.98 (each 3H, s, Me-24, 25, 26, 23, 27, 30 and 29);13C-NMR (100 MHz, C5D5N)δ: 41.4 (t, C-1), 33.6 (t, C-2), 216.0 (s, C-3), 47.1 (s, C-4), 57.3 (d, C-5), 68.5 (d, C-6),42.2 (t, C-7), 39.6 (s, C-8), 48.3 (d, C-9), 37.3 (s, C-10), 24.1 (t, C-11), 123.0 (d, C-12), 144.7 (s, C-13), 43.2 (s, C-14), 28.6 (t, C-15), 24.3 (t, C-16), 49.6 (s, C-17), 42.5 (d, C-18), 46.8 (t, C-19), 31.4 (s, C-20), 35.1 (t, C-21), 34.6 (t, C-22), 26.2 (q, C-23), 24.5 (q, C-24), 16.7 (q, C-25), 19.1 (q, C-26), 26.6(q, C-27),180.5 (s, C-28), 33.7 (q, C-29), 24.1 (q, C-30)。以上数据与文献[19-20]报道基本一致，故鉴定该化合物为3-oxo-6β-hydroxylean-12-en-28-oic acid。

化合物5:分子式：C32H50O6。白色簇晶(甲醇)。1H-NMR (400MHz, CD3OD)δ: 5.34 (1H, d,J= 8.1 Hz, H-1′), 5.26 (1H, t,J= 3.2 Hz, H-12), 3.77 (1H, d,J= 11.3 Hz, H-6′a), 3.63 (1H, dd,J= 11.3, 3.5 Hz, H-6′b), 3.35-3.26 (6H, overlap, H-3, 29, 2′, 3′ and 4′), 3.10 (1H, dd,J= 11.2, 4.8 Hz, H-5′), 2.84 (1H, dd,J= 13.9, 4.0 Hz, H-18), 1.19, 1.12, 0.92, 0.90, 0.76 and 0.73 (each 3H, s, Me-30, 27, 23, 25, 26 and 24).13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 39.9 (t, C-1), 28.8 (t, C-2), 78.2 (d, C-3), 39.8 (s, C-4), 56.7 (d, C-5), 19.5 (t, C-6), 33.9 (t, C-7), 39.8 (s, C-8), 49.1 (d, C-9), 38.1 (s, C-10), 24.1 (t, C-11), 124.5 (d, C-12), 144.1 (s, C-13), 43.0 (s, C-14), 27.8 (t, C-15), 24.6 (t, C-16), 47.8 (s, C-17), 41.5 (d, C-18), 41.2 (t, C-19), 42.9 (s, C-20), 29.5 (t, C-21), 32.0 (t, C-22), 28.7 (q, C-23), 16.3 (q, C-24), 16.0 (q, C-25), 17.7 (q, C-26), 26.3 (q, C-27), 177.5 (s, C-28), 73.9 (t, C-29), 19.8 (q, C-30), 95.7 (d, C-1′), 73.9 (d, C-2′), 78.7 (d, C-3′), 71.0 (d, C-4′), 79.7 (d, C-5′), 62.3 (d, C-6′)。以上数据与文献[21]报道基本一致，故鉴定该化合物为3β,29-dihydroxy-olean-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester。

化合物6:分子式：C17H20O9，黄色固体(丙酮)。HR-ESI-MSm/z: 367.1021[M-H]- (calcd for C17H19O9, 367.1034)。1H-NMR (400MHz, CD3OCD3)δ:7.51 (1H, d,J= 15.9 Hz,H-7′), 7.13 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-2′), 6.97 (1H, dd,J= 8.3, 1.8 Hz, H-6′), 6.83 (1H, d,J= 8.3Hz, H-5′), 6.23 (1H, d,J= 15.9Hz, H-8′),5.34 (1H, m, H-5), 4.20 (1H, m, H-3), 3.78 (1H, dd,J= 8.5, 3.1 Hz, H-4), 3.64 (3H, s, -OCH3), 2.26-2.04 (4H, m, H-2, 6);13C-NMR (100 MHz, CD3OCD3)δ: 75.7 (s, C-1), 36.6 (t, C-2), 70.6 (d, C-3), 72.8 (d, C-4), 71.2 (d, C-5), 38.3 (t, C-6), 174.4 (s, C-7), 127.2 (s, C-1′), 114.9 (d, C-2′), 146.0 (s, C-3′), 148.6 (s, C-4′), 116.2 (d, C-5′), 122.5 (d, C-6′), 146.0 (d, C-7′), 115.2 (d, C-8′), 167.1 (s, C-9′), 52.7 (q, -OCH3)。以上数据与文献[22]报道基本一致，故鉴定该化合物为5-O-caffeoylquinic acid methyl ester。

化合物7:白色针状结晶(氯仿)。通过在TLC上用三种溶剂系统展开对比，与β-谷甾醇的对照品斑点颜色及Rf值均一致，故鉴定为β-谷甾醇。

化合物8:白色粉末(氯仿-甲醇)。通过在TLC上用3种溶剂系统展开对比，与胡萝卜苷的对照品斑点颜色及Rf值均一致，故鉴定为胡萝卜苷。

化合物9:白色粉末，分子式C15H16O2，白色针晶(丙酮)。1H-NMR (400MHz, CD3COCD3)δ: 6.95 (4H, d,J=8.7 Hz, H-3, 5, 3′, 5′), 6.62 (4H, d,J=8.7 Hz, H-2, 6, 2′, 6′), 1.48 (6H, s, 2×-CH3);13C-NMR (100 MHz,CD3COCD3)δ:, 156.0 (s, C-1), 115.4 (d, C-2, 6), 128.4 (d, C-3, 5), 142.8 (s, C-4), 42.0 (s, C-7), 31.5 (q, C-8, 8′)。以上数据与文献[23]报道基本一致，故鉴定该化合物为双酚A。

4 讨论

本研究从掌叶梁王茶茎中分离鉴定了9个化合物，包括4个三萜类化合物，2个甾体类化合物，1个木脂素类化合物，2个酚类化合物，其中5个化合物(1、3-6)为首次从该属植物中分离得到。

白俊鹏等[24]的研究表明化合物6具有较好的神经保护活性，在15 μmol·L-1给药浓度下神经保护率为21.33%。化合物6还具有一定的抗氧化活性，其IC50值为7.5～8.8 μg·mL-1[22,25]。另有文献报道化合物3对人体宫颈癌细胞系(HeLa)、肺癌细胞系(A-549)、乳腺癌细胞系(MCF-7)具有一定的抑制活性，IC50值均≤47.12 μg·mL-1[26-27]，对结肠癌细胞系(HT-29)有较强的细胞毒性，其IC50值为0.227 μg·mL-1[27]。除此之外化合物3还具有一定的抑制乙酰胆碱酶活性，IC50值为200 μg·mL-1[28]，在0.6 mg·mL-1浓度下对油菜菌核病菌抑制率达到36.72%[29]。根据本研究分离得到的成分及相关活性报道，初步证实了掌叶梁王茶的白族民间药用具有活性物质基础，该植物的抗肿瘤、抗病毒、抑菌以及防治心脑血管疾病等作用也具有一定的合理性，为掌叶梁王茶的开发药用提供了理论依据，更多的化学成分与深入的药理作用机制仍有待一步研究。