大肠菌群测试菌片在细菌性食物中毒快速检测中的作用

蔡 军

（法库县卫生健康服务与行政执法中心检验科，辽宁 沈阳 110400）

大肠埃希菌是一种在日常生活、生产中比较常见的致病菌，需要指出的是，如果机体出现肠屏障方面的严重功能损伤，或是受多因素影响，其抵抗能力逐渐衰减或受到抑制，那么在此作用与驱动下，容易出现菌群移位状况，最终引发严重且多样性感染。一般来讲，最常出现的疾病有肠道感染、切口感染等[1]。针对平皿培养法而言，其乃是用于鉴定细菌的“金标准”，但需要指出的是，此方法无能开展快速检测，而且检测时间也比较长，尤其是在外部环境中，此方法无法应用[2]。而针对测试片检测技术来讲，其检测速度比较快，操作也比较简便，无论是在食源性细菌性食物中毒污染检测中，还是在评估食品安全中，均有着较高的应用价值。本文针对细菌性食物中毒样本，采用大肠菌群测试菌片进行快速检测，探讨其作用与价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 试验样本：选用由3M有限公司生产的大肠菌群测试片；大肠埃希菌标准株；大肠埃希菌菌株（来自本院实验室）。在2017年1月～8月这一阶段内，选取所收集到的疑似存在细菌感染的食具、食物样品，共计170份，其中，62份食具，其余108份均为食物。

1.2 方法

1.2.1 最低检出限试验：用大肠埃希测试菌片法，取新鲜大肠埃希菌标准株，过夜培养，刮取其纯菌苔；将其置入生理盐水当中，制备菌悬液（0.5麦氏单位），并进行稀释（10倍梯度），使之达到10-8稀释度，取各稀释度菌悬液（10-6、10-7、10-8），均1 mL，用测试片法、平皿计数法开展相关试验，并进行比较，对最低检出限进行判断。

1.2.2 处理样本：对那些可能是细菌性食物中毒的样本，依据《食品安全事故流行病学调查技术指南》（2016年）、《食物中毒诊断标准》当中所推荐的样本采集方法[3]，对食具、食品涂抹拭子，然后实施开展无菌处理；标本温度控制在2～8 ℃，在此温度下，于2 h内送到指定的实验室，开展相关预处理；最后利用PBS缓冲液，将标本制备成悬液，置入冰箱中（-80 ℃），待用。

1.2.3 应用大肠埃希测试菌片法：取样本25 g，将其置入生理盐水当中（225 mL），制备成稀释液（1∶10），分别取2种稀释液（10-2、10-3）接种2个平皿，并采用VRBA琼脂进行浇注，于36 ℃温度下，持续培养18～24 h，然后开始计数。取菌落抑制BGLB肉汤（共计10个类型），在36 ℃环境中，持续培养48 h，将其中的阳性杆菌予以排除，并将样本中的大肠菌群数给计算出来。与此同时，在测试片上，接种稀释液10-3、10-2，各稀释度分别做2个平行，在36 ℃环境下持续培养24 h，从中将平行测试片菌落数给计算出来，并计算出平均值，然后放置到指定的营养琼脂平板上，常规革兰染色，染色完成后，便可镜检操作，最后，自动分析仪予以鉴定。

1.3 统计学方法：采用SPSS23.0，对文中计量、数数据进行处理，分别由（）、百分率表示，t、χ2检验；若经比较，存在显著差异，则由P＜0.05表示。

2 结果

2.1 两种检测方法的最低检出限对比：在10-7稀释度下，平皿计数法的最低检出限为（45.0±3.4）cfu/m，而在10-7稀释度下，则为（11.0±2.2）cfu/m，在10-8稀释度下下，即（1.0±0.7）cfu/m；而测试片法分别为（42.4±2.6）cfu/m、（9.5±1.5）cfu/m、（1.0±0.5）cfu/m，当稀释度位于10-6、10-7时，采用测试片法所能得到的最低检出限，较之传统的平皿计数法，偏低（P＜0.05）。

2.2 大肠埃希测试菌片法的应用效果：在所选取的这170份样本中，用平板计数法共检出101份大肠菌群阳性标本，阴性69份。而大肠埃希测试菌片法的敏感性99.01%（100/101），特异性88.41%（61/69），符合率94.71%（161/170）。

3 讨 论

针对测试片法来讲，其相比于其他方法，有着比较强且突出的特异性，对于其他细菌而言，试剂在具体的抑制效果上比较突出，除此之外，还不显色；特别是比较常见的大肠菌群，其下限值比较低，即1 cfu/mL[4]，即便时不含细菌的体液，同样能够检出阳性，究其原因，可能与未感染的样本、实验室污染等因素相关[5]。基于检出效率来分析，从中得知，采用测试片法，其敏感性为99.01%，特异性为88.41%，而其符合率也达到了94.71%，均＞85%，有着比较高的水平，针对其中的误诊情况而言，可能与菌液浓度差异以及标本不合格等因素相关。现阶段，针对测试片法来讲，其除了用于粪便污染指示的检测，而且还能根据实际需要，围绕菌群失调状态，对其开展全面、深层次分析，此外，还能以肠道生态环境为对象，对其进行有目的性的识别与判断[6]。测试片除了由比较快的测试速度外，还能省去许多工作，比如杀菌消毒、培养基等，这对于提高样品检验质量与效率，缩短诊断时间，缩减检验前的停留时间等，均有着积极意义，能够为临床治疗，提供依据与数据支撑。

还需强调的是，针对测试片法而言，其能够规避因污染所引起的检验差错情况，有着比较高的价值。但是，对于所选用的测试片而言，引起制造厂商比较多，其质量存在一定的差异，这可能会对检验效率、精度造成影响，因此，在选购时，可选择那些质量过硬的测试片。综上所述，在细菌检测过程中，测试片法有着较低的检出限度，而且在诊断效率上也近于平板计数法，因而适用于食源性疾病病原菌的检测与分析。