ASFV-LAMP方法在猪场非洲猪瘟排查中的实用价值及注意事项

(江山市畜牧兽医局，324100)

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的家猪、野猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，死亡率高达100%。LAMP法因其高效灵敏、价格低廉，且不需要特殊仪器等优点，在规模猪场的非洲猪瘟排查中具有优势。

1 LAMP方法的特点

LAMP方法全称Loop-mediated isothermal amplification,即环介导等温扩增法，是2000年日本学者Notomi等报导的一种新的恒温核酸扩增方法。特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在60～65 ℃恒温扩增，能够在15～60 min即可实现109-1010的核酸扩增，具有特异性高、灵敏度高、反应时间短、操作简单的优点。此外，因只需在60～65 ℃恒温扩增，需要仪器简单成本低，且反应产生副产物焦磷酸镁白色沉淀只需肉眼就能观察到，因此还有鉴定方便的优点。

2 LAMP方法与其它检测方法的对比

目前非洲猪瘟的主要检测技术有2大类，即基于抗原、抗体反应的免疫学方法及核酸检测方法。免疫学方法检测因抗体只有在病毒入侵至一定时期才会出现，因此在对非洲猪瘟早期排查时存在局限性。而传统的针对核酸的监测方法,如PCR法相比之LAMP法则存在成本较高的问题，特别是实时荧光PCR，耗费高且难以摆脱实验室的限制，在猪场的自我排查时难以推广。

3 使用LAMP方法排查时的注意事项

在LAMP试验中，最主要的缺点就是容易产生假阳性高。这主要是因为它的扩增产物本身就是模板，且反应是在恒温下进行的，所以如果在同一地方进行多次试验，前面反应产物所形成的气溶胶很容易污染后续试验，从而造成假阳性。

该问题也并非不能克制，只要操作人员在实际操作中注意一些细节，就能有效避免污染的存在。使用LAMP方法排查时应遵循以下几点注意事项：

一是操作时应小心轻柔，吹打混匀溶液时不要有气泡产生，避免EP管剧烈震荡。

二是除酶制剂及不耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。

三是各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存。

四是实验室要注意通风，最好选择超净工作台和生物安全柜。实验室要定期进行清洁及紫外照射，消除潜在污染。