技术进步条件下猪圆环病毒病的研究进展

周文茂 陈海军 高军攀

（1河北省石家庄市畜牧兽医技术开发中心，河北石家庄 050000；2河北省石家庄市动物卫生监督所，河北石家庄050000；3河北省石家庄市兽用制品供应站，河北石家庄050000）

猪圆环病毒病是由圆环病毒2型（PCV2）引起的一种猪免疫抑制性疾病，可以引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）、母猪繁殖障碍性疾病、仔猪先天性震颤（CT）等一系列多种不同临床症状的疾病[1]。PCV2一旦在猪群中流行传播，将很难清除，感染的猪群可能表现为亚临床症状，但其引起的免疫抑制使猪群易遭受其他病原的并发或继发感染[2]，给养猪业造成巨大损失。因此，对PCV2的准确诊断和有效防控是当前亟待解决的问题。

1 流行病学

猪圆环病毒（porcine circovirus,PCV）属于圆环病毒科圆环病毒属，是感染脊椎动物最小的一种病毒[2]。猪圆环病毒有PCV1、PCV2和PCV3 3个血清型，其中PCV1无致病性，PCV3由2016年Phan等[3]在美国从有相似临床症状的育肥猪中检出，其致病性尚未明确；由PCV2引起的一系列相关综合征称为猪圆环病毒病。2000年，郎洪武等[4]首次报道我国存在PCV2，如今PCV2已呈世界性流行，在我国猪群中也普遍存在。

猪是PCV2的易感动物，患病猪和隐性带毒猪是猪圆环病毒病的主要传染源，感染猪的鼻液、唾液、泪液、粪便、尿液中都含有病毒，会污染周围的环境，通过呼吸道或者消化道感染健康猪群。妊娠母猪感染后，病毒可以通过胎盘感染胎猪，导致妊娠后期出现死胎、僵尸胎等流产现象。感染公猪的精液中也会带毒，可以通过输精的方式感染母猪[5]。

猪圆环病毒病一年四季均可发生，没有明显的季节性特征，不论大小、公母，不同品种的猪均可以感染PCV2，但1～4月龄仔猪较多发，尤其是断奶后1～2周的仔猪，逐渐失去了母源抗体的保护，但自身的免疫系统发育还不够完善而发病，因此推断该病的发生与断奶应激有很大的关系。

2 临床症状及病理变化

2.1 致病机理

PCV2的致病机理一直是学界、业界关注的热点。研究发现PCV2侵袭的是单核吞噬细胞系统，而不存在于淋巴细胞中，但会导致猪的淋巴组织、肺脏、肝脏等器官出现炎症反应，破坏猪的免疫系统，造成免疫功能紊乱，使机体易感染其他病原[6]。近年来的研究发现，PCV2单一病原感染发病少见，或者是因为单一感染时没有出现典型的临床症状而被忽视，常见的是与其他多种病原混合感染，如与PRRSV、CSFV、PPV、PRV等。

2.2 临床症状

猪圆环病毒病是一系列临床综合征的总称，每种综合征之间所表现的临床症状和病理变化存在一定的差异，一般表现为以下几种类型。

2.2.1 断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）

主要危害断奶后仔猪，表现为呼吸困难、被毛粗乱、逐渐消瘦、生长发育受阻、腹股沟淋巴结肿大、腹泻、精神不振，部分猪还出现贫血症状，皮肤苍白。剖检可见患病猪全身淋巴结肿大，肺肿胀、间质增宽、质地坚硬如橡皮样、呈间质性肺炎，肺表面分布大小不等的红色至褐色的斑点。脾脏与肝脏肿大。肾脏肿大，有时可见白色散在斑点。

2.2.2 猪皮炎肾病综合征（PDNS）

主要发生于8～18周龄猪和育肥猪，多呈散发。临床上表现为患病猪皮肤突然出现圆形或不规则形状、呈红色或紫红色病变，病变部位中央呈黑色，随着病情加重，病变区融合成较大的黑色坏死斑块，结痂脱落后留下明显疤痕。皮肤病变常见于病猪的后肢、腹部、会阴部，也可扩散至体侧及耳部。感染严重时会表现出四肢跛行、发热、厌食、皮下水肿、逐渐消瘦。剖检可见肾脏肿胀、苍白，皮质部有大面积出血或瘀血点，淋巴结肿大、出血。

2.2.3 母猪繁殖障碍性疾病

妊娠母猪感染PCV2后可出现繁殖障碍，主要表现为流产、产死胎、木乃伊胎和弱仔等。怀孕母猪在妊娠早期感染PCV2可以导致胚胎死亡，妊娠中后期感染则导致母猪产死胎、木乃伊胎，剖检死胎可见非化脓性心肌炎[2]。一般初产母猪感染PCV2后流产率较高，经产母猪流产率较少，但产死胎和弱仔数量增加。公猪感染PCV2后精子数量减少、活力下降、配种率降低，导致繁殖障碍。

2.2.4 仔猪先天性震颤（CT）

初生仔猪感染PCV2可引起头部、四肢和尾巴连续或间歇性震颤，严重者可见全身肌肉抖动，震颤为双侧性，外界刺激可引发或加重震颤，当病猪趴卧或睡觉时震颤可暂时性消失。病情严重时，震颤对骨骼和肌肉的影响使仔猪行走困难、无法正常吮奶，最终饥饿致死，若及时采取人工喂奶措施，有的仔猪1周后可逐渐恢复健康并存活。

3 实验室检测

由于猪圆环病毒病常并发或继发多种病原感染，单纯从临床症状诊断难度较大，因此借助于实验室检测方法，可以准确、快速诊断PCV2感染。常用的实验室检测方法有病原学检测和血清学检测2大类。

3.1 病原学方法

3.1.1 病毒分离培养

取感染PCV2猪病变组织处理后，接种原代肾细胞或PK-15细胞培养，由于PCV2病毒不会引起细胞病变，不能直接判断病毒分离情况，需要借助于间接免疫荧光试验（IFA）、PCR或电子显微镜等方法进行确认。病毒分离培养费时费力，操作繁琐，不适用于猪圆环病毒病的快速诊断。

3.1.2 间接免疫荧光试验

取病变组织以盖玻片在PK-15细胞中培养，丙酮固定，用兔抗PCV高免血清与细胞培养物中的PCV反应，可对PCV进行检测和分型[7]。IFA用时少、操作简便，应用非常广泛，主要用于病毒分离效果的鉴定及病变组织PCV感染的检测。

3.1.3 核酸原位杂交技术（ISH）

ISH敏感性高，可以精确地定位PCV病毒在组织细胞内的位置，有助于深入研究PCV的致病机理。Choi等[8]用地高辛标记的探针做原位杂交可检测PCV。Nawagitgul等[9]根据PCV的基因序列，设计了一组探针可以区分PCV1和PCV2。Sirinarumitr等[10]利用荧光标记RNA探针，与细胞中病毒核酸，福尔马林固定或石蜡包埋的组织中的PCV病毒核酸进行杂交，建立了快速检测PCV的原位杂交技术。该方法应用快速加强杂交缓冲液（rate enhancement hybridization,REH），大大缩短了检测时间，提高了PCV2的诊断效率。接着Siri-narumitr等[11]又建立了双杂交方法，可同时检测2种病毒的感染。

3.1.4 PCR方法

PCR方法具有快速、简便、特异的优点，被广泛应用于各种疫病的检测。国内外已经建立多种PCR方法用于PCV检测，包括常规PCR、复合PCR、竞争PCR和巢式PCR等[12]，可以特异性地区分PCV的不同血清型。当前国内对于PCV2的流行病学调查，最常用的就是PCR方法，已经出现猪圆环病毒PCR检测试剂盒，但是PCR方法敏感性高，易出现假阳性结果，因此需要结合血清学方法进行检测，确保检测结果准确、可靠。

3.1.5 免疫组化（IHC）

IHC与IFA一样，都属于免疫染色方法。IHC技术是将抗原抗体反应的专一性和显微形态学相结合，用以研究组织或细胞中抗原定位的一种方法。使用该方法检测PCV病毒时，可以结合病毒形态变化，进行快速、特异的诊断。此外，IHC可以对携带病原的细胞及组织的大体形态进行评价，而且只需要借助于普通显微镜在日光下即可进行观察。与IFA相比，该方法的样本颜色更稳定、更易于保存。

3.2 免疫学方法

3.2.1 间接免疫荧光试验

IFA即可用于抗原检测，也可用于抗体检测，国外已有检测PCV的标准化试剂盒。可以通过检测猪血清中的抗体，确定PCV的感染情况。该方法快速简单，应用广泛，但是洗涤不干净，易出现非特异性结果。此外，该方法不能有效区分抗体对应的PCV血清型。

3.2.2 免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）

该方法可以用于检测PCV或血清中的PCV抗体，但是不能区分PCV血清型，应用局限，国外多用于研究，国内应用较少。

3.2.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA方法因为检测速度快、敏感性高、特异性强等优点被广泛应用于疫病临床诊断中，也是检测PCV2抗体的常用检测方法。国内外的科研人员已经建立多种ELISA方法，为进行PCV感染的血清学调查提供技术支撑。Walker等[13]首次建立竞争ELISA方法用于检测PCV2抗体，该方法敏感性高、特异性好，可以用于PCV2抗体的大规模检测。2002年，Nawagitgul等[14]建立了2种ELISA方法，分别用于检测针对PCV全病毒和病毒核衣壳蛋白的抗体，均具有较好的重复性和敏感性。但是ELISA方法与IFA存在同样的缺陷，不能特异性区分PCV的不同血清型对应的抗体，且病毒获得困难时该方法的应用受到一定限制。

4 综合防治

PCV2感染已经成为影响养猪业的重大问题，但是目前仍没有特效的治疗方法，因此对该病的防治仍然是以预防为主、防治结合的方法。

4.1 疫苗免疫

疫苗免疫是目前预防PCV2的重要手段。2010年PCV2疫苗开始在我国使用，经过临床验证免疫接种是预防和控制猪圆环病毒最快捷、最有效的措施，可以提高生产性能、降低发病率和死亡率。目前已经有多种PCV2疫苗投入市场，主要有全病毒灭活疫苗、亚单位疫苗和嵌合病毒疫苗，其中全病毒灭活疫苗使用较为广泛。

4.2 加强饲养管理

把好饲料关，避免霉菌毒素的危害，饲喂优质全价的饲料，提高猪群的免疫力；适当降低饲养密度，保持良好的通风和适宜的温度条件，可以有效降低氨气等有害气体的浓度；不同日龄、不同来源的猪避免混群饲养，做到每栏全进全出；根据季节和气候变化，适时做好防寒保暖、防暑降温工作，尽量减少仔猪断奶后的应激反应。

4.3 完善猪场生物安全体系

实行封闭式生产管理，建立合理的猪场准入制度，对外来的人员、车辆、设备器具等进行严格消毒；猪场内禁止饲养犬、猫和其他畜禽，并防止野禽进入；做好场区内的灭鼠、杀虫工作；对场内粪尿和污水进行无害化处理。

4.4 药物预防

目前还没有治疗该病的特效药物。对于发病早期的疑似感染猪要及时隔离检查治疗，争取做到早发现、早诊断、早治疗，以控制病原的传播。断奶仔猪饲料中添加抗菌药物提前预防，以控制细菌继发感染；已发病的猪进行隔离治疗，主要以治疗继发感染为主，及时扑杀失去治疗价值的病猪，并作无害化处理。