万遂如
(中国畜牧兽医学会动物传染病学分会,吉林 长春 130122)
猪博卡病毒(PBOV)自2009 年由瑞典Biomstrom等从断奶仔猪多系统衰竭综合征的仔猪淋巴结中分离鉴定出来后,近几年来在欧洲、北美、中国、泰国、韩国、日本等地均有猪感染博卡病毒的报道,并且发现猪博卡病毒与其他病毒、细菌等共感染或继发感染,对养猪生产构成严重威胁。目前研究发现,博卡病毒在我国猪群中阳性检出率很高,危害性日趋严重,应引起重视。为此,本文就猪博卡病毒感染及其防控技术谈点个人意见,仅供养猪场参考。
猪博卡病毒属于细小病毒科(Parvoviridae),细小病毒亚科(Parvovirus),博卡病毒属(Bocavirus)成员。细小病毒科,包括2 个亚科:浓核病毒亚科感染昆虫,细小病毒亚科感染脊椎动物。细小病毒亚科又分为细小病毒属、博卡病毒属、红病毒属、依赖性病毒属和阿母多病毒属等5 个属。博卡病毒属包括5个种:猪博卡病毒(PBOV)、牛细小病毒(BPV1)、犬细小病毒(CMV1)、大猩猩博卡病毒(GBOV1)、人博卡病毒(HBOV1-4)。猪博卡病毒是一种无囊膜的分节段的单股DNA 病毒,也是一种体积最小、结构最简单的新的细小病毒,为二十面体的小颗粒,直径为20~26 nm,基因组为单股DNA,呈线状。基因组由3个开放阅读框构成(Open Reading Frame,ORF),还有4 个功能蛋白:ORF1 编码非结构蛋白(NS1)、ORF2编码2 个衣壳蛋白(VP1 和VP2)、中间开放阅读框(ORF3)编码一个高度磷酸化核蛋白(NP1)。非结构蛋白(NS1)较为保守,而衣壳蛋白(VP1 和VP2)较易发生突变。VP2 蛋白是主要的衣壳蛋白,占全部衣壳蛋白的95%以上。病毒5' 端的独特区域(ofVP1、VP1-V),具有磷脂酸A2 样活性,这种活性与病毒的感染性有关。目前研究发现,猪博卡病毒的基因大小约为5.2 kb 左右,完整NP1 基因及部分VP1/VP2基因与人博卡病毒(HBOV)4 型存在遗传相关性,大约有60%核苷酸序列同源。PBOV(中国株)与PBOV(瑞典株)、PBOV(香港株)NP1 基因之间的同源性达到90%以上。而中国株(PBOV)与大猩猩博卡病毒、犬细小病毒、牛细小病毒的NP1 基因的同源性仅为44%~55%。而PBOV 与经典的猪细小病毒毒株之间没有亲缘关系,这表明PBOV 的NP1 基因在同种间具有较好的保护性。基于NS1 蛋白或VP 蛋白的不同,可将猪博卡病毒分为PBOV1、PBOV2、PBOV3、PBOV4 和PBOV5 五种亚型。PBOV1 又称为猪博卡样病毒(PBOLV),首次发现的PBOV2 又称为猪细小病毒(PPV4),PBOV3 介于PBOV1 和PBOV2 之间(基因组序列为5 235 bp),PBOV3 在健康猪粪便中检出率为19.6%,PBOV4 在中国香港出现(6V/7V株),PBOV5 于2012 年在我国江苏腹泻疾病猪体内发现(JS677 株)。猪博卡病毒5 种亚型通常存在混合感染,在欧洲和北美已发现。
5%聚维酮碘溶液、1∶300 月苄三甲氯铵溶液、0.8%戊二醛溶液、1%菌毒敌、0.5%过氧乙酸、卫康、强力消毒灵等消毒药物对博卡病毒有杀灭作用,可用于猪舍、猪圈、环境及物品、用具的消毒。
博卡病毒属的病毒来源于牛,后又发现犬博卡病毒(MVC)。2005 年瑞士学者Allander 等从2 岁小孩的呼吸道感染鼻咽分泌物中检测分离到人的博卡病毒(HBOV),并证实其与牛和犬的博卡病毒同源性很高。随后澳大利亚、日本、加拿大、西班牙和中国等也先后在患呼吸道感染的婴幼儿标本中检测分离出人的博卡病毒。2009 年瑞典首次发现猪的博卡病毒,2010—2011 年罗马尼亚学者在野猪体内检出了博卡病毒,检出阳性率为12.9%。其中6~12 月龄野猪阳性率为77.06%,12~13 月龄的野猪阳性率为22.64%。2011 年我国江苏兽医研究所从发生圆环病毒2 型(PCV2)感染的138 份病猪样品中检出博卡病毒,感染阳性率为38.4%,PCV2 与PBOV 两种病毒混合感染占23.2%。来自上海、江苏、安徽、山东及贵州等省、市的病猪粪便样品中检出PBOV 感染阳性率高达63.2%;来自河北某猪场健康猪的粪便中检出PBOV 感染阳性率为12.5%。据关茹、田益明等(2017)报道,从我国西南地区36 个猪场的猪血清与粪便样品208 份,检出PBOV 感染猪场阳性率为52.7%,PBOV 样品阳性率为22.1%,其中PBOV 与传染性胃肠炎病毒(TGEV)共感染阳性率为2.78%,PBOV 与PEDV 共感染阳性率为20%。而且证实,我国西南地区分离的PBOV 主要为PBOV3、PBOV4、PBOV5 三个基因型,PBOV 毒株存在遗传多样性,不同的猪场存在PBOV 不同基因型毒株混合感染。鲁杨超、张晶等(2017)报道,从来自湖北、河南、河北、福建、广东等省的31 个养猪场及部分屠宰场采集的799 份样品采用PCR 方法检测PBOV 带毒情况。结果显示,PBOV 总感染阳性率为37.9%,其中湖北检出阳性率为44.2%、河北为41.48%、河南为32.31%、广东为19.57%;粪便样品阳性率为59.62%,血清样品阳性率为36.5%,PBOV 与PCV2 混合感染率为3.48%。
猪博卡病毒主要通过空气经呼吸道感染,也可经消化道、血液及胎盘垂直传播。本病一年四季均可发生,但猪只发病多见于秋末、冬季与早春季节。气温寒冷、天气突变以及各种应激等可诱导本病的发生与流行。目前兽医临床上多见PBOV 常与其他病毒共感染,研究证实PBOV 对猪只发生猪圆环病毒感染与猪病毒性腹泻疾病具有促进和加重病情的作用。
猪博卡病毒可引发猪只发生呼吸道疾病和肠道感染,临床上表现为支气管炎、肺炎及急性与慢性胃肠炎症状。仔猪出生后2~3 天发病,先呕吐,后出现剧烈的腹泻,排黄绿色、浅绿色或灰白色水样粪便,病猪精神沉郁,脱水消瘦,被毛粗乱,不吃,一般于5~7 天内死亡,病死率高达50%~80%。断奶前后的仔猪发病表现为减食,精神不振,个别体温升高,皮肤发红,耳朵发紫,鼻孔流出脓性液体,腹泻,行走后肢无力,不能站立,有时会发生突然死亡,但死亡率较低。妊娠母猪发病可见流产、产死胎、食欲减少,精神不振。临床上常见PBOV 与圆环病毒2 型、猪输血传播病毒(TTV1 与TTV2)、蓝耳病病毒、流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒及猪瘟病毒等共感染,使病情加重,临床症状复杂化,病死率增高。
死亡仔猪尸体消瘦,脱水,被毛无光泽。剖检可见胸腔积液,心外膜纤维素性渗出,有斑点状出血。肺脏呈间质性水肿,有大理石样病变。肝脏表面有白色坏死点;脾脏肿大,有黑色坏死灶;肾脏呈淡黄色或黑色病变;胃黏膜呈弥漫性出血;大肠壁坏死、盲肠有纽扣状溃疡、小肠黏膜充血,肠壁变薄透明、无弹性;肠腔内充满水样稀粪,肠系膜淋巴结肿大、腹股淋巴结肿大等。
根据流行特点、症状特征及病理变化只能作出初步诊断,确诊本病一定要进行实验室诊断。目前实验室检测的方法主要有病毒的细胞培养与鉴定、间接免疫荧光技术、酶联免疫吸附试验、聚合酶链式反应(PCR)和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等。目前使用较多的是用PCR 或RT-PCR 检测PBOV,该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点。
养猪场要坚持“管重于养,养重于防,防重于治,综合防控”的方针、坚持实行“全进全出”分点隔离饲养管理制度,坚持定期消毒、驱虫、灭鼠、杀虫制度。严禁饲喂发霉变质的饲料、严禁滥用抗生素、严禁使用违禁的饲料添加剂、严禁在猪场内混养其它动物。重视猪只福利,保证猪舍冬暖夏凉、空气流动、清洁干燥、饲养密度适中。粪污、污水与污染物要无害化处理,资源化利用;保持好生态环境,做到健康生态养殖。定期对员工进行养猪生产技术培训,以提升养猪生产的技术水平,进而提高养猪场的生产效力与经济效益。
目前我国养猪场老病新发,新病不断的出现;病原体变异加快,毒力增强,致病力增高;免疫抑制普遍存在,威胁加重;多种病原体混合感染与继发感染越来越普遍,临床上单一病原感染病例极少见;猪群长期带毒,处于亚健康状态等。由此可见,养猪场疫病防控形势非常严峻,防控的难度也越来越大。因此,养猪场一定要加大防控重大疫病的力度,要根据当地动物疫病流行状况与养猪场对疫病监测和检测评估结果,结合疫苗的性质与作用以及猪场生产中存在的实际问题,制定科学合理的、符合猪场实际的免疫程序,有计划地实施免疫预防,以提高猪群的特异性免疫力。
虽然目前还没有可用于预防猪博卡病毒感染的疫苗,但是养猪场必须要重点做好猪瘟、口蹄疫、伪狂犬病、圆环病毒病、猪乙型脑炎及病毒性腹泻(三联活疫苗)等病毒性传染病的免疫预防,确保猪群具有对抗主要疫病的特异性免疫力。细菌性疫苗尽可能少用。蓝耳病疫苗提倡使用灭活疫苗;弱毒活疫苗是否使用,可根据猪群健康状态评估后使用。总的原则是使用的疫苗种类不要过多,接种疫苗的次数不要频繁,更不要长期超大剂量接种疫苗。绝不是疫苗接种越多,剂量越大,免疫力就越强。接种疫苗过多、剂量过大,会造成猪体产生免疫麻痹、免疫不全,疫苗之间相互产生干扰,导致免疫失败。疫苗接种时可配合使用动物免疫增强剂,比如猪用转移因子、白细胞介素-4、MHC-Ⅱ类分子等,可与弱毒活疫苗混合注射(与灭活疫苗则分别肌注),使用方便。免疫增强剂能有效增强疫苗的免疫应答,提高疫苗免疫效果、抗体水平与免疫保护力。
养猪场在养猪生产中要重视保健预防,根据猪只生长发育不同的阶段、不同的生产环节,以及猪场疫病发生的规律,有目的有针对性地选用某些有效药物或保健制剂通过饲料或饮水中添加,进行药物保健预防,可有效地提高动物机体的非特异性免疫力与抗病力,减少猪群中各种疾病的发生与流行,这也是养猪场一项十分重要的防控疫病的技术措施。
保健预防药物要选用没有毒副作用,安全效果好,不能产生药物残留与耐药性,具有抗病毒、抗细菌、抗应激作用,并能提高动物机体免疫力与抗病力的药物。不提倡使用抗生素类药物,可选用中兽药制剂,如黄芪多糖、灵芝多糖、香菇多糖、甘草多糖、猪苓多糖、清开灵、板蓝根、穿心莲、大青叶、鱼腥草、金银花、连翘、双黄连等制剂。细胞因子制剂,如干扰素、转移因子、白细胞介素、免疫核糖核酸、高免球蛋白等制剂。生物抗菌制剂,如溶菌酶、抗菌肽、细菌素及植物内生菌等制剂。中药制剂与细胞因子制剂和生物抗菌药物可以联合使用。既能充分发挥各种制剂的功能,又能相互协同提高药物作用效果,而且不产生干扰,安全、防治效果更佳,使用方便。
保健预防方案介绍如下,养猪场可结合猪场生产实际选用。
6.3.1 初生仔猪的保健预防
方案1:仔猪出生后,用消毒纱布或毛巾将其身体擦洗干净,然后放入30 ℃左右的保温箱中待10分钟,让其适应一下外界环境与温度。然后于1 日龄与4 日龄各肌肉注射免疫球蛋白(每头0.25 毫升)、加转移因子(每头0.25 毫升)1 次,同时口服止痢宝(嗜酸乳杆菌口服液),第1 天每头口服1 毫升,第2天每头再口服2 毫升。
方案2:仔猪出生后,放入保温箱中待10 分钟,然后于1 日龄与4 日龄各肌肉注射免疫核糖核酸(每头0.25 毫升)、加白细胞介素-4(每头0.25 毫升)1 次;同时口服杆诺肽口服液(芽孢杆菌和变形内毒素),第1 天每头口服2 毫升,第2 天每头再口服2 毫升。
方案3:仔猪出生第3 天,每头肌注牲血素1 毫升,0.1%亚硒酸钠-维生素E 注射液0.5 毫升,可有效预防仔猪发生缺铁性贫血与缺硒性拉稀。
6.3.2 成年猪的保健预防
方案1:穿心莲粉1 000 克、干扰素800 克、转移因子400 克、溶菌酶400 克,拌入1 吨饲料中,连续饲喂12 天。
方案2:银翘散(金银花、连翘、甘草、桔梗、荆芥、薄荷等)600 克、干扰素800 克、白细胞介素-4(400 克)、抗菌肽400 克,拌入1 吨料中,连续饲喂12天。
方案3:黄连解毒散(黄连、黄芩、黄柏、栀子等)800 克、干扰素800 克、细菌素400 克、免疫核糖核酸500 克,拌入1 吨饲料中,连续饲喂12 天。
以上方案可用于保育仔猪、肥育猪转群及后备种猪配种前保健预防,可有效预防猪的高热综合征、呼吸道疾病综合征以及多种病毒与细菌混合感染与继发感染的传染性疾病。一年四季均可使用,安全、效果好。
6.3.3 生产母猪保健预防
方案1:黄芪多糖粉1 000 克、干扰素1 000 克、转移因子500 克、溶菌酶500 克,拌入1 吨饲料中,连续饲喂12 天。
方案2:鱼腥草粉1 500 克、干扰素1 000 克、白细胞介素-4(500 克)、抗菌肽500 克,拌入1 吨饲料中,连续饲喂12 天。
方案3:双黄连粉(金银花、黄芩、连翘)800 克、干扰素1 000 克、细菌素500 克、电解质多维600克,混合对水1 吨,连续饮用12 天。
母猪妊娠2 个月、母猪产仔前后各1 周,都可使用上述方案进行保健预防。不仅可预防各种病毒与细菌共感染引发的疫病,防止繁殖障碍的发生,还可预防母猪产前产后便秘及预防子宫内膜炎、阴道炎与乳房炎等“三炎征”的发生。
在兽医临床上对疫病要做到早发现、早诊断、早治疗。及时采取抗病毒疗法、细胞因子疗法、支持疗法及对症治疗等进行综合治疗,方可取得良好的治疗效果。治疗方案介绍如下,可结合猪场发病状况选用。
方案1:穿心莲注射液(每千克体重0.1 毫升),加干扰素(每40 千克体重1 毫升),排疫肽(5 种高免球蛋白,300 千克体重5 毫升,重症加量),混合肌注,每日1 次,连用3 天;同时肌注多西环素注射液(每千克体重0.2 毫升),每日1 次,连用3~4 天。
方案2:黄芩注射液(黄芩、柴胡、金银花、鱼腥草等,每千克体重0.2 毫升),转移因子(每50 千克体重1 毫升,重症加量),干扰素(每40 千克体重1毫升),混合肌注,每日1 次,连用3 天;同时肌注硫酸头孢喹肟注射液(第4 代头孢,每千克体重2 毫克),每日1 次,连用3~4 天。
方案3:黄芪多糖注射液(每千克体重0.1 毫升),免疫核糖核酸(每25 千克体重1 毫升,重症加量),混合肌注,每日1 次,连用3 天;同时肌注易速达(长效头孢噻呋晶体,每20 千克体重肌注1 毫升),肌注1 次,15 天有效。
方案4:电解质多维800 克、葡萄糖粉800 克、溶菌酶500 克、维生素C 200 克,对水1 吨,连续饮水7 天。
病猪不吃料,下午肌注复合维生素B 注射液(每千克体重0.2 毫升),每日1 次,连用2 次。严重者可静脉注射10%的葡萄糖盐水注射液加维生素C 20毫升,每日1 次。