溶血对化学发光微粒子免疫法检测胰岛素与C肽结果的影响

钱颖 董学君

糖尿病是因胰岛素分泌和（或）作用缺陷引起的以高血糖为主要特征的一种全身性代谢性疾病。长期高血糖可导致多脏器损害或衰竭。胰岛素与C肽释放试验、口服葡萄糖耐量试验（OGTT）在糖尿病诊断分型、胰岛素抵抗、低血糖评估及β细胞功能评估中起着重要作用［1-2］。释放试验与OGTT常同时进行，在相应的5个时间点各抽一次血，然后根据五次结果综合分析。任何时间点的结果均应准确无误，错误结果会影响对胰岛素、C肽是否出现峰值以及出现时间的判断。准确的实验室检测结果是保证临床诊疗工作的重要条件，日常工作中，众多因素会影响检测结果的可靠性，比较常见的因素是溶血。溶血会使血清或血浆呈现红色。当血浆或血清游离血红蛋白浓度＞0.3g/L（18.8μmoL/L）时，视觉可检出粉红色变化，即判断为溶血［3］。溶血干扰生化项目检测已有多篇文献报道，本文主要分析溶血对化学发光微粒子免疫法检测胰岛素和C肽结果的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2018年3-4月行胰岛素、C肽释放试验的30例患者，其中男3例，女3例；年龄35～80岁，平均55.5岁。

1.2 试剂与仪器 美国Abbott公司ARCHITECT i2000化学发光免疫仪，胰岛素与C肽检测试剂为雅培公司配套试剂盒；胰岛素采用一步法免疫测定，C肽采用两步法免疫测定。真空采血管、一次性采血针由浙江康是医疗器械有限公司生产。离心机由安徽中科中佳科学仪器有限公司生产。

1.3 方法 清晨采集每位患者空腹静脉血1支，该时间点作为0h。饮入250ml含75g无水葡萄糖，之后0.5h、1h、2h、3h，各时间点分别采血1支。每支标本血量均约5ml。采血管于室温静止放置15min，待血液完全凝固后，3500r/min离心5min。离心后血清呈淡黄色，无肉眼可见溶血、黄疸及脂浊。每位患者五支血集齐后同时上机检测。标本检测后马上用吸管吹打搅拌红细胞20次，人为溶血。3500r/min离心5min，肉眼可见溶血，血清呈淡红色。溶血后血清中血红蛋白浓度＜5g/L。立即上机检测。30例标本溶血前后，均按照标准操作规程检测胰岛素与C肽，记录结果。检测时仪器运行正常，室内质量控制在控，环境湿度、温度适宜。

1.4 统计学分析 采用SPSS l7.0统计软件。经正态分布检验，胰岛素与C肽检测结果均呈偏态分布，结果用中位数（四分位数）［M（P25～P75）］表示；组间比较用Wilcoxon符号秩和检验；率的比较采用χ2检验。所有检验均选用双侧检验，P＜0.05为差异有统计学意义。按以下公式评价溶血对检测结果的影响：｜F｜=（X0-X）/X0×100%。式中：｜F｜为溶血引起的改变；X0为溶血前血清待测物浓度；X为溶血血清待测物浓度。若｜F｜＞10%，表示存在明显的溶血干扰［4］。

2 结果

标本溶血可降低血清胰岛素和C肽的检测结果。本资料结果显示，30例标本（100%）溶血后血清胰岛素水平均低于溶血前（下降幅度为1.1%～45.4%），23例标本（76.7%）溶血后血清C肽水平低于溶血前（下降幅度为0.3%～12.8%）。其中15例标本（50%）胰岛素的降低幅度＞10%，1例标本（3.3%）C肽的降低幅度＞10%，差异有统计学意义（P＜0.01）。30例标本血清胰岛素的检测浓度为76.65（47.30～409.60）pmol/L，溶血后胰岛素的检测浓度为72.85（42.075～269.175）pmol/L，差异有统计学意义（Z=-4.783，P＜0.01）。30例标本血清C肽的检测浓度为908.5（585.25～2374.25）pmol/L，溶血后C肽的检测浓度为885.5（591.75～2378.25）pmol/L，差异有统计学意义（Z=-2.952，P=0.003）

3 讨论

胰岛素是一种多肽类激素，由α、β两条肽链构成，两条肽链之间由两个二硫键连接。胰岛素在胰岛β细胞功能评估中起着重要作用。C肽是由31个氨基酸组成的单链多肽，在胰岛素前体分子（即胰岛素原）中连接胰岛素的α、β链。胰岛素前体可分解产生相等摩尔量的胰岛素和C肽，经胰岛β细胞分泌颗粒分泌后进入血液循环［5］。检测C肽同样可评估胰岛β细胞活性［6］。胰岛素主要（约40%～50%）经肝脏灭活，其半衰期约为5min。C肽不经肝脏摄取而经肾脏清除，较胰岛素有更长的半衰期（＞30min），且波动幅度更小；同时，C肽不受外源性胰岛素和胰岛素自身抗体的干扰。因此在某些情况下C肽检测比胰岛素检测更具有优势。

在胰岛素C肽释放试验日常检测工作中常发现标本溶血的情况。关于溶血对胰岛素和C肽的影响，雅培配套试剂说明书提示，不能使用溶血标本检测胰岛素，但当纯化血红蛋白含量达5g/L时不会对检测产生干扰；不能使用严重溶血（＞5g/L）的标本检测C肽。

多篇文献报道，溶血可以导致血清胰岛素检测水平偏低［7-8］。然而溶血对C肽的影响，结果并不一致。本资料结果显示，溶血组胰岛素浓度低于非溶血组，溶血组C肽浓度低于非溶血组；溶血使化学发光微粒子免疫法检测的胰岛素与C肽结果均降低。研究报道红细胞中含有胰岛素降解酶（IDE）［9］，胰岛素降低的原因可能是，红细胞膜破裂时胰岛素降解酶被释放入血清，特异高效地分解胰岛素。胰岛素的检测浓度随着溶血程度增加而降低［4］。溶血对C肽的影响程度各实验室报道不同，这可能与检测方法、仪器、试剂以及标本的溶血程度不同有关。

合格的标本是保障实验室获得及时、正确、有效检测结果的重要条件。送检标本不合格的原因较多，其中溶血非常多见，溶血标本比例占所有常规样本的3.3%，占所有不合格标本的40%～70%［10］。溶血严重影响分析前质量控制，作者进行标本采集、处理、运送等培训，建立了完整规范的标本检测前处理流程，提高标本合格率，同时严格执行不合格标本退回制度。但是实际工作中常出现患者静脉条件差（如婴幼儿、留置针）、多次静脉穿刺（胰岛素、C肽释放试验）等导致的标本溶血。此类情况患者因采血困难常拒绝重采，即使重新采集也较难获得满意标本；另外释放试验对采血时间有要求，发现溶血时通常已来不及重新采集。这些情况需要正确分析溶血对检测结果的影响。

单个分析30例样本，肉眼可见溶血即能降低胰岛素与C肽的检测浓度，50%溶血标本的胰岛素浓度改变＞10%，3.3%溶血标本C肽的降低幅度＞10%。溶血对胰岛素检测结果的影响更加显著，溶血标本胰岛素检测结果可能会影响医生对患者病情的正确判断。鉴于溶血对C肽影响较小，当标本溶血并无法重新采血时，需对检测报告备注说明溶血，同时可以适当结合C肽与胰岛素检测结果进行综合分析。

目前溶血影响胰岛素浓度的主要原因在于红细胞内胰岛素降解酶的存在，为了避免胰岛素降解酶对胰岛素检测结果的影响，可以尝试在真空采血管中加入胰岛素酶抑制剂，其有效性待后续研究证明。