投喂频率和两种糖源对南美白对虾体成分和免疫力的影响

■杨品贤 郭 冉* 杨 丽 夏 辉 贾高旺 李雪鹤

(1.河北农业大学海洋学院，河北秦皇岛066000；2.中国农业大学烟台研究院理工学院，山东烟台264670)

南美白对虾（Penaeus vannamei）原产于南太平洋沿岸的暖水水域，分类学上隶属节肢动物门(Arthropo⁃da)、甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapoda)、对虾科(Penacidae)、对虾属(Penaeus)、游泳亚目(Natantia)[1]，自20世纪80年代传入中国，因具有生长迅速，成活率高，肉质鲜美等特点而被更多人喜爱，并成为世界上产量最高的对虾品种[2-3]。

但在需求量迅猛提高的同时，南美白对虾的养殖也面临着一定的挑战，随着近年来养殖成本和人力投入的不断升高，对南美白对虾集约化养殖模式和养殖饲料有很大的威胁。目前关于优化养殖模式和改良饲料配方的研究不断增加，但多集中在鱼类方面[4-6]，关于饲养频率对南美白对虾的生长与环境方面已进行了一些研究[7-10]，但饲养频率和糖源饲料交互作用对南美白对虾生长和免疫力的研究未有研究报道，本实验进行了不同饲养频率和两种糖源饲料对南美白对虾的体重增加率、肥满度、肝体比以及对虾免疫力的比较研究，结合南美白对虾的免疫力变化指标，以寻找一种高效可行的南美白对虾投喂策略和饲料配方，为今后的养殖生产提供了技术支撑。

1 材料与方法

1.1 实验饲料的配制

以鱼粉和豆粕为主要蛋白源，鱼油和玉米油为主要脂肪源，以蔗糖和玉米淀粉分别为主要糖源配制实验饲料，实验配方及成分分析值见表1。在饲料制作过程中，所有原料粉碎后经80目网过筛，各原料混合后加入适量的水搅拌均匀，经F-26双螺杆压条机(华南理工大学，广东)加工制成直径为1.2 mm的饲料，切碎，烘箱65℃熟化干燥40 min，风干后于-20℃冰箱中冷冻保存备用。

表1 实验用饲料成分及含量（%）

1.2 实验设计管理

实验于河北省水产经济动物增养殖学重点实验室进行，正式实验前虾苗标粗后，随机选取平均质量为（0.38±0.01）g的健康虾苗进行实验，实验室水族箱规格为(40 cm×50 cm×60 cm)，实验采用3×2双因素分析方法，设置6个实验组，每组3个平行，对虾投喂频率见表2，按对虾体质量的6%～7%定量投喂，共18个箱。实验用水为天然海水，盐度约为（29±1），全天增氧，每日吸脏，换水1/2～1/3，间隔两周称重一次，养殖过程中测定pH值、溶氧和氨氮含量并记录。养殖期间溶解氧含量(7.5±0.5)mg/l，pH值稳定在8.0～8.5，氨氮含量约(0.5±0.1)mg/l，平时统计死亡情况并记录。

1.3 样品采集及分析

8周生长实验结束后，实验对虾饥饿24 h后，称重计数并测量体长，计算增重率及肥满度等生长指标；解剖得到肝胰腺，分别称重，用于计算肝体比。每箱随机取10尾虾，以2 ml一次性注射器先抽取1 ml抗凝剂再于血淋巴处吸取0.2 ml淋巴血混合均匀后移入离心管内，经2 500 r/min 4℃离心10 min，弃血细胞和沉淀，留上清液，4℃保存。组织样品剪碎、冰水浴研磨，按一定的质量与体积比制备组织匀浆待测。水分含量测定采用105℃烘干减重法；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法测定；粗脂肪含量采用索氏抽提法测定；粗灰分含量550℃马弗炉灰化法测定。相关酶活性测定：谷草转氨酶、谷丙转氨酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶和总抗氧化能力的测定均采用南京建成生物工程公司生产的试剂盒检测，用蛋白质测定试剂盒测定组织匀浆蛋白质含量(考马斯亮蓝法)。

表2 饲养频率及时间

南美白对虾生长性能及体形态学计算公式为：

增重率（%）=100×（末体重-初体重）/初体重

特殊体重增长率(%/d)=100×(Ln末体重-Ln初体重)/实验天数

特殊体长增长率(%/d)=100×(Ln末体长-Ln初体长)/实验天数

肝体比(%)=肝胰腺重量/终末体重×100

肥满度(g/cm3)=虾体重/(虾体长)3

1.4 数据处理

用SPSS 19.0统计软件进行实验数据分析，实验结果以“平均值±标准差(mean±SD)”表示，数据统计用ANOVA单因素比较分析，交互作用采用双因素方差分析法（Two-Way LSD，Duncan's），实验结果以P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 不同组别对南美白对虾生长性能的影响(见表3)

表3 不同组别对南美白对虾生长性能的影响

由表3可知，经过8周的饲养后随着投喂频率的增加对虾增重率、特殊体重增长率、特殊体长增长率、肥满度显著升高(P＜0.05)，相同频率各糖源组间无明显差异(P＞0.05)。在蔗糖组和玉米淀粉组中，高投喂频率下S2、S3、C2、C3组的增重率、特殊体重增长率、特殊体长增长率显著高于低投喂频率S1、C1组(P＜0.05)，以C2组最高，相同投喂频率下组间无显著差异。S2、C3组肥满度显著高S1、C1组(P＜0.05)，投喂频率和糖源组成对各组对虾肝体比无显著影(P＞0.05)，投喂频率和糖源饲料对南美白对虾生长性能无交互作用(P＞0.05)。

2.2 不同组别对南美白对虾体组成成分的影响（见表4）

由表4可知，投喂频率和糖源组成对各组南美白对虾全虾水分、全虾粗灰分、全虾粗蛋白质含量影响不显著(P＞0.05)。提高投喂频率后南美白对虾全虾粗脂肪呈上升趋势，S3组含量最高。

2.3 不同组别对南美白对虾免疫功能的影响(见表5)

表4 不同组别对南美白对虾体营养成分影响(%)

表5 不同组别对南美白对虾免疫酶的影响

如表5所示，投喂频率和糖源组成对各组南美白对虾肝胰腺中AKP、ACP、SOD活性有不同影响，对虾血淋巴中AST、ALT及肝胰腺中T-AOC各组间无显著影响（P＞0.05）。

高投喂频率C2、S3、C3组肝胰腺中AKP、SOD活性显著高于低投喂频率S1、C1组(P＜0.05)，C2组AKP活性显著高于S2组（P＜0.05），AKP交互作用显著（P＜0.05）。对虾ACP活性随投喂频率而增加，以S1、C1组ACP活性显著低于其他各组（P＜0.05），相同投喂频率下C1组ACP活性显著高于S1组（P＜0.05），组间无交互作用（P＞0.05）。

3 讨论

有研究表明南美白对虾胃容量小，提高投喂频率可以缩短胃排空的时间，减少饥饿效应，使对虾能更多摄取饲料中的营养，有利于生长[11-12]。本实验结果显示S2、S3、C2、C3组的增重率、特殊体重增长率、特殊体长增长率显著高于S1、C1组，但高投喂频率组间并无显著差异；糖源间生长差异亦不显著。高投喂频率组S2、S3、C2、C3肥满度高于低投喂频率S1组，说明提高投喂频率对对虾的生长有促进作用，表现为生长速度高于低投喂频率组，并获得更高的肥满度。S3、C3组的增重率、特殊体重增长率略低于S2、C2组，分析原因可能是摄食频率增加后能量消耗加快，导致用于生长的能量减少。对虾肝体比无显著差异，低投喂频率可能并未对对虾肝胰腺造成损伤。

随着投喂频率的增加，南美白对虾全虾水分、全虾粗蛋白质、全虾粗灰分含量无显著差异，粗脂肪含量存在差异，以S3组最高。有研究证明脂肪沉积会受糖源种类的影响[13]，提高投喂频率后对虾利用糖代谢供能，将更多的能量转变成脂肪累积，类似的结果见潘庆等[14]对草鱼（Grass Carp）的研究。

对虾主要依靠非特异性免疫来提高对疾病的抵抗力[15]。酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）是反映对虾免疫能力的重要指标，在对虾防御反应中发挥重要作用。本实验中，AKP在体内负责磷酸基团的转移和代谢，可参与防御机制中磷酸基团的转移和代谢[16]，ACP在体内直接参与磷酸基团的转移与代谢[17]，均可以反映机体免疫机能状况。提高投喂频率后南美白虾肝胰腺中AKP活性的提高，S3组AKP含量显著高于S2组，提高投喂频率加快了对虾肝胰腺组织的物质代谢，为二磷酸腺苷磷酸化形成三磷酸腺苷提供无机磷[18]，积累更多的能量，从而促进对虾的生长，增强机体免疫力，在王美雪等[19]对凡纳滨对虾生长的研究中显示投喂玉米淀粉的促生长效果优于蔗糖，大分子的玉米淀粉作为糖源更利于对虾肠道吸收，可能会减少肠道有害菌群对机体的危害[20]，增强了对虾免疫力，具体机制有待进一步研究和论证。

SOD、CAT是生物体抗氧化防御系统的关键酶[21]，二者联合可起到清除活性氧自由基，缓解自由基对机体细胞的损伤，保护体细胞安全[22]。本研究中，高投喂频率组C2、S3、C3肝胰腺中SOD活力显著高于S1、C1组，投喂频率和糖源组成对南美白对虾肝胰腺中T-AOC活性无显著影响，但提高投喂频率后对虾T-AOC活性呈上升趋势，结合对虾生长状，说明提高投喂频率可增强对虾抗氧化性能，有利于增强对虾免疫力。

转氨酶活性的高低可作为反映肝细胞受损伤的主要敏感指标之一[23]。AST和ALT主要功能是参与氨基酸代谢，对虾血淋巴中AST和ALT酶活性一般较低，但当水产动物营养不良或是肝胰腺受损时，往往会导致血淋巴中AST和ALT活性升高[24]，本实验中血淋巴AST和ALT并未受到投喂频率和糖源种类的影响，表现为对虾肝体比无显著差异。

4 结论

投喂频率会影响南美白对虾免疫能力，但对南美白对虾肝体比影响不显著，糖源组成对对虾免疫力影响相对较小。综合考虑生长、肥满度和体成分因素，建议今后养殖中日投喂5次为宜。