消化系统肿瘤与MTHFR基因多态性相关研究

程筱雯，李　洁，徐元宏

亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)在代谢叶酸的生理过程中发挥着重要作用。MTHFR 基因突变会导致机体内环境发生紊乱，包括DNA复制、甲基化修饰等发生异常，MTHFR基因第4外显子的C677T位点的突变是最常见的，是引起编码酶缺乏或活性下降的最常见原因。已有报道[1-2]表明由于MTHFR 基因C677T突变可导致编码酶活性下降、DNA甲基化异常，从而促进癌症发生。MTHFR 基因的多态性与结直肠癌、胃癌及肝癌等多种消化系统恶性肿瘤的易感性联系紧密[2-4]。该研究旨在了解消化系统恶性肿瘤患者群体MTHFR基因C677T位点的基因多态性的频数分布差异，并分析年龄、性别、体重指数(body mass index, BMI)对MTHFR 基因C677T位点遗传多态性发生频率的影响。

1　材料与方法

1.1病例资料选取安徽医科大学第一附属医院干部病房外科2016年11月～2017年9月收住院且确诊的消化系统恶性肿瘤患者42例，其中男29例，女13例，年龄44～89岁。

1.2标本类型外周全血(EDTA-K2抗凝)。

1.3仪器实时荧光定量PCR仪(Roche Cobas z480);芯片杂交仪(上海百傲)。

1.4试剂MTHFR基因型检测试剂盒(上海百傲)。

1.5检验方法定性PCR+基因芯片法。实验流程严格按试剂盒说明书操作步骤进行。

1.6统计学处理采用SPSS 20.0软件进行分析，运用单样本Kolmogorov-Smirnov法进行拟合优度检验和频数统计寻找优势基因型，运用χ2检验研究性别对基因型频率的影响，运用单因素方差分析(One-Way ANOVA)分别研究年龄和BMI对基因型频率的影响。

2　结果

2.1消化系统恶性肿瘤MTHFRC677T的基因型分布情况本研究中检测MTHFR基因677位点的3种不同基因型，结果检出野生型纯合子CC型13例(30.95%)，突变杂合子型CT型24例(57.14%)，突变纯合子型TT型5例(11.91%)；运用单样本Kolmogorov-Smirnov法进行拟合优度检验寻找优势基因型，结果显示，χ2=2.469，P<0.001，说明三种基因型出现频率不服从均匀分布，存在优势基因，对三种基因型进行频数统计显示，CT型为优势基因型，占总数的57.14%。

2.2性别、年龄、BMI对MTHFR基因C677T遗传多态性的影响运用χ2检验研究性别对基因型的影响，运用One-Way ANOVA分别研究年龄和BMI对基因型的影响，结果可以认为在本次研究的42例消化道恶性肿瘤患者，MTHFR C677T 的3种不同基因型在不同性别、年龄和体重指数的发生频率方面差异无统计学意义，见表1。

3　讨论

MTHFR是调节叶酸代谢的关键酶，叶酸代谢障碍会导致DNA低甲基化，而DNA的低甲基化则与肿瘤的发生密切相关。MTHFR基因677位点存在遗传多态性：野生型纯合CC型，突变杂合CT型和突变纯合TT型，多项对MTHFR基因多态性与人类肿瘤相关性的研究[5-6]显示，MTHFR基因677位点的基因多态性与胃癌、结直肠癌等多种消化系统恶性肿瘤的易感性存在密切联系，不过研究结果却有所不同，有报道提示高T677T基因频率发生食管癌的风险远远高于C677C型，认为MTHFR T677T基因型可能是食管癌的一个易感因素，而另有研究[7]认为MTHFR C677T基因多态性可能与新疆哈萨克族与汉族食管癌的易感性无关。本次研究中以安徽地区消化系统恶性肿瘤患者为研究对象，发现MTHFR基因677T位点的基因型以CT型为优势基因型，且具有统计学意义，与已有报道不尽相同，多数研究结果显示TT型是癌症患者的主要型别，同时本研究初步得到的结论是性别、年龄和BMI可能不是MTHFR基因C677T位点基因遗传多态性发生频率的主要影响因素，出现这种差异，笔者认为可能与种族和地域的差异有关。接下来的研究方向就是扩大样本量，建立正常对照以进一步验证本次研究结果，同时收集流行病学相关资料，增加饮食习惯等环境因素分析、对化疗药物敏感性及患者生存率的分析，深入研究MTHFR基因677位点基因多态性与消化系统恶性肿瘤发生的相关性。基因多态性也可能造成不同个体对同一种药物出现不同反应，所以基因多态性及多基因的联合检测对于制定个体化治疗方案势在必行[8]。

精准医疗是未来医学发展的方向，对基因多态性与疾病的相关性及其机理进行深入研究，对于不同疾病的预防及个体化治疗均具有重要指导意义。