广西牛片形吸虫病流行病学调查分析

霍孔林,陆晨阳,白安斌,周绪正,张吉丽,张继瑜,吴健敏

（1.广西兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室,广西 南宁 530001;2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 农业部兽药创制重点实验室,甘肃 兰州 730050）

广西壮族自治区属于亚热带季风气候,拥有大面积的草地及草坡,规模肉牛养殖具有较好的发展前景。随着广西养牛产业的发展,规模化、集约化的肉牛养殖场逐渐增多,随之而来疾病的防控工作,显得尤为重要。其中,片形吸虫（Fasciola spp.）是一种具有极大危害性的寄生于哺乳动物肝脏胆管中的一类大型吸虫,其长期消耗宿主的营养且造成病理损伤,使宿主饲料报酬降低,增重速度减缓,严重时甚至造成死亡[1]。广西为片形吸虫病高发地区,该病对广西肉牛养殖产业的发展造成了严重阻碍。为了摸清广西牛片形吸虫病的流行情况及其特点,我们通过采集粪便,采用水洗沉淀法以及动物剖检对片形吸虫在广西的流行做一个综合的评判,为防控该病流行提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 从2016年7月份到2017年7月份随机在广西8个不同地级市的规模牛场和散养户中采新鲜牛粪1 571头份。同时屠宰时随机抽取50头试验牛进行剖检,观察病变并采集新鲜肝脏组织及虫体。

1.2 方法

1.2.1 粪样采集及虫卵计数 将收集到的新鲜粪便放置自封袋中,每份样品不少于20 g,4℃低温保存,迅速寄送到实验室进行虫卵检查。采用尼龙筛水洗沉淀法进行检查,其操作步骤如下:（1）取粪便20克加清水500 mL,搅匀成粪液;（2）过80目铜筛过滤,滤液收集于烧杯中;（3）再过260目筛网,反复冲洗,最后将筛网内残留物冲洗下来,留在烧杯中静置沉淀待检;（4）弃上清,留25 mL,充分混匀,用移液器立即吸取200 μL混液均匀涂抹在载玻片上,在光学显微镜下计虫卵数。将显微镜所观察到的虫卵进行计数,并参考相关文献对检测的片形吸虫进行形态学分析及鉴定[2],若观察到有片形吸虫虫卵,即判断为阳性。

1.2.2 剖检及虫体采集 按蠕虫检查方法进行剖检。肉眼观察肝脏、胆囊及胆管并记录外观及内部变化,选取部分肝脏病变组织保存于10%福尔马林溶液中固定,按照常规方法制作病理组织切片。与此同时,小心地把虫体找出,进行鉴定和分类计数。

2 结果与分析

2.1 广西牛片形吸虫感染情况调查结果 本次牛主要片形吸虫流行病学调查共检测粪便1 571份,分别来自南宁、柳州、梧州、北海、崇左、河池、百色和贵港。粪便检查诊断结果表明,牛片形吸虫感染在广西较为严重,各地感染率在37.5% ～87.8%之间,平均EPG（每克粪便中的寄生虫虫卵数量）在10.2～162.9之间,且感染情况存在较大差异,如表1所示。

2.2 广西牛片形吸虫虫卵观察结果 在显微镜视野下对虫卵进行形态学的分析及鉴定,所观察到的虫卵呈长卵圆形,黄褐色,有卵盖,卵壳光滑且薄,整体呈半透明,双层。卵内有一个胚细胞及充满了卵黄细胞（见中插采版图1）,并随机抽取其中30个虫卵进行测量,其大小为 133 μm ～ 190 μm ×74 μm ～90 μm。

表1 广西不同地区片形吸虫感染率

2.3 牛片形吸虫感染器官的主要病变观察

2.3.1 肝脏眼观变化及组织切片结果 在所剖检的牛中85%以上的肝脏均有较明显的眼观病变:肝脏整体颜色变暗,有突起,指触感变硬,肝脏表面覆盖灰白色纤维性组织（见中插彩版图2A）,且局部发生炎症。严重时有大块的化脓灶或坏死灶（见中插彩版图2B）,表面有脓液渗出,且刀切开感松软。在肝组织切片结果中显示,肝窦状隙扩张淤血、肝细胞发生弥漫性脂肪变性（见中插彩版图2C）,以及少量的炎性细胞浸润（见中插彩版图2D）。提示肝脏脂肪代谢发生障碍和功能异常,可能与片形吸虫感染有关。

2.3.2 胆囊及淋巴结病变观察 在所剖检的牛胆囊中可以观察到,血管增粗且充血（见中插彩版图3A）;胆管口附近发生炎症且有炎性渗出物;淋巴结肿大、充血。切开胆囊时感胆囊壁变厚、增粗,胆汁变浓并伴随着恶臭流出,在胆囊内壁有大面积的炎症反应,在胆囊腔内有大量的片形吸虫虫体（见中插彩版图3B）,体长在20 mm～50 mm,呈竹叶状,颜色鲜红（见中插彩版图3C）。每个胆囊有1～39条虫体不等,每个胆囊以3～28条居多。且在屠宰的过程中发现,年龄越大的牛,胆囊内出现虫体的概率越大。

3 讨论

3.1 调查结果 本次调查采用尼龙筛水洗沉淀法以及蠕虫检查方法对广西部分地区牛群片形吸虫感染情况进行调查,结果显示,广西牛群感染片形吸虫的现象比较普遍,平均感染率达69.3%,与王冬英等[3]报道的广西水牛感染率在60% ～80%,黄牛感染率在60%左右的结果较为一致。与韦志锋等[4]报道的39.6%、R.S.Law son.Dope.Passi等[5]报道的51.70%有一定的差异,可能与本次调查对象以散养为主有关。南宁、梧州和崇左地区感染率高于70%,可能与其养牛集中区域较靠近沼泽湿地或者河滩附近放牧的牛群容易误食入囊蚴而导致在体内大量积累发育成为成虫,使牛机体紊乱甚至死亡。而且在调查走访中发现,养殖户的驱虫意识薄弱,95%以上的牛未用过驱虫药,也是造成此次调查阳性率偏高的原因之一。

3.2 片形吸虫感染牛病变组织观察情况 本次调查以广西片形吸虫阳性率较高地区牛群为对象,通过剖检病变组织观察以及病理组织切片的方法对牛的肝脏和胆囊胆管进行观察,从病理学以及形态学角度为牛感染片形吸虫诊断提供了依据。

王冬英[3]的研究结果表明,胆囊检测法是一种操作简单、经济且结果可靠的确诊片形吸虫感染的流行病学调查方法。其调查结果显示,切开胆囊胆管后即闻到恶臭,胆汁变浓,偶有絮状物,胆囊壁有坏死灶,或发生钙化或出血;胆囊和胆管内有片形吸虫1～52条不等,与我们此次剖检结果相似。本次调查观察到感染片形吸虫牛的肝脏表面变硬,有突起,有的切面区域变硬,与吴文德[6]剖检调查结果相似,但所不同的是,其试验牛肝病理切片中观察到的是肝脏组织纤维化,已观察不到肝脏组织结构;毛细血管增生,周边是成纤维细胞,间有红细胞,或有些区域肝细胞表现水泡状变性。而本调查观察到的是窦状隙扩张淤血、肝细胞发生弥漫性脂肪变性,有少量炎性细胞浸润。造成其试验结果的差异,有待更深入的研究。

3.3 结论 通过对广西地区牛的片形吸虫的调查分析发现,广西片形吸虫病感染较为严重,已对广西牛产业发展造成了重大的影响,我们应提高养殖户的防控意识,加强和重视片形吸虫的防治工作。