香诃止泻颗粒剂挥发油提取和包合工艺研究

柯瑾 梁玲 周田婷 朱培芳 乔宏亮 熊磊

摘要：目的建立广藿香挥发油提取和包合工艺条件。方法采用L9（3）4正交设计法对挥发油的提取和包合工艺进行考察。结果香诃止泻颗粒剂广藿香挥发油提取工艺优化为：浸泡4 h，加10倍水，回流提取8 h;挥发油β-环糊精包合工艺优化为：挥发油按1∶20（V/V）比例用乙醇溶解，挥发油与β-环糊精包合的比例为1∶8，挥发油醇溶液缓慢加入8%的β-CD溶液，55 ℃超声包合2 h。结论优化的提取和包合工艺合理、可行、稳定可控，可为申报医疗机构制剂奠定基础。

关键词：香诃止泻颗粒剂;广藿香酮;β-环糊精包合（β-CD）

中图分类号：R2842    文献标志码：B    文章编号：1007-2349（2018）06-0068-05

Study on Extraction and Inclusion Process of Volatile Oil from Xianghe Anti-diarrhea Granules

KE Jin1，Liang Ling1，ZHOU Tian-ting2，ZHU Pei-fang1，QIAO Hong-liang3，XIONG Lei1

（1 .Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500，China;

2 .Puer Songsao Grass Six Flavors Pharmaceutical Co ，Ltd ，Puer 665000，China;

3. Jilin Zixin Hannya Pharmaceutical Co ，Ltd ，Qingshi132300，China）

【Abstract】Objective：To establish the extraction and inclusion conditions for the volatile oil of patchouli Methods：L9（3）4 orthogonal design method was used to investigate the extraction and inclusion of volatile oil Results：The optimal extraction process of the volatile oil of patchouli from Xianghe anti-diarrhea granules was as follows：soak for 4 h，add 10 times water and reflux for 8 h The optimal inclusion process of the volatile oil of β-cyclodextrin was as follows：volatile oil at 1：20（V/V）dissolved by ethanol，the 1：8 of ratio of volatile oil to β-cyclodextrin，followed by slowly adding 8% of β-cyclodextrin solution for 2 hours of inclusion at 55°C ultrasound condition Conclusion：The optimal extraction and inclusion process is reasonable，feasible，stable and controllable，and can lay the foundation for applying pharmaceutical agents

【Key words】Xianghe anti-diarrhea granules，patchosterone，β-cyclodextrin inclusion（β-CD）

香訶止泻颗粒剂源于云南省名中医熊磊治疗小儿泄泻的临床效验方，临床疗效确切。本方具芳香化湿、运脾止泻之功，主治小儿脾气不运、湿浊内阻之泄泻[1]。由云南主产药材藿香、葛根、诃子、石榴皮等9味中药组成。中医认为，泄泻病变主要在脾胃，尤其与脾的运化功能失调关系密切[2]。脾主升清，胃主降浊，若脾胃失常，清气不升，浊气不降，清浊相并，下走大肠则至泄泻。前人亦有“无湿不成泻”、“湿多成五泻”之说，故治疗上总以运脾化湿为基本原则[3]。

香诃止泻汤中广藿香味辛、性微温、入脾胃经，具有芳香化浊，化湿止呕之功[4];诃子性平、味酸涩，酸能收敛，涩能止泻[5]，与广藿香共为君药，两药相配，共凑健脾化湿、温胃化浊、涩肠止泻之功，且有标本兼治之妙。葛根味辛甘、性凉，入脾胃经，具有生津止渴，升阳止泻之功[6]，茯苓健脾利水渗湿[7]，车前子渗湿止泻，能“利小便实大便”[8]，三药共为臣药。其余药物能行气、化湿、消痞，分别针对呕吐、痞胀、疼痛等泄泻伴随症状起辅助治疗作用。诸药合用，共凑健脾除湿、运脾化浊、行气止痛、温中固涩之效，使湿去脾运则腹泻自愈。

剂型选择为疗效确切、服用方便、便于携带、成本低、口感好、儿童顺应性好的颗粒剂，既保持了传统的中医药用药特色，又能最大限度地提取并保留处方中药挥发油不在煎煮过程中的挥散，本研究对方中君药广藿香挥发油的提取和包合进行研究。

1 仪器与试药

1.1.仪器Agilent1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）;C18色谱柱（ZOR BAX SAX-C18 46×250 mm，5 μm）;万分之一分析天平（上海菁海仪器有限公司）;电子秤（余姚市金诺天平仪器有限公司）;超声波清洗机（YL-040S型，上海冠特超声仪器有限公司）;电子调温电热套（PHTW型，巩义市器华仪器有限责任公司）;多头磁力加热搅拌器（HJ-4B型，常州国华电器有限公司），电热恒温干燥箱（DHG-9071A型，上海精宏实验设备有限公司）。

1.2.药材与试剂广藿香选用《中国药典》（2015版一部）收载的正品（批号：150201），购自云南泰华丰功药业有限公司。β-CD（纯度≥990%，上海瑞永生物科技有限公司）;广藿香酮（纯度>98%，批号为151014，成都普菲德生物技术有限公司）。乙腈（色谱纯，默克股份两合公司;磷酸、乙醇（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）;纯净水（娃哈哈公司）。

1.3.试验方法

1.3.1.广藿香酮含量测定方法研究[10]

1.3.1.1.色谱条件色谱柱：C18色谱柱（ZOR BAX SAX-C18，46×250 mm，5 μm）流动相：乙腈-02%磷酸溶液（60∶40，V/V），等度洗脱15 min;检测波长：310 nm;流速：1 mL/min;柱温：35 ℃。

1.3.1.2.对照品溶液的制备取广藿香酮适量，加乙醇制成1 mL含22 μg的溶液，045 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

1.3.1.3.供试品溶液的制备取广藿香油适量，加乙醇制成1 mL含500 μg的供试品溶液，045 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

1.3.1..4线性关系考察精密吸取对照品溶液1，2，4，8，12，16，20 μL，测定峰面积，以峰面积（Y）对进样量μg（X）进行线性回归。

1.3.1.5.精密度考察精密吸取对照品溶液10 μL，连续测定6次，记录峰面积。

1.3.1.6.重现性考察取适量广藿香油，按供试品溶液制备方法平行操作6份，测定广藿香酮峰面积，计算广藿香酮含量。

1.3.1.7.稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，于0，2，4，8，12 h分别进样，测定并记录峰面积。

1.3.1.8.加样回收率试验同一批广藿香油（含量：365%）取6份，每份005 g，精密称定。分别精密加入一定量的广藿香酮对照品溶液（约为样品中广藿香酮含量的10倍量），按供试品溶液制备方法制备样品，分别测定广藿香酮峰面积，计算回收率。

1.3.1.9.耐用性考察改变柱温、流速、波长、流动相比例，考察峰面积的差异。

样品的测定 取3份样品，每份01 g，按供试品溶液制备方法制备样品，测定样品中广藿香酮的含量。

1.3.2.挥发油提取工艺研究[11]

1.3.2.1.挥发油提取率考察广藿香750 g，8倍量水，浸泡8 h，从出第一滴蒸馏水开始计时，记录不同时间点挥发油体积并计算提取率（挥发油提取率（%）=挥发油收得量（ mL）/药材重量（g）×100）。

1.3.2.2.提取工艺正交考察经预试验，以广藿香油中广藿香酮的含量和挥发油提取率为综合评分指标，进行L9（34）正交实验，筛选药材浸泡时间，加水量以及提取时间条件，以确定最佳提取条件，因素水平见表1。（综合评分=广藿香酮的含量/0289×30%+挥发油得率/001×70%）

1.3.2.3.验证试验取同一批广藿香3份，每份200 g，加10倍水，浸泡4 h，提取8 h，测定挥发油提取率和广藿香酮含量。

1.3.3.挥发油包合工艺研究[12]

1.3.3.1.包合物中挥发油的测定将已称定重量的包合物置于圆底烧瓶中，加入200 mL蒸馏水，连接挥发油提取器。按2015年版《中华人民共和国药典》（四部）通则目次2204挥发油测定法项下操作，读取挥发油体积，计算包合物的挥发油包封率（包封率（%）=包合物中挥发油回收量（ mL）/（挥发油加入量（ mL）×空白回收率）×100）。

1.3.3.2.挥发油空白回收率的测定量取挥发油10 mL，置于圆底烧瓶中，加入200 mL蒸馏水，按“222”方法蒸馏，记录挥发油体积，计算空白回收率（空白回收率（%）=挥发油回收量（ mL）/量取挥发油量（ mL）×100）。

1.3.3.3.包合方法的篩选取2份β-CD制成8%的饱和水溶液，将1 mL广藿香挥发油用20 mL乙醇溶解，恒温50℃下分别在电动搅拌、超声状态下将挥发油乙醇溶液慢慢滴入β-CD饱和水溶液中，包合2 h。待包合溶液冷却至室温后，放入冰箱冷藏过夜，抽滤，包合物用少量乙醇多次洗涤，置恒温烘箱中（40℃）下干燥24 h，称重，计算包合物得率和包封率

1.3.3.4.乙醇浓度的考察取1 mL广藿香挥发油3份，分别用无水乙醇、乙醇、90%乙醇20 mL溶解，恒温50℃下加入8%β-CD饱和溶液，超声法包合2 h，计算得率和包封率。

1.3.3.5.乙醇用量的考察将1 mL广藿香挥发油分别用10 mL、15 mL、20 mL乙醇溶解，照“1334”制备包合物，计算得率和包封率。

1.3.3.6.广藿香挥发油包合的正交试验经初步试验，以挥发油包封率为指标，进行L9（34）正交试验，筛选挥发油与β-CD的比例、β-CD的浓度、包合温度、包合时间条件，以确定最佳包合条件，因素水平表见表2

1.3.3.7.验证试验称取3份β-CD于锥形瓶中，照“1336”筛选最佳条件进行包合，测定挥发油回收量，计算得率和包封率。

2 结果与分析

2.1.广藿香挥发油提取工艺研究

2.1.1.广藿香酮含量测定方法研究

2.1.1.1.线性关系考察线性回归方程为：Y=68838X-45596，r =1。表明广藿香酮进样量在00224～0448 μg时，其与峰面积呈良好的线性关系，结果见图3。

2.1.1.2.精密度考察6次测定广藿香酮峰面积RSD为018%，表明仪器精密度良好。

2.1.1.3.重复性考察广藿香酮含量计算RSD为115%，广藿香酮平均含量为365%，表面该方法重现性良好。

2.1.1.4.稳定性考察 以广藿香酮的峰面积计算RSD為033%，表明供试品溶液0～12 h内稳定。

2.1.1.5.加样回收率考察平均回收率为9724%，RSD为175%。

2.1.1.6.耐受性考察该方法耐受性良好，结果见表3：

因为检测器属于浓度型检测器，当样品量一定时，检测器瞬间响应，峰高响应值与流动相流速无关，峰面积响应值与流动相流速成反比，峰面积与流速乘积为常数;且08×8378≈12×5592，所以，该方法耐用性好。

2.1.1.7.样品测定三批样品广藿香酮含量分别为364%、365%和365%，说明该方法稳定可控。

2.2.挥发油提取工艺研究

2.2.1.广藿香挥发油提取率考察由表4和图4可知藿香挥发油在提取8h以后就不再出油，所以在提取工艺研究中设8 h为最长的提取时间。

2.2.2.挥发油提取工艺正交试验结果由表5可知B>C>A，由此可见提取时间对挥发油得率和藿香油的广藿香酮含量影响较大;初步确定最佳提取条件为A1B3C2，即浸泡时间为4 h，提取时间为8 h，加水量为10倍量。

2.2.3.验证试验三批样品挥发油得率分别为08%、08%、08%，广藿香酮含量分别为258%、256%、258%，说明此提取条件稳定可行。

2.3.挥发油包合工艺研究

2.3.1.挥发油空白回收率考察本实验空白回收率为90%。

2.3.2.包合方法考察超声法的包合效果比电动搅拌法稍好，所以采用超声法包合结果见表6。

2.3.4.乙醇浓度考察用乙醇溶解挥发油制备包合物的包封率高于用90%乙醇和无水乙醇，因此，选择乙醇作广藿香挥发油溶剂，结果见表7。

2.3.5.乙醇用量考察将1 mL挥发油用20 mL乙醇溶解包合效果最佳，因此确定为包合条件，结果见表8。

2.3.6.正交试验结果由表9可知，A>B>C>D，因此得出结论：各因素对包合物挥发油包封率的影响大小为：挥发油与β-CD比例>β-CD浓度>包合温度>包合时间。确定最佳包合条件为A3B1C3D3，即最佳包合条件为挥发油：β-CD为1：8，β-CD浓度为8%，55℃包合2h。

2.3.7.验证试验该包合条件较稳定，结果见表10。

3 结论

本试验研究建立了香诃止泻颗粒剂挥发油提取及包合工艺。通过正交试验筛选，确定香诃止泻颗粒剂广藿香挥发油提取工艺为：浸泡4 h，加10倍水，回流提取8 h;挥发油β-环糊精包合工艺为：挥发油按1：20（V/V）比例用乙醇溶解，挥发油与β-环糊精包合的比例为1∶8，挥发油醇溶液缓慢加入8%的β-CD溶液，55 ℃超声包合2 h。本工艺条件合理稳定可控，为制剂研发医疗机构制剂奠定基础。

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