经典免疫学实验教学的一些体会

赵汉宁　吴瑗　米娜

【摘要】经典免疫学抗原抗体反应实验包括凝集反应，沉淀反应等实验，是医学本科实验教学中必不可少的内容，这些经典的免疫学实验，如授课教师能灵活采用不同授课方法，不仅有助于学生加深对医学免疫学基本概念和理论的理解掌握，而且也有助于培养学生的严谨科学思维方式，锻炼学生的动手动脑等综合能力。

【关键词】免疫学 玻片凝聚反应 对流免疫电泳 实验教学

经典免疫学抗原抗体反应实验课开展多年，授课教师如能灵活采用不同授课方法，也有助于学生加深对深奥抽象的医学免疫学理论内容的理解掌握，并且能加强学生的实验操作技能，提高动手能力，激发其学习兴趣。

一、凝集反应

经典免疫学凝集反应实验中，玻片凝集是重点操作内容之一，适合采用以教师提出问题引导，学生主导自行设计实验路线并开展操作。教师如何设置问题并引导学生开展实验呢？首先结合实际情况，每班进行分組操作，实验材料按照分组发放到台面上。带课老师首先简要讲述凝集反应概念，然后进入主题，围绕如何开展玻片凝集实验设置如下几个问题，通过玻片凝聚实验如何鉴定出斜面培养基上的未知细菌？如何设计好实验路线？应该设立哪些对照组？操作过程要注意哪些事项？观察实验结果除了凝集块还注意哪些现象？对实验结果如何分析？如何判断结果中假阳性或假阴性？提示参考实验指导教材相关内容和结合桌面上分发的试剂材料等来设计实验，实验操作结束后每一组派代表发言并把实验结果画在黑板上，然后教师针对实验进行总结，还可结合玻片凝集反应讲述抗原抗体结合反应的特点和讨论抗原抗体反应的影响因素。

教师作用主要是引导同学们提出问题，分析问题，解决问题，教师作用从台前变成幕后，尽管角色改变，但工作量不减，教师课前必须做好充分准备，对实验设计、操作注意事项、如何结果分析及讨论做到心中有底。问题提出后，同学们就开始积极活动起来，首先是同学们组内讨论如何设计实验，观察桌面上有哪些器材试剂？学生查资料的查资料，思考的思考，观察的观察，讨论的讨论，都动起来，最后大家统一确定实验方案，有些组存在疑问就跟老师及时沟通讨论，对于同学们提出问题，教师耐心解答，试管凝集实验也可通过类似教学方法开展。

二、沉淀反应

对流免疫电泳是沉淀反应的重点内容之一，要求同学们动手操作。与凝集反应教学方法有所不同，沉淀反应授课方式教师先讲解示范，然后同学们再进行实验操作。教师上课首先开始讲解沉淀反应概念，本次实验主要是凝胶内沉淀试验，对流免疫电泳为重点操作实验之一。以对流免疫电泳为例，时间安排上先讲解这部分内容。紧接着马上进行此实验操作，跑电泳期间再讲解其他的沉淀反应，如单项扩散，火箭电泳，双向扩散，免疫固定电泳等示教内容。这里特别强调教师讲解对流免疫电泳整个过程，包括从制板、打孔、加样、搭桥、电泳，都要演示操作给同学们看，边演示边讲解，关键地方特别强调。比如琼脂制板中要趁热吸取4ml琼脂，倒板一气呵成。等几分钟胶凝固才可打孔，如何才能打好孔？首先捏紧胶头把空气尽量排出来，放开胶头吸琼脂时动作要迅速。加样时，可用毛细吸管或微量进样器，保证样品加到孔；加样要加满，但不能溢出，绝不能让两个孔之间样品溢出串在一起，如何鉴定小孔加满样品呢？一方面可以从侧面观察，另一方面也可以用微量进样器定量10微升样品加入，当然前提是孔必须打好。搭桥滤纸片必须湿润才能导电，可用镊子夹滤纸片，要求尽量一次性就搭好桥。电泳前特别提醒阴阳极不能放错，抗原放阴极端，可记谐音“原因”。特别强调注意用电安全，关电才能拿出玻片观察结果。分析结果可采用提问题方式，例如出现和不出现沉淀线说明什么？沉淀线粗细又说明什么？为什么要求抗原放在阴极，抗体放在阳极？电压、缓冲液PH值对结果有何影响？利用对流免疫电泳原理并结合操作过程来分析这些问题。特别强调，教师注意控制讲解示范时间，要留给同学们足够时间来操作实验。

三、结果

四、讨论

玻片凝集反应实验操作更适合采用教师提出问题引导，同学们自行设计实验路线并完成实验操作的教学方法。首先，无菌操作等基本实验技术同学们前面做微生物实验时已经学过；其次，免疫学抗原抗体特异结合理论课已经讲过；最后，玻片凝集实验是本次实验重点内容之一，玻片凝集实验操作内容是用已知诊断血清检测未知细菌，实验设计不复杂，操作相对简单，结果容易出现，操作时间不是太久，整个实验过程从设计，操作，结果，讨论分析是完整的。另外，同学们如果做失败或还想重复做，还有时间再做。

对流免疫电泳实验为什么特别强调教师详细讲解示范然后同学再操作呢？理由如下。

首先，沉淀反应实验原理比较抽象复杂、操作要求更精细准确、对流免疫电泳注意事项比较多，相对繁琐等；其次，对流免疫电泳过程需要40～60分钟左右才能出现结果，如果实验失败没有出现预想结果，这堂课就没有时间重复做了；最后，理想的实验结果不容易出现，稍不注意某个细节，实验现象不像凝集反应结果那么明显，所以操作之前，教师要强调注意事项，那些关键细节特别指出，一定要先边示教边讲解。对流免疫电泳由老师先详细地讲解实验内容和实验步骤，十分有利于学生短时间内掌握实验注意事项等基础知识，规定时间内能顺利完成实验。

五、结语

针对经典免疫学抗原抗体反应实验，教学方法要因地制宜，根据具体的实验内容以及操作要求来采用不同的教学方法，值得一提的是，经典免疫学内容略显陈旧，课时偏少等，如何深化免疫学实验教学改革，以使学生更好地掌握相关知识并培养综合能力，值得进一步探讨。

参考文献：

[1]高兴春，郭娜，李爱连.提高医学免疫学实验课教学效果的探索及体会[J].中国免疫学杂志，2017，（02）：280.