马铃薯秦芋32的茎尖脱毒培养技术研究

杨凉花

摘要 由于马铃薯传统种植方法可引起病毒积累，因而造成品种严重退化。为明确恢复马铃薯种性的方法，本文对马铃薯秦芋32的茎尖脱毒培养技术进行了研究。结果表明，以培养基配方MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA最适宜秦芋32的茎尖组织培养。因此，可用马铃薯茎尖脱毒培养获取无病毒种薯，恢复种性，以提高产量。

关键词 马铃薯；秦芋32；茎尖剥离；培养基配方

中图分类号 S532 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）19-0080-01

马铃薯是世界上仅次于小麦、水稻和玉米的第4种主要农作物，目前大约有几千个品种。马铃薯块茎水分多，脂肪少，热量低，适合作为主食，也可作为蔬菜食用[1]。近年来，随着人们生活水平的日益提高，食品结构出现新的变化，马铃薯已成为备受人们欢迎的休闲食品[2]。

秦芋32是安康市特有的马铃薯品种，薯块呈椭圆形，传统的种植方法是用块茎作为种子，将芽眼切下用来播种。马铃薯病毒的累积性感染是引起马铃薯种性严重退化的主要原因，而通过茎尖分生组织培养获取无病毒种薯来恢复种性的方法已被广泛采用，可进行大批量原原种的繁殖，恢复种性，提高产量，改善品质[3-4]。

1 材料与方法

1.1 供试材料

以安康本地的马铃薯品种秦芋32的茎尖作为试验材料。

1.2 培养方法

1.2.1 培养条件。外植体选择健壮植株的茎尖。一般在25 ℃恒温条件下培养。光照时间为10 h/d，光照度为2 000 lx。

培养基灭菌前pH值为5.8，蔗糖浓度为20 g/L，琼脂浓度为0.68 g/L。

1.2.2 外植体消毒。于晴天早上9：00左右在地里采摘茎尖，流水条件下反复冲洗2 h后送入无菌接种间，在超净工作台上先用75%的酒精浸泡15 s，无菌水冲洗1～2次，再用0.1%升汞灭菌8～10 min。消毒时要不断搅动，使材料與消毒液充分接触，消毒时间也要控制。时间短了消毒不彻底，时间稍长了又会不同程度地影响成活率，应通过仔细观察茎尖在消毒液里颜色的变化来控制时间。最后再用无菌水冲洗4～5次，置入铺有无菌滤纸的培养皿中，吸干表面水分，备用[5-6]。

1.2.3 培养基设置。基本培养基采用MS培养基。总共设置9个培养基，分别为①MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；②MS+0.1 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA；③MS+0.1 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA；④MS+0.5 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA；⑤MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA；⑥MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA；⑦MS+1.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA；⑧MS+1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA；⑨MS+1.0 mg/L 6-BA +1.0 mg/L NAA。

1.2.4 茎尖剥离和培养。将经过消毒处理好的茎尖去除叶片，用无菌镊子夹起，放在显微镜下，用解剖针进行剥离，带有1～2个叶原基最佳。将剥离的茎尖分别接种于设计的培养基中[7-8]。

将接种茎尖的试管放入培养室内进行培养，开始观察愈伤组织萌动状况[9-10]。

2 结果与分析

接种40 d后，由观察可知，马铃薯茎尖在①号培养基中少数产生愈伤组织，绝大部分没有任何变化；在②号培养基中多数产生愈伤组织，成苗率为20%；在③号培养基中，随着 NAA含量的提高，一部分分化出芽，大部分逐渐死亡；在④号培养基中，通过愈伤组织分化出的苗极少成苗，大部分不萌动；在⑤号培养基中全部成活，通过愈伤组织成苗率在 60%以上；在⑥号培养基中大部分不生长，接种的茎尖没有变化；在⑦号培养基中，极少出现愈伤组织；在⑧号培养基中，一部分分化出苗，生长缓慢；在⑨号培养基中，少数能不通过愈伤组织直接出苗，成苗率较之前面的培养基有所下降。

3 结论与讨论

试验结果表明，以MS为基本培养基，在一定范围内添加激素，并不是浓度越高就越能提高茎尖的成活率和成苗率，浓度高反而抑制茎尖的分化生长。其中以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA为秦芋32茎尖组织培养的最宜培养基。上述9种培养基可为通过茎尖剥离获得脱毒种苗生产提供技术参考。

4 参考文献

[1] 齐恩芳，王一航，张武，等.马铃薯茎尖脱毒培养方法优化研究[J].中国马铃薯，2007，21（4）：200-202.

[2] 杨小琴，李善才，李增伟，等.马铃薯茎尖脱毒组织培养技术研究综述[J].现代农业科技，2009（22）：85-86.

[3] 吴兴泉，陈士华，王朔，等.马铃薯茎尖组织培养技术研究[J].安徽农业科学，2009，37（3）：1039-1040.

[4] 郭正昆.马铃薯茎尖剥离与试管苗培养技术[J].农业科技与信息，2008（9）：5-6.

[5] 吴玥琳，凌永胜，林金秀.马铃薯脱毒试管苗组织培养技术概述[J].农业科技通讯，2017（8）：238-241.

[6] 张海霞，曲瑞芳.马铃薯茎尖脱毒培养技术研究[J].吉林农业，2013（5）：23-24.

[7] 刘江娜，李东方，张爱萍，等.不同品种马铃薯茎尖脱毒培养方法优化技术研究[J].新疆农业科学，2014，51（2）：284-290.

[8] 王桂梅，杨林栋.马铃薯茎尖组织培养方法优化研究[J].安徽农学通报，2012，18（9）：48-49.

[9] 石晓华，孙凯.马铃薯茎尖组织培养脱毒的研究[J].吉林农业科学，2007（1）：55-56.

[10] 任凝辉，王美平，史宣杰，等.马铃薯茎尖组织培养及快速繁殖技术研究[J].河南农业大学学报，2002（3）：280-283.