对产ESBLs大肠埃希菌的临床分布特征及耐药性的研究

顾 娟

(启东市中医院检验科，江苏 南通 226200)

产ESBLs(超广谱β-内酰胺酶)大肠埃希菌是由大肠埃希菌产生的革兰阴性杆菌中的常见菌种。大肠埃希菌是一种常见的细菌，主要寄生于人体的肠道中[1]。在人体机能正常的情况下，大肠埃希菌可促进胃肠道的消化功能，维持肠道菌群的平衡[2-3]。当人体受到细菌的入侵或自身的抵抗力下降时，体内的大肠埃希菌就会成为感染源，可诱发胃肠道感染、呼吸道感染、手术切口感染、泌尿系统感染及烧伤创面感染等感染性疾病[4]。本次研究主要探讨产ESBLs大肠埃希菌的临床分布特征及耐药性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究的对象为2016年1月至2018年1月期间在启东市中医院各科室收集的198株大肠埃希菌菌株。这198株大肠埃希菌菌株的来源为血液、尿液、痰液、脓液、伤口分泌物等，且对同一患者同一类型的重复菌株进行剔除。这198株大肠埃希菌菌株的来源科室包括神经内科、心内科、肿瘤外科、呼吸内科、门诊、肾内科、胸外科、泌尿外科和重症监护室。

1.2 研究方法

对这198株大肠埃希菌菌株均进行分离和鉴定，并对被检出的产ESBLs大肠埃希菌菌株进行耐药试验。具体的方法是：1)对大肠埃希菌菌株进行分离和鉴定。⑴严格按照《全国临床检验操作规程》[5]中的要求，将这198株大肠埃希菌菌株放在哥伦比亚血琼脂平板和麦康凯平板上进行接种分离。⑵在35℃的条件下对分离出的菌株进行培养。⑶在对菌株进行培养18～24 h后，挑取单个菌落采用ATB-Expression及其附加生化试验进行种属鉴定。2)根据分离和鉴定的结果，对被检出的产ESBLs大肠埃希菌菌株的标本类型和标本来源进行分析研究。3)对被分离出的产ESBLs大肠埃希菌菌株进行耐药性试验。⑴本次研究使用的药敏纸片为Oxoid药敏纸片(ESBLs药敏纸片由杭州滨和微生物试剂有限公司生产)，包括下列各种药的药敏纸片：头孢他啶、头孢吡肟、头孢呋辛、美洛培南、亚胺培南、妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林、氨苄西林、头孢噻吩、头孢西丁、头孢噻肟、头孢唑啉、萘啶酸、氧氟沙星、四环素、头孢克肟、阿莫西林/克拉维酸、左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴坦。⑵使用由法国生物梅里埃公司生产的微生物鉴定与药敏分析仪采用MIC法对分离出的产ESBLs大肠埃希菌菌株进行药敏试验，并采用手工法对这些菌株进行K-B法药敏试验。⑶按照2016版CLSI(美国临床实验标准化研究所)[6]制定的标准对产ESBLs大肠埃希菌菌株的药敏试验结果进行判定，进行质控的菌株为大肠埃希菌ATCC25922。⑷依据2016版标准CLSI中的相关规定，对使用ATB药敏分析仪判读为ESBLs的可疑菌株进行表型确证试验。将ESBLs的可疑菌株使用K-B法对头孢他啶和头孢他啶/棒酸、头孢噻肟和头孢噻肟/棒酸进行扩散试验后，分别测量其抑菌环的直径，若该种药物的合剂抑菌环的直径减去单剂抑菌环的直径的差值≥5 mm即可判定为ESBLs对此药的耐药性为阳性[7]。

1.3 观察指标

观察这些大肠埃希菌菌株中产ESBLs大肠埃希菌菌株的阳性检出率，观察被检出的产ESBLs大肠埃希菌菌株的标本类型和标本来源及其对各类抗菌药的耐药性。

1.4 统计学方法

使用WHONET5.6对细菌的耐药性进行分析。将本次研究中的数据录入到SPSS21.0软件中进行处理，计数资料用%表示，采用χ²检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对这198株大肠埃希菌菌株进行检测的结果

在这198株大肠埃希菌菌株中，有92株产ESBLs大肠埃希菌菌株被检出，其产ESBLs大肠埃希菌菌株的阳性检出率为46.5%。

2.2 这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株的标本来源

这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株的标本来源由多至少依次为痰液(占59.7%)、尿液(占44.4%)、脓液(占40%)、血液(占35.7%)和伤口分泌物(占33.3%)。其中痰液标本是产ESBLs大肠埃希菌菌株最主要的标本来源。详见表1。

表1 这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株的来源[n(%)]

2.3 这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株在各科室中的分布情况

这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株在各科室中的分布由多至少依次为重症监护室(占66.7%)、泌尿外科(占52.5%)、胸外科(占45.7%)、肾内科((占45%)、呼吸内科(占42.9%)、肿瘤外科(占33.3%)、神经内科(占28.6%)、心内科(占22.2%)、门诊(占21.1%)。其中产ESBLs大肠埃希菌菌株的主要来源为重症监护室。详见表2。

表2 这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株在各科室中的分布情况[n(%)]

2.4 对这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株进行耐药试验的结果

这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株对青霉素类药物、喹诺酮类药物、三代头孢菌素类药物等药物均表现出较强的耐药率，其对哌拉西林/他唑巴坦等β-内酰胺酶/β-内酰胺酶抑制剂类药物及美洛培南、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦等药物的耐药率较低。亚胺培南类抗菌药对大肠埃希菌菌株及产ESBLs大肠埃希菌菌株均具有极高的抗菌活性。详见表3。

表3 对这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株进行耐药试验的结果

3 讨论

埃希菌属包括六个菌种，大肠埃希菌是其中的代表菌种。大肠埃希菌又被称为大肠杆菌，是最为常见的临床分离菌种[8-9]。在婴儿出生后的数小时内，大肠埃希菌便可进入其肠道中，并会伴随其终生[10]。大肠埃希菌属于革兰阴性杆菌，在自然界中的分布广泛，在自来水、污水、医疗器械、医院环境及人体的痰液、咽部、口腔和粪便中均可分离出来大肠埃希菌[11]。早产儿、糖尿病患者、肿瘤患者、滥用抗生素的患者、进行气管插管的患者、长期住院的患者、进行机械通气治疗的患者及长期使用免疫抑制剂的患者，大肠埃希菌均可作为条件致病菌导致其发生伤口感染、泌尿道感染、呼吸道感染、心内膜炎及菌血症等疾病[12]。大肠埃希菌是引发院内感染的主要菌种之一，尤其是产ESBLs大肠埃希菌是导致院内感染流行性爆发的重要菌种。ESBLs是β-内酰胺酶，是由丝氨酸蛋白酶衍生所得的酶，其主要是由肠杆菌科的肺炎克雷伯杆菌和大肠埃希菌产生。ESBLs由质粒介导，不仅可在细菌之间通过接合作用进行广泛的传播，也可通过空气和接触进行传播。ESBLs能够对头孢菌素类药物、青霉素类药物及单环类药物进行水解，是目前临床上革兰阴性菌中的主要耐药菌。本次研究的结果显示：1)在这198株大肠埃希菌菌株中，有92株产ESBLs菌株被检出，其产ESBLs菌株的阳性检出率为46.5%。2)痰液标本是产ESBLs大肠埃希菌菌株最主要的标本来源。3)产ESBLs大肠埃希菌菌株的主要来源为重症监护室。这是因为重症监护室患者的病情较重，其住院的时间较长，其自身的免疫水平较低，且往往使用过较多的抗生素或进行过侵入性操作治疗，易因院内交叉感染而产生产ESBLs大肠埃希菌。因此，重症监护室的临床医护人员需特别注意以下几点：⑴必须为患者合理地应用抗生素。⑵做好防控院区感染的工作。⑶严格执行无菌操作，注意手卫生及对环境的消毒和清洁等。4)这92株产ESBLs大肠埃希菌菌株对青霉素类药物、喹诺酮类药物、三代头孢菌素类药物等药物均表现出较强的耐药性，其对哌拉西林/他唑巴坦等β-内酰胺酶/β-内酰胺酶抑制剂类药物及美洛培南、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦等药物的耐药率较低。亚胺培南类抗菌药对大肠埃希菌菌株及产ESBLs大肠埃希菌菌株均具有极高的抗菌活性。革兰阴性菌主要的耐药原因是ESBLs，而临床上大量地使用第3代头孢菌素类抗菌药，使具有超广谱β-内酰胺酶基因的产ESBLs细菌通过转导、转化、转座、转移接合及整合等形式在不同的细菌中传递耐药性质粒基因，导致临床上耐药菌的流行。因此，临床上要在监督抗菌药合理应用的同时，对产ESBLs大肠埃希菌菌株进行监测，以有效地控制和预防产ESBLs大肠埃希菌在院内的传播和扩散[13]。相关的研究表明，使用亚胺培南类抗菌药治疗由产ESBLs大肠埃希菌所致的重症感染，一方面可提高患者的临床疗效，另一方面还可减少耐药菌株的产生与传播[14-15]。因此，可将亚胺培南类抗菌药作为治疗产ESBLs大肠埃希菌所致重症感染的首选药物。