大理地区屠宰生猪的戊型肝炎病毒的流行病学调查

艾志琼，李丽娟，黎 勇，闵梦雅，申元英

（1.大理大学公共卫生学院，云南大理 671000；2.大理大学基础医学院，云南大理 671000）

戊型肝炎（hepatitis E，HE）是由戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）引起的一种严重危害人类健康的急性病毒性肝炎，是全球性的公共卫生问题之一。中国是HE主要流行区之一，发病人数逐年增加〔1〕。越来越多的研究证据表明，戊型肝炎是一种新出现的人兽共患传染病，在野猪、饲养家猪、绵羊、山羊、奶牛、犬、马鹿、兔、鼠和灵长类等多种动物有感染〔2-4〕，其中猪是HEV重要的储存宿主和传染源〔5〕。因此，对猪群戊肝病毒感染及流行情况的研究具有重要意义。本研究采用血清流行病学方法对屠宰生猪血清中的HEV抗体进行检测，应用免疫组织化学染色法对152份屠宰生猪肝脏样本进行HEV相关抗原检测，同时通过苏木素—伊红染色方法（HE染色）对肝脏样本进行病理组织学观察，以了解大理地区猪群中猪戊型肝炎的感染情况，为大理地区人戊型肝炎的防治提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样本 猪血清和猪肝脏组织来自于大理地区屠宰场屠宰生猪，共收集血清标本510份；肝脏组织152份。每头猪屠宰后在开膛取出内脏时，迅速在肝叶边缘向内剪取约2 cm×3 cm的肝组织，置于10%的中性甲醛中固定。

1.1.2 试剂 HEV IgG检测试剂盒（酶联免疫法）、HEV IgM检测试剂盒（购自潍坊三维生物工程集团有限公司，批号为20150103）；一抗（Rabbit Anti-HEV-ORF3）、免疫组化检测试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血清学检测 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对血清中HEV IgG、HEV IgM检测，严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.2.2 组织病理切片的制作、苏木素—伊红染色法（HE染色）染色和免疫组织化学染色 按照常规石蜡切片制作方法制作连续切片，分别进行HE染色和免疫组织化学染色，HE染色按照常规方法进行，免疫组织化学染色严格按照试剂说明书进行操作。阴性染色对照不加一抗。

1.2.3 结果判定 HE染色组织病理学观察由病理科医生帮忙判定，免疫组织化学染色阳性反应信号为在显微镜下见棕黄色或棕红色的颗粒或团块。

2 结果

2.1 血清学检测结果 检测屠宰生猪血清510份，HEV-IgG阳性89份，阳性率17.5%，HEV-IgM阳性32份，阳性率6.3%，无HEV-IgM、HEV-IgG均阳性的标本，HEV抗体阳性率为23.7%（121∕510）。

2.2 组织病理学观察结果 在152份屠宰猪肝脏样本中，镜检发现有104份样本存在不同程度的病变，主要以嗜酸性粒细胞、嗜中性白细胞等炎性细胞浸润为主，同时存在纤维结缔组织增生，汇管区胆管增生，肝细胞变性、坏死等变化。见图1。

图1 屠宰猪肝脏组织病理学变化HE染色

2.3 HEV-Ag免疫组织化学检测结果 HEV免疫组织化学染色切片观察结果发现，152份屠宰猪肝脏样本中有96份阳性，阳性率为63.2%，其中强阳性的肝脏有28份，占样品总数的18.4%，弱阳性的有68份，占样品总数的44.7%。阳性反应信号在肝细胞胞浆和胞核均可见，以胞浆阳性而胞核阴性为主，其次是胞浆、胞核均阳性，少数细胞胞核阳性而胞浆阴性。HEV抗原阳性信号弥散分布于肝组织中，间质淋巴细胞成阴性反应。见图2。

图2 屠宰猪肝脏组织HEV免疫组织化学染色

3 讨论

近年来，大量研究发现，尼泊尔、美国、印度、加拿大、法国、日本等许多国家均有关于猪自然感染HEV的报道〔6-7〕。有研究表明食用猪肉中的HEV与病人体内HEV基因型相同，且同源率高达99.5%～100%〔8-10〕，可见HEV可跨种传播。我国大部分地区已有猪群HEV流行的报道，且感染率较高，流行情况复杂。李文贵等〔11〕报道昆明地区的屠宰生猪戊型肝炎流行率为68.9%。本研究运用ELISA方法对大理地区屠宰生猪510份血清进行HEV抗体检测，抗体阳性率为23.7%，阳性率低于其他地方的文献报道。可能的原因为：①由于地域差异和饲养方式不同，导致大理地区猪群HEV感染率低于其他地区的感染率；②使用不同厂家生产的试剂盒检测，其灵敏度不同〔4，12-13〕。

HEV抗原是诊断HEV感染的直接指标。倪勤等用免疫组织化学对HEV感染患者肝中的HEV抗原的检测，确定了HEV在肝脏中分布和对肝脏的损伤程度。李文贵等〔14〕对昆明地区68份屠宰猪肝脏进行免疫组织化学染色，结果表明83.8%的猪肝脏呈HEV抗原阳性。本研究采用兔抗人HEV多克隆抗体，运用免疫组化法对大理地区152份屠宰猪肝脏样本进行HEV-Ag检测，阳性率为63.2%（96∕152）。表明大理地区猪群HEV的感染率较高，但低于文献报道的感染率，可能与饲养环境不同有关。病理学观察结果表明，在152份屠宰猪肝脏样本中，镜检发现有104份样本存在不同程度的病变，病变率为68.4%。这与免疫组化检测阳性率接近，说明这些病变有可能是由于HEV感染导致的〔15〕。

本次调查结果显示，大理地区屠宰生猪HEV抗体阳性率低于抗原阳性率和组织病理学病变率，与李文贵等的报道相符〔11，14〕。可能是因为前期感染了HEV的猪在屠宰期血清转为阴性，有研究表明，已经免疫过HEV疫苗的猪群，仍有可能感染HEV〔16〕。

动物可作为HEV的天然寄主，经过病毒扩增以感染人类〔17〕。猪，作为我国的主要饲养家畜，与人类接触较多，二者可相互传播HEV。人类可在饲养、屠宰、加工过程中感染HEV。有研究表明，与猪接触密切的职业人群HEV感染率高于其他职业人群的感染率，且人源HEV与猪源HEV基因型相同〔9，18〕。由此，我们有理由推测猪源HEV可能是引起人类HEV感染的一个重要来源。大理地区屠宰猪血清和肝脏中HEV检出率如此之高，无疑会对人类健康构成潜在威胁，应引起相关部门的重视。同时消费者也应增强自我防护意识，食用猪肝时应彻底加热杀毒，不吃生的或半生不熟的猪肝，也是一种控制HEV感染的有效措施。