高通量基因测序产前筛查与诊断技术在高龄孕妇中的应用研究

田琪 ，黄凡华 ，章钧 ，侯红瑛 ⋆（通讯作者）

（1.中山大学附属第三医院 产科，广东 广州 510630；2.中山大学附属第三医院 检验科，广东 广州 510630）

0 引言

唐氏综合征也称为21-三体综合征(trisomy 21 syndrome)，和孕妇的年龄存在密切相关性，其发病的风险性会随着孕妇年龄加大而提升。中国《母婴保健法》中提及对高龄孕妇需要开展羊水诊断，然而，因为羊水诊断具有流产风险、感染风险及损伤胎儿风险等，一些孕妇和其家属存在一定的担忧，可能会拒绝接受羊水诊断，最终引发导致唐氏综合征患儿的出生[1]。本文实施研究的资料为在本医院接受诊断的6400例高龄孕妇（时间段是2015年2月至2018年5月），研究及分析将高通量基因测序的产前筛查以及诊断技术应用于高龄孕妇中的诊断价值及意义。

1 资料与方法

1.1 基础资料

本文将在本医院接受诊断的6400例高龄孕妇纳入分析资料，选取时间是2015年2月至2018年5月，予以回顾分析，年龄在35-46岁，平均（39.85±2.45）岁；孕周13到25+6周，平均（21.12±2.07）周，其中，直接要求羊水诊断的孕妇有3385例，先要求接受无创DNA产前检测间接羊水诊断的孕妇有3015例。纳入标准：年龄在35周岁及以上的孕妇；高龄孕妇与其家属都签字知情同意书，得到医学伦理会相关人员的批准及准许。排除标准：年龄在35周岁以下的孕妇；不愿意签字知情同意书或是不愿意参与本研究的孕妇。

表1 高龄孕妇采取不同检测方法的染色体异常检出总计率（n，%）

1.2 方法

（1）采集全部高龄孕妇的静脉血，予以无创DNA检测，对DNA检测结果呈现阳性的孕妇再开展羊水细胞培养处理和染色体核型分析予以确诊。

（2）羊水细胞培养后予以染色体核型分析的方法：对直接要求羊水诊断的孕妇和无创DNA产前检测结果呈现阳性的孕妇分别抽取20mL羊水进行细胞培养，并开展染色体核型分析予以确诊。

（3）随访全部高龄孕妇，将采取羊膜腔穿刺术抽羊水开展细胞培养处理和予以染色体核型分析的结果作为金标准，统计诊断结果。

1.3 相关指标

观察并分析高龄孕妇采取不同检测方法的染色体异常检出情况。

1.4 统计学分析

2 结果

得到的数据呈现，先要求接受无创DNA产前检测间接羊水诊断的高龄孕妇中，检出阳性共37例，通过羊水诊断得以确诊有30例，生后随访其外周血染色体检查得以确诊有7例，其中，21-三体有20例，18-三体有10例，47,XXY有7例；直接要求羊水诊断的高龄孕妇中，21-三体有19例，18-三体有9例，47,XXY有7例。高龄孕妇先要求接受无创DNA产前检测间接羊水诊断的染色体异常检出总计率（1.23%）与直接要求羊水诊断（1.03%）对比，前者略高，不过无显著数据差异，P＞0.05，未体现数据之间的统计学意义。

3 讨论

多数出生缺陷是因遗传因素而引发的，最为常见的是染色体的非整倍体异常，主要为21、18、13、X、Y染色体的非整倍体异常情况。对孕妇开展产前诊断有助于减少异常胎儿的出生，羊水诊断是临床常用的检查方式。本文数据展示，3385高龄孕妇接受直接要求羊水诊断，检出35例染色体异常。虽然羊水诊断对胎儿染色体的检测比较全面，但是，羊水诊断需要开展侵入性穿刺操作，易导致出血或是感染情况，提升流产风险或是畸形风险。

无创DNA检测是抽取孕妇的外周静脉血，采取高通量基因测序方法对孕妇血浆内胎儿的游离DNA片段开展检测，将胎儿的染色体倍性情况检测，和常规的唐氏筛查方法相对比，无创DNA检测方法具有比较低的假阳性情况[2-3]。本文相关研究资料呈现，3015例高龄孕妇接受高通量基因测序，检出37例阳性（染色体异常），且均通过羊水诊断或是生后随访其外周血染色体检查确诊，都和检测结果相符合。

高通量基因测序是无创性的DNA检测方法，其对21、18、13等一些常见的染色体数目异常情况检出敏感度及特异度均比较高[4]，可以用作接近诊断级别的一种筛查手段，能够将大部分不必要的羊水穿刺操作避免或减少，不过，高通量基因测序主要针对常见的21、18、13-三体开展检测，可能会将其他染色体异常情况漏检，而且，对于其检出的染色体异常情况，一般也需要开展羊水穿刺进行确诊[5-6]。所以，高通量基因测序仅为更高级别的一种产前筛查方式，可以看做是传统产前筛查以及诊断技术的重要补充，但其并无法将羊水诊断取代[7-8]。

综上所述，对高龄孕妇采用高通量基因测序的产前筛查以及诊断技术展示重要诊断价值，可以为拒绝接受羊膜腔穿刺术或是具有羊水诊断相关禁忌证的高龄孕妇提供新的一种产前诊断方式，呈现进一步推广应用的意义和优势。