若尔盖县牦牛轮状病毒和冠状病毒感染的血清学监测

泽旺塔 ，俄么当周 ，达瓦塔 ，俄周王么 ，尚吉措 ，岳华

（1.四川省若尔盖县农业畜牧和水务局，四川 若尔盖 624500；2.西南民族大学生命科学与技术学院，四川 成都 610041）

腹泻是导致犊牛生长不良和死亡的常发病，牛轮状病毒（BRV）和牛冠状病毒（BCoV）是常见的腹泻病原[1]，BRV和BCoV在我国牛群中的感染比较普遍，危害严重。若尔盖县位于青藏高原东部边缘地带，是全国最重要的草原牧区之一，也是亚洲最好的天然牧场之一[2]。牦牛养殖是若尔盖县畜牧业的支柱产业，但犊牛腹泻一直是制约当地牦牛业健康发展的一大问题，本研究旨在了解当前四川省若尔盖县牦牛群中BRV和BCoV的感染情况，为牦牛腹泻的防控提供参考。

1 材料

1.1 样本采集及处理 2017年8～10月从四川省若尔盖县达扎寺镇（32份）、阿西乡（35份）、麦溪乡（29份）、降扎乡（30份）、嫩洼乡（35份）、占哇乡（28份）、巴西乡（29份）、红星乡（30份）、阿西茸乡（28份）9个乡镇无菌采集牦牛（未接种过任何BRV、BCoV疫苗）血清样本276份，4℃倾斜静置过夜，5000r/min离心10min，分离血请，-80℃保存备用。

1.2 主要试剂与仪器 BCoV、BRV间接ELISA抗体检测试剂盒；ELX 800酶标仪，各量程微量移液枪。

2 抗体检测

采用间接ELISA抗体检测试剂盒分别对276份牦牛血清进行BRV和BCoV特异性抗体检测，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。每次检测分别设置2个阴性和2个阳性对照，并计算阴性孔OD平均值NCX¯和阳性孔OD平均值PCX¯。试验成立的判断标准为（PCX¯-NCX¯）≥0.5 且 NCX¯≤0.3，如果试验无效则应重新检测。样本S/P=（OD样品-NCX¯）/（PCX¯-NCX¯）。当S/P值≥0.4，则判为抗体阳性；当S/P值＜0.4，则判为抗体阴性。

3 结果及分析

3.1 BRV抗体检测结果 9个乡镇共计276份牦牛血清样本中，有274份呈BRV阳性，平均阳性率为99.28%（表1）。其中阿西茸乡的阳性率最低，为92.86%（26/28），其余8个乡镇的阳性率均为100%。表明若尔盖县9个乡镇牦牛BRV的感染率都高。

表1 9个乡镇BRV、BCoV检测结果

3.2 BCoV抗体检测结果 276份血清样本中共检测出270份BCoV阳性血清，平均阳性率为97.83%（表1）。达扎寺镇、阿西乡、麦溪乡、巴西乡、红星乡、阿西茸乡的阳性率均为100%；隆扎乡最低，为86.67%（26/30）；其次是占哇乡（96.43%）、嫩洼乡（97.14%）。表明若尔盖县9个乡镇牦牛BCoV的感染率均较高。

3.3 BRV、BCoV混合感染情况 有268份血清同时检出了BRV和BCoV特异性抗体，平均混合感染率为97.1%，其中隆扎乡的混合感染率最低（86.67%）。

4 结论与分析

BRV引起的腹泻常见于新生犊牛，以1～10日龄最为易感，在牦牛中传播已有30余年[5]。周芳等[6]采用RT-PCR方法分别对来自西藏、青海、云南、四川的234份牦牛腹泻样本进行检测，结果得出阳性率分别为60%、95%、90%、85.19%。李凡等[7]利用荧光定量RT-PCR方法检测川西北14个牧场的腹泻样本，得出BRV阳性率为98.86%，可见BRV在牦牛群中广泛流行。

BCoV也是引起犊牛腹泻的重要病原，还可引起成年牛冬痢和呼吸道疾病综合征[8]，该病毒对牦牛同样易感。1990年姚火春等[9]证实BCoV存在于牦牛群中。2015年石琴等[10]对天山牦牛群抽查时发现，冠状病毒（BCoV）阳性率达到100%。这些资料都表明BCoV在牦牛中的感染已经很普遍。疫苗免疫是防控BRV和BCoV的有效手段，但国内目前还没有商品化的BRV和BCoV疫苗。因此，有必要加快研制BRV和BCoV疫苗，以有效防控犊牦牛腹泻。

本研究结果表明，BRV、BCoV两种病毒感染在若尔盖县的9个乡镇均存在，BRV阳性率为92.86%～100%，BCoV阳性率为86.67%～100%，混合感染率为86.67%～100%。由于本次试验所选牦牛均未免疫过任何疫苗，故特异性抗体阳性可视为病原体自然感染产生。BRV和BCoV在若尔盖县感染严重，且混合感染现象突出，与何美琳等[3]的调查结果相似。BRV和BCoV混合感染，可加重病情，病牛死亡率高达50%～100%[4]。若尔盖县犊牦牛腹泻危害严重，当地应尽快制定防控BRV和BCoV的有效措施。