复方扶正养肝颗粒定性鉴别研究

陈凌云 陈坤 王华宁

摘要：目的 建立复方扶正养肝颗粒的定性鉴别方法。方法 采用薄层色谱法对处方茵陈、白芍、郁金、甘草进行定性鉴别。结果 薄层鉴别色谱斑点清晰、专属性强，阴性对照无干扰。结论 该方法专属性强、重现性好、操作简便，可用于复方扶正养肝颗粒的定性鉴别。

关键词：复方扶正养肝颗粒;薄层鉴别;茵陈;白芍;郁金;甘草

中图分类号：R286.0 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2018）08-0075-03

扶正养肝汤由黄芪、白术、柴胡、白芍、土茯苓等11味药物组成，具有扶正固本，清热利湿、解毒化浊之功效。该方为云南省中医医院脾胃病科用于治疗病毒性肝炎的协定处方，前期临床及实验研究表明，扶正养肝方对病毒性肝炎患者肝功能具有较好改善作用，明显降低Con A诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT和AST，下调细胞因子IFN-γ表达[1-2]，其作用机制可能与下调Fas mRNA基因表达，抑制肝细胞凋亡有关[3]。该方原为汤剂，为使患者服用方便，便于携带，本研究拟将其开发成医疗机构制剂。为更好的对该制剂进行质量控制，本研究采用薄层色谱法，建立了扶正养肝颗粒中茵陈、白芍、郁金、甘草的薄层鉴别方法，为扶正养肝的的质量标准的完善、充实提供了依据。

1 仪器与试药

KMDOS-SK250H超声仪（上海科导超声仪器有限公司），SartoriusBT25S电子分析天平（Xs25A瑞士普利赛斯仪器公司，d=0.00001 g）;双槽展开缸（20cm × 10cm）;硅胶G薄层板;茵陈对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120950-201608）;白芍对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120905-201109）;郁金对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120949-201407）;甘草对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120904-201519）;院内自制扶正养肝颗粒（编号：20170801、20170802、20170803）。

2 方法与结果

2.1 茵陈薄层鉴别[4-5] 取本品粉末5 g，加石油醚30 mL，超声处理10 min，滤过，弃去石油醚，药渣挥干，加稀盐酸1 mL与乙酸乙酯30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材2 g及缺茵陈药材的阴性对照样品5 g，同法制成对照药材溶液及阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取阴性对照溶液和供试品溶液各20 μL，对照品溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）为展开剂，展开，取出，晾干，氨熏后置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，且阴性无干扰。结果见图1。

1.阴性对照;2.茵陈对照药材;3.扶正养肝颗粒 20170801;4.扶正养肝颗粒 20170802;5.扶正养肝颗粒 20170803;吸附剂：硅胶G;展开剂：甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）;显色方法：氨熏;检视条件：紫外灯下365nm

图1 郁金TLC色谱图

2.2 白芍薄层鉴别[6-8] 取本品粉末5 g，加乙醇25 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品5 g，同法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，且阴性无干扰。结果见图2。

1.白芍对照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸（40：5：10：0.2）;显色条件：5%香草醛硫酸溶液;检视条件：日光

图2 白芍TLC色谱图

2.3 郁金薄层鉴别[9-10] 取本品粉末5 g，加石油醚（60-90℃）50 mL，超声10 min，过滤，滤液挥干，残渣加甲醇2mL使

1.郁金对照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）;显色条件：10%硫酸乙醇溶液;检视条件：紫外灯下365nm

图3 郁金TLC色谱图

溶解，作为供试品溶液。另取郁金药材2 g，加石油醚（60-90℃）20 mL，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品5 g，同法制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取对照品溶液20 μL、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，点于同一硅胶G板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，阴性无干扰。结果见图3。

2.4 甘草薄层鉴别[11] 取本品粉末1 g，加乙醚40 mL，加热回流1 h，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取阴性样品1 g，同法制得为阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015版四部附录0502）试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色淸晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，顯相同的颜色荧光斑点，且阴性对照无干扰。

1.甘草對照药材;2.扶正养肝颗粒 20170801;3.扶正养肝颗粒 20170802;4.扶正养肝颗粒 20170803;5.阴性对照;吸附剂：硅胶G板;展开剂：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）;显色条件：10%硫酸乙醇溶液;检视条件：紫外灯下365nm

图4 甘草TLC色谱图

3 讨论

本品由黄芪、茵陈、牡丹皮、土茯苓等11味药组成，成分较为复杂，本次质量标准研究中对黄芪、茵陈、牡丹皮、土茯苓、垂盆草、甘草、郁金、丹参、薏苡仁、牡丹皮等10味药的TLC鉴别方法进行了研究，其中垂盆草、丹参、牡丹皮、薏苡仁、土茯苓未能找到合适的TLC鉴别方法，而黄芪因测定了其含量，因此，选取了茵陈、白芍、郁金、甘草4味药的进行TLC鉴别。在茵陈的薄层鉴别中，先后采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：6）、甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：3：0.2）、石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-丙酮（6：3：0.5）为展开系统，但结果显色供试品斑点不明显且不清晰，或阴性有干扰，经摸索，用调整后的方法结果斑点清晰、重复性好。

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（收稿日期：2018-03-19）