肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制研究

张倩 庞立强 毕晓琴

【摘要】目的 分析肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制。方法 从我院收治的呼吸道感染患者的鼻咽部分分离出红霉素耐药链球菌176株进行研究，分别用K-B纸片扩散法和E试验检测其对于抗菌药物的敏感度，然后用双纸片法测定耐药表型，最后用PCR技术扩增菌株耐药基因和转座子整合酶基因。

结果 通过对176株红霉素耐药链球菌进行检测，结果显示ermB耐藥基因的检出率为90.91%，mefE耐药基因的检出率为37.50%，mefA耐药基因的检出率为0%，96.59%的红霉素耐药菌株中存在intTn转座子整合酶。mefE（-）ermB（+）和mefE（+）ermB（+）的耐药基因组合占比为91.48%，耐药表型为cMLSB，mefE（+）ermB（-）的耐药基因组合占比为8.52%，耐药表型为M型。结论 我院分离的红霉素耐药链球菌中，耐药性以ermB介导的cMLSB表型最为显著，转座子可能与耐药基因水平转移有关。

【关键词】肺炎链球菌；大环内酯类抗生素；耐药机制

【中图分类号】R446.5 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2018.28..01

肺炎链球菌是导致中耳炎、菌血症、脑膜炎、儿童呼吸道感染的主要病原菌，随着大环内酯类抗生素的使用，越来越多的肺炎链球菌产生了耐药性，根据研究显示，肺炎链球菌耐药机制的主要基因是mef基因与ermB基因，且主要位于接合性转座子[1]。为了更好的研究肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制，本文特分离出了176例红霉素耐药菌株进行研究，现将主要结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

从我院收治的呼吸道感染患者的鼻咽部分分离出红霉素耐药链球菌176株进行研究，均经Omin血清和optochin纸片鉴定。

1.2 方法

首先，对分离出的176株红霉素耐药链球菌用K-B纸片扩散法和E试验进行检测，以测定其对于抗菌药物的敏感度。其中，氧氟沙星、克林霉素、复方磺胺甲噁唑、四环素、氯霉素、苯唑西林等采用K-B纸片扩散法，头孢曲松、头孢呋辛、头孢克洛、红霉素、阿莫西林-克拉维酸、青霉素等采用E试验检测，结果按抗生素敏感试验标准进行判断。

耐药表型的测定采用克林霉素、红霉素双纸片法进行测定，若两个纸片上均未出现抑菌圈，则表示组成耐药组合，红霉素耐药，克林霉素有缺损表示cMLSB型耐药表型，红霉素耐药，克林霉素敏感表示M型耐药表型。

耐药基因的检测方法为：先进行染色体DNA提取，然后进行PCR技术扩增，最后在94℃的条件下进行扩增反应。

2 结 果

通过对176株红霉素耐药链球菌进行检测，结果显示ermB耐药基因的检出率为90.91%，mefE耐药基因的检出率为37.50%，mefA耐药基因的检出率为0%，96.59%的红霉素耐药菌株中存在intTn转座子整合酶。mefE（-）ermB（+）和mefE（+）ermB（+）的耐药基因组合占比为91.48%，耐药表型为cMLSB，mefE（+）ermB（-）的耐药基因组合占比为8.52%，耐药表型为M型。

3 讨 论

导致儿童发生获得性肺炎的主要病原体是肺炎链球菌，近几年来，随着抗生素的使用，越来越多菌体产生了耐性性，这对疾病的治疗产生了非常大的阻碍。肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制主要为核糖蛋白L4、L22变异，23SrRNA变异、主动外排机制显著增强，核糖体靶位点改变等等[4]。MLSB耐药表型的产生主要是由于ermB耐药基因编码核糖体的23SrRNA甲基化酶，也就是链阳菌素B、林克酰胺类、大环内酯类产生交叉耐药，由于ermB耐药基因的上游序列编码是不同的，又可以将MLSB耐药表型分为组成型和耐药型，诱导型对克林霉素非常敏感，当大环内酯类抗生素存在时可以被激活，从而对外表现出对克林霉素的耐药性。mef编码的主动排外系统可以诱导M型耐药表型，也就是说对于14元环、15元环内的大环内酯产生低水平耐药，对16元环的链阳菌素B、克林霉素、大环内酯类比较敏感。除此之外，红霉素耐药菌株的耐药基因和耐药表型随地区的不同而有所差异[3]。

在本次研究中，通过从呼吸道感染患者鼻咽部分分离出的176株红霉素耐药链球菌进行研究，发现耐药性以ermB介导的cMLSB表型最为显著，转座子可能与耐药基因水平转移有关，这与张泓，吴文娟，李万华的研究一致，进一步说明肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制与核糖蛋白L4、L22变异，23SrRNA变异、主动外排机制显著增强，核糖体靶位点改变有关。

参考文献

[1] 吴文娟，张 泓，蒋燕群，等.肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药及传播机制研究[J].中国感染与化疗杂志，2006，（2）：85-88.

[2] 张 泓，吴文娟，李万华，等.肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药机制研究[J].中国感染与化疗杂志，2008，（1）：15-19.

[3] 康 悦，吴菊芳.肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药状况及耐药机制研究进展[J].中国感染与化疗杂志，2009，（6）：474-477.

[4] 宋 琳，瞿介明，何礼贤，等.肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药情况及耐药基因研究[J].中国感染与化疗杂志，2006，（2）：127-129.

本文编辑：刘欣悦