红藤灌肠液水煎剂与免煎颗粒剂的体外抑菌效果比较

江 莉 李玥婷 胡 君 李 渊 陈 会

1.江西省妇幼保健院药剂科，江西南昌 330006；2.江西省人民医院检验科，江西南昌 330006

随着中药研究的不断深入，传统中药“饮片入药，临用煎汤”的方法，已表现出使用不便、患者依从性差等特点。中药免煎颗粒是对中药汤剂剂型改革的一种新尝试，有文献报道[1]，水煎剂的药理活性不等于免煎颗粒配方之和，往往大于免煎剂药理活性。同时，也有研究表明[2-3]，中药免煎颗粒和传统中药水煎剂的疗效基本一致。由此可见，目前对中药免煎颗粒与中药水煎剂的药用效果存在争议，两者药用效果是否一致，有待于进一步研究。本研究通过研究两种不同中药剂型的抑菌作用，探讨红藤灌肠液免煎颗粒剂是否可替代其中药饮片，为中药颗粒剂型的应用提供科学理论依据，现报道如下。

1 材料

1.1 受试药物

以本院红藤灌肠液协定方为基础，主要为红藤（Sargentodoxae Caulis）、紫花地丁（Violae Herba）、蒲公英（Taraxaci Herba）、鸭跖草（Commelinae Herba）、败酱草（Herba Patriniae Cum Radice）、苦参（Sophorae Flavescentis Radix）。中药饮片购自江西省妇幼保健院中药房，经该院副主任中药师朱俊老师鉴定，符合《中国药典》的规定。免煎颗粒购自华润三九医药股份有限公司，红藤（批号 1701001S）、紫花地丁（批号1706001W）、蒲公英（批号1607002W）、鸭跖草（批号1508001W）、败酱草（批号 1702001S）、苦参（批号 1707001W）。

1.2 培养基与仪器

MH培养基；真菌药敏培养基（由温州康泰）；Phoenix 100临床细菌鉴定系统（BD公司）；MCO-20A/C培养箱（sanyo公司），BSC-1000ⅡA2 生物安全柜（AIRTECH苏净安泰公司），LMQ.C-80E立式灭菌器（山东新华医疗器械有限公司）。

1.3 实验菌种

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色假丝酵母菌，均由江西省人民医院临床微生物实验室从本院临床感染患者标本中分离得到，经过形态学和生化学鉴定。

1.4 菌种质量控制

ATCC 25923金黄色葡萄球菌、ATCC25922大肠埃希菌、ATCC 27853铜绿假单胞菌、ATCC 90028白色假丝酵母菌作为质控菌株，对上述过程进行全程质控。

2 方法

2.1 受试原液的制备

2.1.1 红藤灌肠液水煎剂 称取中药饮片红藤30 g，紫花地丁、蒲公英、鸭跖草、败酱草各15 g，苦参10 g，以上六味，加水1000 ml煎煮3次，每次煮沸半小时，合并3次煎液，滤过，浓缩至50 ml。生药含量为2 g/ml。

2.1.2 红藤灌肠液免煎颗粒剂 称取相当于临床使用量的免煎颗粒红藤30 g，紫花地丁、蒲公英、鸭跖草、败酱草各15 g，苦参10 g，无菌蒸馏水50 ml，充分溶解。生药含量为2 g/ml。

2.2 药物纸片的制备

将红藤灌肠液水煎剂和免煎颗粒剂原液用灭菌蒸馏水进行稀释，使其生成生药含量分别为2.00 g/ml、1.00 g/ml、0.50 g/ml、0.25 g/ml的 4 种不同浓度药液。取以上药液加入含无菌滤纸片的小瓶内，每片含量20 μl（在无菌条件下，将直径=6 mm的圆滤纸片浸入药液中，取出自然风干）。

2.3 菌液的配制

用接种环或无菌棉签挑取琼脂平板上4～5个形态相同的菌落，用生理盐水调菌液浓度至0.5麦氏比浊标准。

2.4 培养基的配制

称量MH半成品干粉，以定量蒸馏水混合，121℃下高压灭菌15 min，降温至56℃～60℃倾倒至MH琼脂平板（英国OXCID公司）。

2.5 纸片扩散法

用无菌棉拭蘸取已制备好的菌液，均匀涂布接种于MH琼脂平板表面，涂接3次，置室温干燥3～5 min，接种环密集划线接种均匀，每种细菌接种4个平板。用无菌镊子将含药纸片贴于含菌琼脂表面，生理盐水滤纸片为阴性对照，最后，将平板经室温放置15 ml，再置37℃恒温培养箱内培养18～24 h后测量抑菌圈的直径，观察结果。重复试验3次。

2.6 判断标准

纸片扩散法：使用游标卡尺在相互垂直的两个方向测量抑菌圈直径，取平均值。

2.7 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

本研究的体外抑菌实验中，红藤灌肠液水煎剂与免煎颗粒剂对金黄色葡萄球、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均存在抑菌圈，有一定抑菌作用，但对白色假丝酵母菌均无明显抑菌圈，未见抑菌作用。

红藤灌肠液水煎液与免煎颗粒剂的体外抑菌作用相似，然而各浓度红藤灌肠液水煎剂对于金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径大于免煎颗粒剂，差异有统计学意义（P＜0.05）；各浓度红藤灌肠水煎液对铜绿假单胞菌的抑菌圈直径小于红藤灌肠免煎颗粒剂，差异有统计学意义（P＜0.05）（表 1）。

4 讨论

现代药学书中记载，红藤能“抗菌消炎，消肿散结，理气活血，祛风杀虫”，治阑尾炎、月经不调、经闭腹痛等[4]。红藤灌肠液是我院在中药协定处方基础上，选取红藤、紫花地丁、蒲公英、鸭跖草、败酱草、苦参等中药组成的方剂，此方剂经过长期临床观察，对急、慢性盆腔炎、附件炎、炎性包块、尿路感染等所致的腰痛、小腹痛有较好的临床疗效[5]。

本研究结果显示，红藤灌肠液水煎剂与免煎颗粒剂对白色假丝酵母菌均无抑菌作用。红藤灌肠液水煎剂对于金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径大于免煎颗粒剂，差异有统计学意义（P<0.05）；红藤灌肠免煎颗粒对铜绿假单胞菌的抑菌圈直径大于水煎液，差异有统计学意义（P<0.05）。提示红藤灌肠水煎液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌效果优于免煎颗粒，红藤灌肠免煎颗粒对铜绿假单胞菌的抑菌效果优于水煎液。从而表明，虽然红藤灌肠液水煎剂与免煎颗粒剂的体外抑菌作用相似，但抑菌效果仍然存在差异。因此，应考虑在煎煮过程中，药物成分之间可能产生相互作用，从而导致抑菌效果不一致。

表1 不同浓度和剂型药物纸片扩散法中形成抑菌直径的比较（mm，±s）

表1 不同浓度和剂型药物纸片扩散法中形成抑菌直径的比较（mm，±s）

“-”表示无明显抑菌圈

组别 金黄色葡萄球菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌白色假丝酵母菌灌肠液水煎剂浓度2.00 g/ml浓度1.00 g/ml浓度0.50 g/ml浓度0.25 g/ml免煎颗粒剂浓度2.00 g/ml浓度1.00 g/ml浓度0.50 g/ml浓度0.25 g/ml阴性对照组（生理盐水）10.03±0.32 9.20±0.17 8.57±0.29-10.60±0.36 7.26±0.25--7.80±0.03 7.54±0.05 6.48±0.11-8.67±0.31 7.03±0.06 6.76±0.35-------9.68±0.37 9.03±0.37 7.26±0.05--t灌肠水煎剂与免煎颗粒剂浓度 2.00g/ml比较值P 灌肠水煎剂与免煎颗粒剂浓度 2.00g/ml比较值13.20<0.0001 t灌肠水煎剂与免煎颗粒剂浓度 1.00g/ml比较值P 灌肠水煎剂与免煎颗粒剂浓度 1.00g/ml比较值5.33 0.006 20.55<0.0001 t灌肠水煎剂与免煎颗粒剂浓度 0.50g/ml比较值P 灌肠水煎剂与免煎颗粒剂浓度 0.50g/ml比较值------8.75 0.001 6.76 0.002 11.15<0.0001---- -----------

根据相关文献研究[6-15]，方剂中单味药鸭跖草有抗炎作用，而红藤、紫花地丁、蒲公英、败酱草、苦参均具有一定的抑菌作用。目前发现，红藤、蒲公英、苦参、败酱草、紫花地丁对金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，紫花地丁对铜绿假单胞菌有抑菌作用，蒲公英对大肠埃希菌、白色念珠菌均有很强的抗菌作用。但是，本研究结果提示，利用纸片扩散法，红藤灌肠液水煎剂及免煎颗粒对白色假丝酵母菌均未显示抑菌作用，结果和相关报道不一致[16]，可能与抑菌实验方法不同有关。因此，检测中药饮片对真菌的抑菌作用，应注意实验方法的合理选择。

目前研究中药的体外抑菌作用实验方法很多[17-18]，纸片扩散法操作简单，结果直观，但对药物浓度要求较高，并不能精确定量，只适宜作为初筛实验。后续将以此研究抑菌结果为基础，明确红藤灌肠液协定方中各味单一中药的抑菌效果。

综上所述，红藤灌肠液水煎剂与其免煎颗粒剂抑菌效果存在一定的区别。因此，中药免煎颗粒仍需要加大研究力度，不断改进工艺，从而提高中药免煎颗粒的药用效果。