0.01%硫酸阿托品滴眼液的制备及质量标准研究

夏爱波 拜如霞 汪静 李建和

【摘 要】

目的：建立 0.01 %硫酸阿托品滴眼液的制备工艺及其质量控制方法。方法：取硫酸阿托品与辅料制成浓度为 0.01 %的微量硫酸阿托品滴眼液，以乙腈-庚烷磺酸钠磷酸盐溶液（含 0.05 mol·L-1 磷酸二氢钾溶液和 0.0025 mol L-1庚烷磺酸钠溶液，用磷酸调节pH 至3.9）（18：82）为流动相进行洗脱，用高效液相色谱法测定硫酸阿托品的含量。结果：所得制剂为无色澄明液体，硫酸阿托品检测浓度线性范围为 20～2000μg·mL-1 （r =0.9999），平均回收率为102.32% （RSD =0.91%，n =9）。结论：该制剂制备工艺简单，含量测定方法简便、准确，质量可控。

【关键词】 硫酸阿托品；滴眼液；制备；高效液相色谱法

【中图分类号】R969.4 【文献标志码】

B 【文章编号】1005-0019（2018）16-085-01

1 仪器和试药

LC -20AT高效液相色谱仪，包括 SPD -20A 检测器 、 CLAS S -VP6.12 SP1 色谱数据系统 、SPD-20A 分光光度计 （日本岛津公司）；ME204E 电子分析天平 （梅特勒-托利多仪器有限公司）；PHS-3C精密PH计（上海雷磁仪器厂）；STY渗透压摩尔浓度检测仪（北京汉柏科创仪器厂）。

硫酸阿托品对照品 （中国药品生物制品检定所，批号：715 -20001）；硫酸阿托品 （生產企业：江西立信药业有限公司；批准文号：国药准字H36021249）；水为注射用水，乙腈以及庚烷磺酸钠盐两者为色谱纯，其他相关试剂皆为分析纯 。

2 处方工艺优化

在确定阿托品滴眼液主药规格为100 ug·mL-1的基础上，对本处方工艺进行优化。

2.1 抑菌剂的选择及用量确定 眼用制剂的pH值范围一般是 5.5～7.8，过高或过低都会使眼部有刺激感，因而限定了部分抑菌剂的使用范围。设计眼用制剂处方时，pH值的变化对抑菌剂的效力影响很大，如苯扎氯铵在pH 4～10时具有抗菌活性，并随pH值增高而增强；羟苯乙酯适宜的pH值范围很大，且具有广谱抗菌活性，但其水溶液只在pH 3～6范围内热压灭菌而不发生降解；苯甲醇在pH 5以下时活性最强，pH 8以上时几乎没有活性；三氯叔丁醇在pH高5.5时活性及稳定性下降。pH不仅影响抑菌剂的活性，而且可能影响其稳定性[4]。由于本制剂的PH值范围为6.0～7.5，所以，选用苯扎氯铵作为抑菌剂较为合适。苯扎氯铵的用量一般为0.005～0.02%[5]，由于本制剂主要用于青少年近视且需长期使用，为尽可能减少其毒性，因此选择最低剂量0.005%作为抑菌剂用量。同时为了增强抑菌剂的杀菌力，合用0.05%EDTA作为辅助抑菌剂，以达到1时内重新消灭污染的细菌和霉菌的目的[4]。

2.2 抑菌剂不同流动相选择不同 选用羟苯乙酯作为抑菌剂，由于阿托品和羟苯乙酯的溶解性不同，使得流动相在选择中很难兼顾两者，必须进行梯度洗脱，才能达到出峰快，峰形好的效果，选用苯扎氯铵作为抑菌剂，不需进行梯度洗脱就能达到快速分离效果，如表1、2所示。

3 处方与制备

3.1 处方 硫酸阿托品 0.01 g，氯化钠 0.31g ，硼酸 1.17g，硼砂 0.11g，苯扎氯铵 0.005%，EDTA-2Na 0.05%，注射用水加至100mL。

3.2 制备 称取适量硼酸、硼砂以及氯化钠，对其进行充分的搅拌并达到完全溶解的状态，冷却后将硫酸阿托品以及苯扎氯铵加入到溶液中，继续进行充分的搅拌并达到完全溶解的状态，然后过滤溶液，加注射用水于自滤器之上，达到 100mL，搅拌均匀，使用流通蒸汽（100 ℃）灭菌 半小时，最后进行无菌分装。

4 质量控制

4.1 性状 澄明无色液体。

4.2 鉴别

4.2.1 托烷生物碱类的鉴别反应[6]

由于用药典法进行鉴别其结果为阴性，故此改进了对托烷生物碱类的鉴别方法。取供试品约50ml（约相当于硫酸阿托品 5mg）置分液漏斗中，加氨试液碱化（pH值约为8），用氯仿30ml分次提取，合并氯仿液，待氯仿挥干后按药典法操作。残渣显托烷生物碱类的鉴别反应。

4.2.2 本品显硫酸盐的鉴别反应[6]。

4.3 检查

4.3.1 PH值 在6.0～7.5之间，其它要与《中国药典》2015版四部通0631相符合符合[6]。

4.3.2 渗透压 为285～310 mOsM，其它应符合《中国药典》2015版四部通则0632[6]。

4.3.3 无菌 取本品依法检查应符合《中国药典》2015版四部通则1101[6]。

5 含量测定

5.1 色谱条件及系统适用性试验 5C18-MS-Ⅱ（5μm ，4.6ID×250 mm）；流动相：乙腈-庚烷磺酸钠磷酸盐溶液（含 0.05 mol·L-1 磷酸二氢钾溶液和 0.0025 mol L-1庚烷磺酸钠溶液，用磷酸调节pH 至3.9）（18：82）；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：210nm；进样量：20μL。取20uL对照品溶液，将其注入液相色谱仪，理论板数应不低于4000（按硫酸阿托品峰计），硫酸阿托品毗邻杂质峰之间的分离度要与相关要求相一致。

5.2 溶液的制备

5.2.1 供试品溶液 按处方配制0.01%硫酸阿托品滴眼液，用水溶解后加水定容至刻度，混匀，得到含硫酸阿托品100μg·mL-1 的供试品溶液。

精密量取本品适量，即得。

5.2.2 对照品储备液 精密称取在 120 ℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品0.0203g，置于100 mL量瓶中，用水溶解后加水定容至刻度，混匀，得浓度为203μg·mL-1的阿托品对照储备液。

5.3 方法学考察

5.3.1 线性关系考察 精密吸取阿托品对照品储备液，加水配制成浓度为25.38、50.75、76.13、101.5、126.88、152.25、177.63、203 μg·mL-1的阿托品溶液，过滤后将其注入液相色谱仪，微孔滤膜参数为0.45 um，测定条件为“5.1”项下色谱。分别以對照品溶液浓度（X，ug·mL-1）以及峰面积积分值（Y）为横、纵坐标，将标准曲线制备出来，得回归方程： Y = 25136X – 885.19 ，r = 0.9999，表明在 20～200 ug·mL-1范围内硫酸阿托品显示的线性关系良好。

5.3.2 稳定性考察 取适量本品，参照“5.2.1”项下方法进行供试品溶液的制备，分别在 0、1、2、4、6、12、24 h小时以上述色谱条件为参考进样，对色谱图进行详细记录。结果显示硫酸阿托品峰面积RSD= 0.38% ，则表明在 24小时内样品有着良好的稳定性。

5.3.3 精密度考察 取适量相同的供试品溶液，进行连续六次进样，对硫酸阿托品峰面积进行测定。结果显示为RSD = 0.10% ，则表明仪器有着良好的精密度。

5.3.4 重复性考察 平行制备6份供试品溶液，方法以“5.1”项下为准，分别进样。结果显示硫酸阿托品峰面积RSD = 0.88% ，则表明方法有着良好的重复性。

5.3.5 回收率试验 硫酸阿托品对照品精密称取约 0.008g、0.01g和0.012g，不同克数各3份，将其分别置于容积为100 mL的量瓶中，按处方比例将适量处方量空白辅料加入其中，加水溶解，直至稀释到规定刻度，将其配制成模拟样品溶液，浓度分为低（80 %））、中（100 %）、高（120 %）三个等级。在液相色谱仪注入20 μL，回收率按外标法计算。结果，其平均回收率为102.32%，RSD = 0.91% ，说明该方法可行。回收率试验结果见表1。

6 讨论

因为硫酸阿托品分子结构中不存在共轭结构，紫外吸收不明显，鉴于此，参照相关规范[7]，在 210 nm 近紫外波长处对阿托品的含量进行检测，以便于紫外检测器检测。现行[8]的中和滴定法为规格不同的硫酸阿托品滴眼液的质量标准，中和滴定法的突出优势是所需设备仪器较少且操作简单，但缺陷是容易受到标准液、指示剂等的影响，导致结果RSD出现较大偏差。本课题考察了乙腈-庚烷磺酸钠磷酸盐溶液[9]作为流动相在不同比例时的色谱图，结果表明流动相18：82作为洗脱浓度，即可保证阿托品的分离效果不受其它溶剂和杂质峰的影响，各色谱峰之间的分离度较好，且基线平稳峰形较好。另外通过对流动相pH值的调节，使色谱峰峰形变锐，减小拖尾。本文所采用的方法通过方法学验证后，有着结果准确、灵敏、简便以及专属性好的特点，适用于测定0.01% 硫酸阿托品滴眼液的含量。

参考文献

[1] Gwiazda JE， Hyman L， Norton TT， et al. Accommodation and related risk factors associated with myopia progression and their inter-action with treatment in COMET children[J]. Invest phthalmol VisSci， 2004， 45： 2143-2151.

[2] 张世磊，贺艳丽. 眼用制剂中抑菌剂的应用[J]. 食品与药品2010，12（9）：343-345

[3] 催福德. 药剂学[M]. 人民卫生出版社560

[4] 国家药典委员会编. 中华人名共和国药典2015年版四部[M]. 中国医药科技出版社. 2015年：35，77，78， 136

[5] 湖南省医疗机构制剂规范[M]. 湖南科学技术出版社. 2016年：625

[6] 中国医院制剂规范（西药制剂） [S]. 第2版. 1995年：182

[7] 陈希， 张文婷. 硫酸阿托品注射液有关物质和pH值的相关性分析[J]. 今日药学，2016， 26 （2）：112-114