疣毒净制剂对高危型人乳头瘤病毒感染患者宫颈局部免疫细胞的影响

唐虹，龙泳伶，刘丽华，孙琼洋

1.广东省中医院，广东 广州 510120

2.广州中医药大学，广东 广州 510006

高危型人乳头瘤病毒(High risk-human papillomavirus，HR-HPV)持续感染是宫颈癌变的必要因素。HPV作为一种入侵的微生物病原体，感染后可通过人体自身的体液和细胞免疫应答而清除[1]。目前现代医学针对HPV多集中在对疫苗的研究，而广大已感染HR-HPV的患者尚缺乏有效的治疗措施[2]。疣毒净是广东省中医院的院内制剂，用于治疗因HPV导致的多种疾病，包括宫颈癌前病变、生殖器尖锐湿疣、皮肤扁平疣等，临床疗效显著[3～5]。肖静等[6]研究亦发现疣毒净制剂能清除宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)以下患者的HR-HPV，对宫颈病变程度也有明显的改善作用。本研究拟通过对HR-HPV感染患者疣毒净治疗前后宫颈局部免疫细胞的数量变化进行研究，探讨是否存在差异性，为疣毒净是否能改善HPV感染患者的细胞免疫功能提供实验数据，现总结报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2013年1月—2017年12月于本院妇科门诊行宫颈HR-HPV检测为阳性，阴道镜下宫颈活检病理诊断为HPV感染(SPI)、CINⅠ的70例病例，根据是否接受疣毒净制剂治疗而分为治疗组和对照组各35例。治疗组年龄23～46岁，平均(34.2±7.9)岁；对照组年龄22～47岁，平均(33.0±7.0)岁。2组年龄比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 诊断标准 HR-HPV(+)，CIN≤Ⅰ级。

1.3 纳入标准 年龄18～50岁，有性生活史的女性患者；符合诊断标准；患者未参加任何临床试验，未使用与试验药物类似疗效的药物；近期无生育要求；无重大脏器疾患；随访期间无阴道冲洗，性生活均使用避孕套；愿意配合治疗、随诊，并签署知情同意书。

1.4 排除标准 有外生殖器真菌、滴虫感染或其他合并症；孕妇；免疫功能异常患者；严重心血管疾病、肝肾疾病、造血系统疾病、全身慢性消耗性疾病患者；精神疾病、癔病患者；有药物过敏史或变态反应病史；CIN≥Ⅱ级。

2 研究方法

2.1 治疗组 月经结束3天后以10%疣毒净外洗液(广东省中医院自制，由紫草、虎杖、大青叶、板蓝根、苦参、黄柏等组成)冲洗阴道，抹干宫颈后使用疣毒净点涂霜(广东省中医院自制，由鸦胆子、紫草、莪术、明矾、细辛、白及等组成)点涂宫颈管内1 cm至鳞柱交界外侧0.3 cm，限制活动5 min后，再使用10%疣毒净外洗液冲洗阴道。每个月经周期中首周治疗3次，之后每周2次，连用3周，治疗3个月经周期，共19次。

2.2 对照组 宫颈不上药，研究进行期间房事需戴避孕套。

3 观察指标与统计学方法

3.1 观察指标 治疗前以及治疗3月结束后第1次月经干净3～7天行宫颈HR-HPV检测，行阴道镜下宫颈活检、颈管搔刮，将组织物送病理检测。查阅HPV检测报告、病理活检报告并记录。宫颈病变程度指标：好转：宫颈病变程度减轻(CINⅠ或HPV感染转为宫颈慢性炎)；维持：宫颈病变程度相同；恶化：宫颈病变程度加重。病理科调取入组患者宫颈组织活检的蜡块进行切片，免疫组化染色，测定宫颈活检组织中基底层及上皮层中的CD4+、CD8+细胞计数，计算CD4+/CD8+比值。

3.2 统计学方法 采用SPSS17.0软件统计数据。计量资料组内比较采用配对t检验，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

4 研究结果

4.1 2组HR-HPV转阴率比较 见表1。3月后，治疗组HR-HPV转阴率为74.3%，对照组HR-HPV转阴率为14.3%，2组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。

表1 2组HR-HPV转阴率比较 例(%)

4.2 2组宫颈活检结局比较 见表2。3月后，治疗组好转率为88.6%，对照组好转率为45.7%，2组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表2 2组宫颈活检结局比较 例(%)

4.3 2组宫颈组织中CD4+、CD8+细胞表达情况比较 见表3。3月后，治疗组宫颈组织CD4+细胞计数值较治疗前上升，差异有统计学意义(P＜0.05)，CD8+细胞计数值与治疗前比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。提示经疣毒净治疗后，宫颈局部的CD4+细胞增加，细胞免疫力增强。对照组CD8+细胞计数值与随访前比较有所增加，差异有统计学意义(P＜0.05)，CD4+细胞计数值与随访前比较稍有增高，但差异无统计学意义(P＞0.05)，提示随访期间，对照组宫颈局部的CD4+细胞增加幅度小，而CD8+细胞增多，细胞免疫力减弱。治疗组宫颈组织CD4+细胞计数值高于对照组，CD8+细胞计数值低于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。提示疣毒净能加强CD4+细胞在宫颈局部的聚集或迁移，同时抑制CD8+细胞的聚集，加强机体细胞免疫能力。

表3 2组宫颈组织中CD4+、CD8+细胞表达情况比较(±s)个

表3 2组宫颈组织中CD4+、CD8+细胞表达情况比较(±s)个

与本组治疗前/随访前比较，①P＜0.05；与对照组随访后比较，②P＜0.05

治疗组 对照组时 间治疗前/随访前治疗后/随访后C D 4+1 6 2.4±4.8 1 9 2.2±4.4①②C D 8+4 9.4±6.4 3 8.6±5.3②C D 4+1 6 3.3±5.8 1 6 7.8±5.3 C D 8+4 1.1±5.9 8 1.7±1 2.7①

4.4 2组宫颈组织CD4+/CD8+比值比较 见表4。3月后，治疗组宫颈组织CD4+/CD8+比值≥1的病例数多于对照组，差异有统计学意义(P＜0.01)。

表4 2组宫颈组织CD4+/CD8+比值比较 例(%)

5 讨论

HR-HPV的持续感染会导致宫颈癌前病变及浸润癌的发生。感染HPV之后，大部分的患者可通过自身免疫清除，而免疫功能较差的患者则可能持续感染甚至发生宫颈病变。正常人群清除HPV的时间，低危型平均需要5～6月，高危型平均需要 8～14 月[7]。

HR-HPV感染是现代医学疾病名称，可归属于中医学带下病的范畴。病因主要为风邪、湿热、寒邪、痰湿、生活因素等。而湿热则为带下病主要的致病因素，清热祛湿解毒为其主要治则。疣毒净外洗液中的紫草、虎杖、大青叶可清热凉血，黄柏、苦参、板蓝根可清热燥湿解毒，全方有清热祛湿解毒之效，能有效改善阴道微环境。而疣毒净点涂霜中的紫草清热凉血，莪术破血祛瘀，细辛祛风散寒，均有清热祛湿解毒之效，因疣毒净点涂霜内含有的鸦胆子有腐蚀赘疣的作用，故上药时间不宜超过5～10 min，后需使用疣毒净洗剂或其他灭菌注射用水清洗，以防灼伤宫颈。同时，药方中加入的明矾、白及均可起收敛止血、消肿生肌的作用。陶萍萍等[8]将清热解毒制剂(包含白花蛇舌草、苦参、大青叶、黄柏、鸦胆子等)作用于宫颈局部来治疗宫颈HPV感染，结果显示不仅能够增加HPV清除率，还能上调Th1分泌的细胞因子，增强免疫力。本研究结果显示，使用疣毒净治疗3月后，治疗组HR-HPV清除率达到74%，远远高于对照组，同时宫颈病理学结果也有明显的改善。

在清除HPV的过程中，细胞免疫起到关键作用。细胞免疫由T淋巴细胞介导，成熟T淋巴细胞分为CD4+T淋巴细胞或CD8+T淋巴细胞，淋巴细胞亚群之间的平衡是免疫监视、免疫防御、稳定发挥机体免疫功能的必备条件。CD4+/CD8+比值的正常范围为1.2～1.9，一旦打破这种平衡，机体就容易被病原菌所感染，其比值低于1提示免疫功能低下或免疫功能处于抑制状态，可能引起肿瘤的发生[9]。黄志欣等[10]报道保妇康栓能有效抑制HPV，可能是通过提高宫颈局部的细胞免疫功能起效，治疗后CD4+细胞阳性率上升，CD8+细胞阳性率下降，从而发挥抑制病毒作用。本研究结果显示，疣毒净治疗后，治疗组宫颈组织中的CD4+细胞数较治疗前增高(P＜0.05)，但CD8+细胞数没有明显的变化；对照组CD8+细胞数值较随访前升高(P＜0.05)；治疗组宫颈组织CD4+/CD8+比值≥1的病例数多于对照组(P＜0.01)。因此，疣毒净可能的作用机制是通过增加CD4+细胞表达，进而提高CD4+/CD8+比值，起到改善机体细胞免疫功能的作用。

综上所述，采用疣毒净制剂治疗宫颈HPV感染疗效明显，可有效提高HPV转阴率和宫颈病变的组织学疗效，作用机制可能与增强机体的细胞免疫功能有关，是防治HPV感染有效的中医药疗法。