骨磨片受损原因分析及修复方法改进

王凤琴 刘 冰

(济宁医学院基础医学院,济宁医学院康复医学院，济宁 272067)

骨磨片是组织学实验教学必须观察的标本，然而在使用过程中，这些标本常出现不同程度的损坏现象，如载玻片被打碎、盖玻片出现裂纹、固定不牢而掉落、盖玻片下有空气进入，甚至盖玻片及骨组织滑落到载玻片边缘等。本文在传统方法的基础上，改进受损骨磨片标本的修复方法。报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

受损的骨磨片标本50张；无水乙醚(天津富宇精细化工有限公司)；中性树胶(国药集团化学试剂有限公司)；无水乙醇(莱阳经济技术开发区精细化工厂)；二甲苯(天津富宇精细化工有限公司)；火棉胶(天津大茂化学试剂厂)。

1.2 修复方法

1.2.1浸泡 将受损的空气封固法骨磨片标本放入盛有无水乙醚的染色缸内浸泡并随时观察，染色缸上用数层纱布覆盖；经镀银染色、大力紫及酸性复红染色的受损骨磨片放入溶剂为二甲苯的染色缸内，一旦有骨磨片自然脱落，把其余未脱落的受损骨磨片放入与以上溶剂相同的染色缸内。待骨磨片自然脱落后，将纱布连同脱落掉的骨磨片放到相适应的滤纸上，使之充分干燥。用压嘴镊子将骨磨片轻轻推到清洁后载玻片常规位置，显微镜下检查，使骨磨片结构最清晰的一面向上。

1.2.2火棉胶镀膜 将2%火棉胶液(火棉胶2g,100ml无水乙醇，)与等份的无水乙醚充分搅匀，使其完全溶解，放入棕色瓶子，拧紧瓶盖，于37℃温箱存放。用小玻璃棒蘸一滴2%火棉胶液置清洁后或免洗的载玻片的适当位置，用眼科镊子尖部蘸一点火棉胶液，粘贴已脱落的干燥骨磨片,迅速埋入火棉胶液中，静置10min后待火棉胶液中无水乙醇与乙醚完全挥发风干，使埋入的骨磨片与载玻片紧密相连，且骨磨片表面镀上一层薄火棉胶膜。

1.2.3封片 在已镀膜的骨磨片表面滴适当中性树胶液，再加盖玻片即可[1]。

2 结果

与修复前相比，修复后的骨磨片标本美观、整洁、完整。光镜下骨单位的同心圆结构及骨小管的放射状结构清晰可辨。见图1。

注：a.未修复前(光镜，100×);b.修复后(光镜，100×)

3 讨论

传统的骨磨片修复仅限于摔破载玻片标本，用玻璃刀将受损骨磨片标本的载玻片两侧修理整齐，取一滴中性树胶滴到清洗干净的载玻片合适位置，放上修整后的骨磨片，因磨片位置附近有两层载玻片，厚度是2～3mm，较厚，低倍镜下观察清晰，高倍镜下分辨不清，这样修复的标本既不美观，又影响实验教学质量。改进后的方法适于任何一种受损或影响镜下观察的骨磨片。正常骨磨片厚约40～50μm，是切片的6～10倍，因其自身较厚，经无水乙醚、二甲苯浸泡自然脱落的骨磨片舒展而不皱缩，染色缸上用纱布覆盖，便于捞起、保护脱落的骨磨片[2]。

空气封固法骨磨片，不能用含有二甲苯液体树胶封片，因树胶中的二甲苯使骨小管骨陷窝透明，骨组织结构不清晰[3]。在修复受损骨磨片时，需用无水乙醚浸泡，因无水乙醚既能使受损的骨磨片自然脱落，又不能使空气封固法制作的骨磨片变得透明。封片时，先用2%火棉胶液镀膜，因火棉胶不溶于二甲苯，镀膜后再用中性树胶封片，树胶中的二甲苯不能渗入到骨组织中，所以骨组织的各种结构在显微镜下较为清晰[4]。大力紫、酸性复红、镀银染色的受损骨磨片修复时可用二甲苯浸泡、常规中性树胶封片，二甲苯不会影响其组织结构[5-6]。

骨磨片的制作，首先取新鲜长骨经固定液固定，用细钢锯锯成4～5mm左右完整的环状骨片，然后用打磨机将骨片磨至1～2mm左右，再改用细磨石研磨，在取材、打磨、细磨的过程中，用力要适中均匀，不能过猛，否则会造成骨片锯断、碎裂[7]。骨片磨至100～150μm左右时，投入染色液染色，染色后的骨片在细磨石上继续研磨，因此时骨片非常薄，更需用力均匀，操作轻巧，否则骨片破碎或厚薄不均。磨至40～50μm时，显微镜下检查骨磨片厚薄、形态结构、背景符合要求后，再常规封片[8]。

由此可见，骨磨片制作步骤较繁琐，所需时间较长。在组织学实验教学过程中，无论骨磨片出现何种受损情况，经以上方法修复后，其形态结构与新制作的骨磨片一样，可继续用于实验教学。