LRIG1及Fascin-1在非小细胞肺癌中的共表达及其临床意义

房艳红，张晓乐，刘绪艳，张学军，李 毅，袁海红

(天津市武清区医院，天津 301700)

目前对于肺癌发生、发展、侵袭转移及预后相关因素的研究较多。近年来随着分子生物学研究的不断进步，越来越多的蛋白因子被发现并且被证实其表达水平与患者的临床病理特征及预后存在相关性，如表皮生长因子、血管内皮生长因子等。近年来研究发现Fascin-1及LRIG1蛋白在多种实体肿瘤组织中呈现高表达，如肺癌、肠癌、肝癌、前列腺癌等，并与患者的临床病理特征存在一定的关系[1-3]。但关于Fascin-1及LRIG1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织、癌旁组织中的阳性表达情况是否存在差异，其与患者临床特征如年龄、性别、分期、肿瘤分级和转移等相关性的研究报道较少。因此，本文回顾性分析了98例NSCLC患者的临床资料，探讨Fascin-1及LRIG1蛋白在癌/癌旁组织中的表达情况及其与患者临床特征的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取我院和天津市胸科医院2009年～2015年手术治疗的非小细胞肺癌患者为研究对象。纳入标准：①术后组织病理学标本确诊为非小细胞肺癌患者；②患者术前未接受任何新辅助放疗、化疗或生物治疗；③术后患者有相对完整的随访资料；④患者组织标本经其家属或本人同意并签署知情同意书；⑤经本院医学伦理委员会讨论通过，同意实施该研究。排除标准：①其他组织病理类型肺癌患者；②术前接受新辅助治疗者；③合并其他系统恶性肿瘤者；④术后随访数据或临床数据不完整者。

1.2仪器及试剂：石蜡切片机(购自德国徕卡公司)、显微镜(购自日本奥林巴斯公司)、电热恒温箱(上海荣珂检测仪器有限公司生产)、微波炉(购自革格兰仕公司)，低速离心机(购自美国贝克曼公司)。鼠抗人Fascin-1单克隆抗体(SPM133)，拟购自美国Santa Cruz公司；鼠抗人LRIG1单克隆抗体(Ab36704)，拟购自英国Abcam公司；即用型免疫组织化学法试剂盒，拟购自生工生物工程(上海)股份有限公司；DAB显示试剂盒，拟购自北京索莱宝科技有限公司。二抗(羊抗兔IgG)，拟购自美国Santa Cruz公司。

1.3LRIG1及Fascin-1蛋白表达水平检测：石蜡切片脱蜡水化，蒸馏水浸泡冲洗后行抗原修复，PBS冲洗后滴加动物非免疫血清，室温孵育10 min后倾去。滴加一抗，室温孵育60 min，阴性对照用PBS代替。PBS冲洗后，滴加生物素标记的二抗，室温孵育10 min。PBS冲洗干净后滴加链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温孵育30 min。PBS冲洗，DAB显色剂显色，中性树胶封片[4-5]。

1.4阳性判断标准：采用双盲法对染色结果进行判定，在400倍显微镜下每张载玻片计数10个视野，计数每个视野中细胞总数及Fascin-1、 LRIG1阳性的细胞数。阳性细胞的百分比判断标准：0%～5%之间为阴性表达；6%～25%为弱阳性；26%～75%为中度阳性；>76%为强阳性，弱阳性、中度阳性和强阳性定义为阳性结果。

2 结果

2.1LRIG1及Fascin-1蛋白表达情况：LRIG1蛋白阳性表达主要见于肺癌细胞核，呈棕褐色颗粒染色，均匀分布(见图1)；Fascin-1蛋白主要表达与肺癌细胞胞质和细胞膜，呈棕黄色颗粒状，弥漫分布于细胞膜及细胞包浆内(见图1)。

图1 Fascin-1和LRIG1在NSCLC患者癌中的表达：① Fascin-1阴性;②Fascin-1阳性;③LRIG1阴性;④LRIG1阳性

2.2癌组织与癌旁组织中LRIG1及Fascin-1蛋白阳性率比较：LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC患者癌组织中的阳性表达率分别为56.12%和72.45%,而在癌旁组织中的阳性表达率分别为80.61%和16.33%,LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC患者癌组织/癌旁组织中阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05),表1。

表1NSCLC患者癌组织/癌旁组织中LRIG1及Fascin-1蛋白阳性率比较[例(%)]

蛋白癌组织(n=98) 阳性 阴性 癌旁组织(n=98) 阳性 阴性 LRIG155(56.12)①45(43.88)79(80.61)19(19.39)Fascin-171(72.45)①27(27.55)16(16.33)82(83.67)

注：与癌旁组织阳性表达比较，①P<0.05

2.3LRIG1及Fascin-1蛋白表达与NSCLC患者临床病理特征关系：LRIG1蛋白在癌组织中的阳性表达与NSCLC患者的临床分期、病理分型及纵膈淋巴结转移有关(P<0.05)；Fascin-1蛋白在癌组织中的阳性表达与NSCLC患者的临床分期、肿瘤大小和纵膈淋巴结转移均有关(P<0.05)。详见表2。

表2LRIG1及Fascin-1蛋白表达与NSCLC患者临床病理特征关系[例(%)]

项目例数Fascin-1阳性(n=71)P值LRIG1阳性(n=55)P值性别 男性6044(61.97)>0.0535(63.64)>0.05 女性3827(38.03)20(36.36)年龄>0.05>0.05 ≤60岁3626(36.62)21(38.18) >60岁6245(63.38)34(61.82)临床分期<0.05<0.05 Ⅰ/Ⅱ期6952(73.24)44(80.00) ⅢA期2919(26.76)11(20.00)肿瘤大小<0.05>0.05 ≤5 cm7055(77.46)38(69.09) >5 cm2816(21.54)17(30.91)病理类型>0.05<0.05 腺癌5036(50.70)26(47.27) 鳞癌3929(40.85)25(45.45) 其他96(8.45)4(7.27)病理分级>0.05>0.05 高分化3926(36.62)22(40.00) 中分化3224(33.80)21(38.18) 低分化2721(29.58)12(21.82)胸水>0.05>0.05 无8060(84.51)45(81.82) 有1811(15.49)10(18.18)纵膈结转移>0.05<0.05 无3121(29.58)19(34.55) 有6750(70.42)36(65.45)

3 讨论

近年来，随着我国人口老龄化的加剧及吸烟人数的上升，肺癌的发病率呈现出明显的上升趋势。肺癌已成为目前发病率和死亡率最高的恶性肿瘤[6-7]。在我国，每年因肺癌死亡的人数高达数十万人，2008年卫生部公布的《居民死亡原因调查报告》显示，肺癌已成为我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。但肺癌的发病原因目前仍未完全明了，大多数研究认为与患者的遗传背景和后天环境因素有关。遗传背景包括恶性肿瘤家族史、某些代谢酶基因多态性等[8]，后天因素主要与吸烟、环境污染等因素有关。但肺癌发生的机制十分复杂，其确切发病分子机理仍不完全明了。因此，探寻肺癌的发生、发展、侵袭及转移的分子机制，为肺癌进一步治疗提供新的思路和新的靶点成为研究热点[9]。

关于LRIG1及Fascin-1在非小细胞肺癌中的共表达及其临床意义的文献报道较少，上述两个蛋白因子表达水平与患者临床病理特征及预后的关系并不十分明确。因此，本研究采用免疫组织化学SP法对非小细胞肺癌患者癌组织和癌旁肺组织中LRIG1及Fascin-1的表达水平进行检测，并探讨其表达与患者临床病理特征及预后的关系。研究发现，LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC患者癌组织/癌旁组织中阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)；LRIG1蛋白在癌组织中的阳性表达与NSCLC患者的临床分期、病理分型和纵膈淋巴结转移均有关(P<0.05)；Fascin-1蛋白在癌组织中的阳性表达与NSCLC患者的临床分期、肿瘤大小和纵膈淋巴结转移均有关(P<0.05)。研究认为，LRIG1及Fascin-1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织/癌旁组织中存在差异表达，并与患者的临床分期、肿瘤大小及纵膈淋巴结转移存在相关性。

但该研究纳入的患者例数较少，统计学效能不高，下一步应加大样本量进行进一步的研究，明确LRIG1及Fascin-1蛋白在NSCLC发生发展中的作用及其分子机制，为临床NSCLC诊治提供更为可靠的依据。