miR-143、miR-145在胰腺癌患者血清中的表达情况及与患者临床参数的相关性分析

郭飞波 韩利蓉 余 卉 陈玫君 宋 瑛

(湖北省天门市第一人民医院检验科，天门431700)

胰腺癌(Pancreatic cancer,PC)为消化系统常见恶性肿瘤，侵袭性高、进展快速，患者预后效果差，死亡率高，2012年流行病学研究新发现胰腺癌病例8.6万，而死亡病例高达7.7万[1]。近年来，我国胰腺癌的发病率和死亡率也呈现逐年上升趋势，外科手术虽然可以有效根除，但只适用于胰腺癌早期患者。microRNA(miRNA)是一类由内源基因编码，长度约为19～25个核苷酸的非编码单链RNA分子，在维持人机体健康中发挥着重要作用[2]。研究发现，在胃癌、直肠癌、食管癌、膀胱癌和胰腺癌患者中，miR-143、miR-145在血清中的表达异常，其在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用[3]。因此，其调控异常被临床广泛认为是肿瘤发生的早期信号。本研究通过检测胰腺癌患者血清中的miR-143、miR-145表达，并与健康对照组进行比较，探讨胰腺癌患者miR-143、miR-145表达与健康对照组的差异，并分析胰腺癌患者血清中miR-143、miR-145表达与其临床参数的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取我院2016年8月～2017年12月收治的98例胰腺癌患者作为胰腺癌组，患者均通过术后病理检查或胰腺穿刺活检确诊为胰腺癌，另选同期来我院健康体检者50例作为健康对照组。胰腺癌组中，男80例，女18例，年龄32～75岁，平均年龄(57.57±6.25)岁，癌抗原125(CA125) 20.46～42.74 U/ml，平均(29.55±4.15)U/ml；癌抗原199(CA199)6.23～832.45 U/ml，平均(259.58±36.26)U/ml；癌抗原153(CA153)9.42～24.25 U/ml，平均(13.74±3.18)U/ml；T分期：T1期8例，T2期23例，T3期31例，T4期36例；N分期：N0期40例，N1期58例；M分期：M0期45例，M1期53例；肿瘤直径1.7～6.5 cm，平均(3.03±0.52)cm；肿瘤部位：胰体头部48例，胰体尾部50例。健康对照组中，男40例，男10例，年龄30～78岁，平均年龄(58.13±7.12)岁，两组受试者性别、年龄一般资料比较差异无显著统计学意义(P>0.05)。本研究受试者均知情同意，研究获得医院伦理委员会审批。

1.2治疗 所有患者均接受立体定位放疗，在CT扫描基础上规划放疗的区域，针对原发肿瘤病灶及转移病灶，外扩约1.0 cm，最大限度地将放射剂量集中到病变区(靶区)内进行放疗，6 Gy/次，5次/周，总剂量不超过72 G。

1.3方法 采集所有入组对象的晨起空腹静脉血4 ml，采血后立即送检，在3 000 r/min离心处理后，用无RNA酶的2 ml EP管采集上清液，并将标本置于-80℃冰箱保存，胰腺癌组治疗后再收集空腹静脉血。根据miRcute miRNA 增强型提取分离试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司生产]要求和步骤提取总miRNA，转录为cDNA后，采用荧光定量PCR反应体系检测受试者血清中miR-143和miR-145表达，试剂为miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒，由天根生化科技(北京)有限公司提供。

2 结果

2.1胰腺癌组患者血清miR-143和miR-145指标与其他肿瘤标志物水平相关性 将miR-143和miR-145指标作为因变量，将肿瘤指标miR-143、miR-145、CA125、CA153和CA199作为自变量，进行Pearson相关性分析，发现胰腺癌组患者血清miR-143、miR-145与肿瘤标志物CA125、CA153和CA199无相关性(P>0.05)，但miR-143和miR-145有显著相关性(P<0.05)。见表1。

2.2胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表达与临床参数关系 胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表达与性别、年龄、T分期、N分析、M分期、肿瘤部位和肿瘤直径比较无显著差异(P>0.05)。见表2。

2.3胰腺癌患者年龄、性别、miR-143、miR-145与胰腺癌发病的Logistics回归分析 将胰腺癌患者年龄、性别、miR-143、miR-145与胰腺癌发病的Logistics回归分析，发现年龄、性别、miR-145与胰腺癌发病无密切关系(P>0.05)，血清miR-143为胰腺癌的保护因素(P<0.05)。见表3。

2.4胰腺癌组治疗前后和健康对照组血清miR-143和miR-145表达水平对比 化疗后，无1例患者死亡。与健康对照组比，胰腺癌组血清miR-143和miR-145表达水平显著降低(P<0.05)；与治疗前比，治疗后胰腺癌组血清miR-143和miR-145表达水平显著提高(P<0.05)，但与健康对照组比仍然较低(P<0.05)。见表4。

表1胰腺癌组患者血清miR-143和miR-145指标与其他肿瘤标志物水平相关性分析

Tab.1CorrelationbetweenserummiR-143andmiR-145markersandothertumormarkerinpatientswithpancreaticcancer

ProjectCA125CA153CA199miR-143miR-145miR-143r=0.104r=0.095r=-0.130r=1r=0.875P=0.563P=0.632P=0.485P=0P=0.000miR-145r=0.092r=0.104r=-0.213r=0.875r=1P=0.614P=0.527P=287P=0.000P=0

表2胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表达与临床参数关系

Tab.2RelationshipbetweenserummiR-143andmiR-145expressionandclinicalparametersinpatientswithpancreaticcancer

Clinical pathologicalparametersCasesmiR-143tPmiR-145tPTotal980.321±0.052--0.473±0.057--SexMale800.320±0.0630.5080.6180.476±0.0631.0110.326Female180.328±0.0540.460±0.056Age≥60 year760.317± 0.0461.5250.1420.475±0.0650.6040.553<60 year220.336± 0.0660.466±0.046T stagingT1-T2310.325±0.0460.4460.6570.459±0.0561.8470.069T3-T4670.320± 0.0600.479±0.049N stagingN0400.334±0.0571.9420.0570.487±0.0511.9270.059N1580.313±0.0510.463±0.064M stagingM0450.327±0.0521.0520.2980.462±0.0531.7480.086M1530.316±0.0540.482±0.061Tumor sitePancreatic head480.325±0.0580.6150.5410.485±0.0641.9520.057Pancreatic tail500.318±0.0490.461±0.055Tumor diameter≥3.6 cm380.317±0.0450.5620.5760.462±0.0451.5390.129<3.6 cm600.324±0.0600.480±0.062

表3胰腺癌患者年龄、性别、miR-143、miR-145与胰腺癌发病的logistics回归分析

Tab.3Regressionanalysisofage,sex,miR-143,miR-145andincidenceofpancreaticcancerinpatientswithpancreaticcancer

ProjectβWald valueP valueOR value95%CIAge0.5321.9580.1561.0430.954-1.132Sex-1.4033.2850.0650.2180.231-0.052miR-143-1.3104.3620.0320.2570.073-0.915miR-1450.4321.1200.2510.6320.221-1.430Constant-2.0372.6010.1070.130-2.037

表4胰腺癌组治疗前后和健康对照组血清miR-143和miR-145表达水平对比

Tab.4ComparisonofserummiR-143andmiR-145express-ionlevelsinpatientswithpancreaticcancerbeforeandaftertreatmentandhealthycontrol

GroupsnmiR-143miR-145Healthy control group500.535±0.1520.711±0.202Before treatment inpancreatic cancer group980.321±0.0521)0.473±0.0571)After treatment inpancreatic cancer group980.421±0.1041)2)0.597±0.1541)2)F-77.64152.323P-0.0000.000

Note：Compared with the healthy control group,1)P<0.05；compared with the before treatment in pancreatic cancer group,2)P<0.05.

3 讨论

胰腺癌在全世界范围内癌症发病率中位居第13位，死亡率位居第8位，其发病率和死亡率在世界范围内均在不断增加[4]。尽管当前外科手术、放射、化疗等治疗方法取得了一些进展，但胰腺癌患者总生存率仍然在5%以下。因此，探寻胰腺癌的发病机制，对于提高胰腺癌防治水平，延长患者生存期和降低死亡率具有重要的现实意义。近年来有诸多研究显示，肿瘤细胞miRNA突变、异常表达会导致细胞去分化、肿瘤发生、侵袭或肿瘤细胞转移[5]。诸多的miRNA基因位于基因组中经常发生变异的区域，miRNA也与其他蛋白编码基因一样，会发生各种结构变化，其在生物合成的过程中，受到多种蛋白酶的影响，若蛋白酶的结构和功能发生变化，也会引起miRNA表达水平相应改变，并参与肿瘤发生过程[6]。Calin等[7]在2002年首次报道了miRNAs中的miR-15和miR-16参与了慢性淋巴细胞白血病的发病过程。近年来，随着研究的深入，miRNA在肿瘤中也被广泛报道，其在肿瘤研究领域也取得了越来越多的关注，其中肿瘤抑制基因miR-143和miR-145在消化系统肿瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、宫颈癌以及胰腺癌等恶性肿瘤形成途径中被广泛研究[8]。

miR-143和miR-145基因均位于染色体5q32，在染色体上位置接近，表达水平呈同步性改变，在多种细胞和组织中共同表达，构成miR-143/145簇，在相同的生理和病理过程中发挥着相似的作用[9]。国外研究显示，miR-143和miR-145在胰腺癌中表达存在差异，Kras基因的激活后，会下调多种胰腺癌细胞模型中miR-143/145簇水平，介导Kras转化的必要条件是下调miR-143和miR-145表达，恢复其表达，则可阻止肿瘤的发生和发展[10]。本课题结果显示，胰腺癌患者接受立体定位放疗后，外周血miR-143和miR-145明显增高，临床症状有一定改善，可见外周血miR-143和miR-145在阻滞胰腺癌发生发展方面具有重要作用。Pramanik等[11]构建质粒NDA复合载体，将含有miR-143/145的表达载体转运到胰腺癌细胞MiaPaCa-2后，可抑制胰腺癌细胞MiaPaCa-2在皮下移植瘤生长的效应，全身给药后，可让肿瘤细胞中的miR-143/145表达恢复，从而发挥抑制机体内相应细胞基因RREB1和KRAS2，介导肿瘤细胞生长抑制、增殖减少、凋亡增加等作用，该研究结果为胰腺癌的治疗提供了新途径。

研究显示，miR-143和miR-145在小肠、胃部、宫颈、前列腺和子宫正常组织中高表达，在胎盘、脾脏、睾丸、肾脏、骨骼肌等正常组织中表达降低[12]。以往研究还发现，miR-143和miR-145在多种消化系统肿瘤组织中低表达[13]。孙兴邦等[14]采用Real-time PCR检测胃癌组织中的miR-143和miR-145表达量，发现其均低于癌旁组织中的表达。王志红等[15]研究发现胰腺癌癌组织中miR143的表达阳性率为25.71%，低于胰腺癌癌旁组织的68.57%。虽然上述研究均证实了miR-143和miR-145在胰腺癌的发生和发展中具有重要作用，但从胰腺癌组织中获取miR-143和miR-145相对较难，限制了miR-143和miR-145在临床中的研究。在本研究中，采用荧光定量PCR检测法检测胰腺癌血清中的miR-143和miR-145含量，并与健康对照组进行比较，亦发现了胰腺癌组患者血清miR-143和miR-145表达低于正常健康者。Pearson相关性分析发现，胰腺癌组患者血清miR-143、miR-145与肿瘤标志物CA125、CA153和CA199无相关性，但miR-143和miR-145有显著相关性，可能是miR-143和miR-145在染色体上的位置相近，距离只有2 kb，两者共同表达引起。进一步分析发现，胰腺癌组患者血清中的miR-143和miR-145表达与性别、年龄、T分期、N分析、M分期、肿瘤部位和肿瘤直径比较无显著差异，血清miR-143为胰腺癌的保护因素，这与既往研究结果一致。

综上所述，胰腺癌患者血清中miR-143和miR-145表达水平低于健康者，且两者呈正相关关系，miR-143为胰腺癌发病的保护因素；胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表达水平与胰腺癌患者性别、年龄、TNM分期、肿瘤部位和肿瘤直径无显著相关性。